一种海葵多肽毒素Ap-GT及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供一种海葵多肽毒素Ap

【技术实现步骤摘要】
一种海葵多肽毒素Ap
‑
GT及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及海葵
，特别涉及一种海葵多肽毒素Ap
‑
GT及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]海葵(Sea Anemone)又名海菊花，隶属于刺胞动物门、珊瑚虫纲、六放珊瑚亚纲。海葵是最原始的后生动物类群之一，也是现存最古老的有毒海洋动物之一，有分子证据和化石资料表明海葵最早起源于7.5亿年前。海葵种类繁多，在全球已记录海葵目1100余种，分属于50科约400属，而中国海葵物种约占世界的1/10，广泛分布在温热带和热带海域。海葵触手上具有刺细胞能够分泌毒液捕食鱼、贝类、桡足类、甲壳类动物以及蠕虫，其毒液中富含各种多肽毒素成分，是重要的海洋药物资源。《中华本草》和《中国药用动物志》记载海葵具有收敛固涩、燥湿杀虫等功效，中医用来治疗脱肛、痔疮、绕虫病等。Salgado VL等研究发现ShI、CpI和CgII三种海葵毒素对甲壳类动物特别致命，对昆虫(蟑螂)有中等毒性，对哺乳动物(小鼠)基本上无毒。ATX
‑
I和ATX
‑
II对昆虫钠通道非常有效，与蟑螂神经膜结合亲和力高，而对大鼠脑突触体的结合亲和力低，所以ATX
‑
I和ATX
‑
II优先瞄准昆虫而不是老鼠。某些海葵毒素能够特异作用于昆虫而具有较强的杀虫能力，而对哺乳动物的毒性很小或无毒副作用。海葵多肽毒素作为新型杀虫剂安全又有效。CN111876457A公开套膜海葵酶解多肽的制备及其杀虫应用，为套膜海葵的提取物，为多种序列多肽的混合物，不好以控制成分组成，均不利于提高药剂药效以及安全性。

技术实现思路

[0003]鉴于此，本专利技术提出一种海葵多肽毒素Ap
‑
GT及其制备方法和应用，解决上述技术问题。
[0004]本专利技术的技术方案是这样实现的：一种海葵多肽毒素Ap
‑
GT，
[0005]其序列为GIDCTCNGHNGEYWFGVQSCNGNAKHDCSSILGRCCVY，具有6个半胱氨酸，形成3个二硫键。
[0006]2、根据权利要求1所述的海葵多肽毒素Ap
‑
GT的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
[0007](1)取2
‑
cl树脂，用DCM浸泡、洗涤；加入Fmoc
‑
Tyr(tbu)
‑
OH，加入DCM和DIEA反应，再加入甲醇和DCM封闭反应；
[0008](2)用DMF洗涤步骤(1)处理后的树脂，加入哌啶脱除Fmoc，反应后再洗涤树脂；
[0009](3)取下一个氨基酸Fmoc
‑
VAL
‑
OH和HOBT，加入DMF和DIC反应，反应后再洗涤树脂；
[0010](4)用DMF洗涤步骤(3)处理后的树脂，加入哌啶脱除Fmoc，反应后再洗涤树脂；
[0011](5)重复(3)，(4)步骤直到肽链结束；
[0012](6)取步骤(5)得到的树脂，加入切割液，摇晃切割，过滤除去树脂，得到切割后的滤液，最后将滤液加入冰乙醚，离心，收集底部多肽，得到粗品多肽；
[0013](7)将粗品多肽用HPLC分离纯化多肽，干燥，得到线性肽Ap
‑
GT；
[0014](8)取步骤(7)得到的线性肽Ap
‑
GT进行氧化折叠，得到氧化肽Ap
‑
GT，采用制备型HPLC对氧化肽Ap
‑
GT进行分离纯化，得到纯品。
[0015]进一步的，步骤(1)，所述2
‑
cl树脂的取代度Sd＝0.2mmol/g。
[0016]进一步的，步骤(1)，加入DCM、DIEA反应的时间为80
‑
100min，再加入甲醇、DCM封闭反应的时间20
‑
40min。
[0017]进一步的，步骤(2)、步骤(4)，所述反应的时间均为15
‑
25min。
[0018]进一步的，步骤(3)，加入DIC反应的时间为0.8
‑
1.2h。
[0019]进一步的，步骤(6)，按质量百分比计，所述切割液由三氟乙酸95％、水1％、3,4
‑
乙烯二氧噻吩2％和三异丙基硅烷2％制得。
[0020]进一步的，步骤(6)，所述切割的时间为1.8
‑
2.2h。
[0021]进一步的，步骤(6)，所述离心条件：3000转/min离心2min。
[0022]本专利技术任一项所述的海葵多肽毒素Ap
‑
GT在制备杀虫剂中的应用。
[0023]本专利技术中使用原料中文名称见下表1：
[0024]表1化合物中文名称
[0025][0026]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
[0027](1)本专利技术合成的海葵多肽毒素Ap
‑
GT，其序列为GIDCTCNGHNGEYWFGVQSCNGNAKHDCSSILGRCCVY，对黄粉虫具有更加显著杀虫作用，半数致死剂量为14.8nM。
[0028](2)本专利技术合成特定序列的海葵多肽毒素Ap
‑
GT，在应用中不但能够有效控制其添加量，而且最大发挥其功效，减少药剂用量，最大化提高安全性。
[0029](3)本专利技术获得高效杀虫效果而对哺乳动物毒性小的海洋多肽，可为研发新型、高效、安全生物杀虫剂奠定基础。
附图说明
[0030]图1
‑
A、图1
‑
B为线性肽Ap
‑
GT的高效液相分析和质谱鉴定图谱；
[0031]图2为线性肽Ap
‑
GT的动态氧化折叠过程；
[0032]图3为HPLC分析氧化肽Ap
‑
GT图谱；
[0033]图4多肽Ap
‑
GT对黄粉虫的杀虫作用，注：实验组对比于阴性对照组，*表示具有显著性差异(**p<0.01；***p<0.001)。
具体实施方式
[0034]为了更好理解本专利技术
技术实现思路
，下面提供具体实施例，对本专利技术做进一步的说明。
[0035]本专利技术实施例所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0036]本专利技术实施例所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0037]实施例
[0038]1.材料与方法
[0039]1.1实验材料
[0040]色谱级三氟乙酸(Trifluoroacetic acid，TFA)和色谱级乙腈(Acetonitrile，ACN)购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；water分析型C18柱(5μm，4.6mm
×
250mm)购自美国Waters公司；依利特制备型C18柱(1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种海葵多肽毒素Ap
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GT，其特征在于，其序列为GIDCTCNGHNGEYWFGVQSCNGNAKHDCSSILGRCCVY，具有6个半胱氨酸，形成3个二硫键。2.根据权利要求1所述的海葵多肽毒素Ap
‑
GT的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取2
‑
cl树脂，用DCM浸泡、洗涤；加入Fmoc
‑
Tyr(tbu)
‑
OH，加入DCM和DIEA反应，再加入甲醇和DCM封闭反应；(2)用DMF洗涤步骤(1)处理后的树脂，加入哌啶脱除Fmoc，反应后再洗涤树脂；(3)取下一个氨基酸Fmoc
‑
VAL
‑
OH和HOBT，加入DMF和DIC反应，反应后再洗涤树脂；(4)用DMF洗涤步骤(3)处理后的树脂，加入哌啶脱除Fmoc，反应后再洗涤树脂；(5)重复(3)，(4)步骤直到肽链结束；(6)取步骤(5)得到的树脂，加入切割液，摇晃切割，过滤除去树脂，得到切割后的滤液，最后将滤液加入冰乙醚，离心，收集底部多肽，得到粗品多肽；(7)将粗品多肽用HPLC分离纯化多肽，干燥，得到线性肽Ap
‑
GT；(8)取步骤(7)得到的线性肽Ap
‑
GT进行氧化折叠，得到氧化肽Ap
‑
GT，采用制备型HPLC对氧化肽Ap
‑
GT进行分离纯化，得到纯品。3.根据权利要求2所述的海葵多肽毒素Ap
‑
GT的制备方法，其特征在于，步骤(...

【专利技术属性】
技术研发人员：高炳淼，符金星，廖燕玲，吴鑫福，
申请(专利权)人：海南医学院，
类型：发明
国别省市：