本发明专利技术提出了一组血浆miRNA标志物，所述血浆miRNA标志物用于确定HCV感染，该标志物包括：miR-20和miR-122。发明专利技术人通过对血浆中的miRNA差异表达分析发现，使用该血浆miRNA标志物组合对抗-HCV+/HCV RNA+(抗-HCV阳性、HCV RNA阳性)献血者；抗-HCV+/HCV RNA-(抗-HCV阳性、HCV RNA阴性)献血者；和抗-HCV-/HCV RNA+(抗-HCV阴性、HCV RNA阳性)献血者的确证诊断，具有较好的灵敏度和特异性及通用性。具有较好的灵敏度和特异性及通用性。
【技术实现步骤摘要】
血浆miRNA标志物及其应用
[0001]本专利技术涉及生物检测领域，具体地，本专利技术涉及血浆miRNA标志物及其应用，更具体地，本专利技术涉及血浆miRNA标志物、miR-20和miR-122作为血浆miRNA标志物中用途、试剂在制备试剂盒中的用途以及试剂盒。
技术介绍
[0002]丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus，HCV)主要经血液传播，西方国家HCV高流行率使其成为90-95％输血后肝炎的发病原因。为保障血液安全，各国采供血机构都将抗-HCV检测作为献血者HCV感染常规筛查项目。根据最新中华人民共和国国家标准“GB18467-2011献血者健康检查要求”，“GB18469-2012全血及成分血质量要求”，HCV筛查策略可以有两个选择，国内多数血站采用第一种策略：2个不同厂家酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)检测病毒抗体或抗体和抗原；少数有条件地区采用第二种筛查策略：1种ELISA试剂检测病毒抗体或抗体和抗原，同时加做1种NAT试剂检测病毒核酸。
[0003]HCV实验室检测的标志物主要包括抗-HCV特异性抗体、核心抗原、核酸等，对不同标志物的检测结果受HCV感染病程进展程度及酶免试剂灵敏度、特异性制约，尤其在抗-HCV阳性率<10％低流行率的无偿献血人群中，酶免试剂假阳性率高达15％-62％，平均为35％，多种试剂之间的阳性符合率只有40-80％(双抗原夹法与间接法对抗-HCV的临床检测价值对比，不同抗-HCV酶联免疫试剂性能指标评价)，但是在低危人群中检测的。最终献血者HCV确证，通常需要通过对反应性样本进行重组免疫印迹试验(RIBA)检测特异性抗体或HCV核酸试验检测HCV RNA。由于，第一：HCV抗体及病毒RNA出现、消退时间与HCV感染病理演变密切相关，第二：不同种类试剂的灵敏度、特异度不同，同一样本RIBA、ELISA、HCV RNA检测结果并不一致。现实工作中经常出现献血者由于检测抗-HCV、HCV RNA结果阳性而被永久屏蔽，失去献血资格。但献血者随后在多家医院检测机构复检结果却是阴性。虽然从筛查技术上看，这些结果的出现无可避免，但是我们不应当因此而心安理得，因为每一份假阳性，都可能对献血者的身心和名誉造成伤害，给他们的家庭带去误会和困挠。为这些假阳性献血者除去困惑，回归其作为健康公民再次献血的选择权，对他们而言是权利，对血液筛查人员而言是责任，对采供血机构而言是服务、关爱献血者的义务。因此，除抗-HCV、HCV RNA诊断标记物之外，探寻与HCV感染确诊具有良好相关性的诊断标志物对保护我国宝贵的献血者资源、人文关爱献血者具有重要意义。
[0004]微小核糖核酸(microRNA，miRNA)是一类长约19至23个核苷酸的非编码单链小核糖核酸分子，其主要功能是参与基因转录后水平调控。miRNA能够作用于1/3人类蛋白编码基因，通过与靶mRNA3
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端非翻译序列完全互补或部分互补结合，使其降解或抑制其翻译，参与细胞增殖、代谢、发育、病毒感染等多种生理活动。现已证实人血清/血浆、脑脊液等体液中广泛存在丰富、稳定的miRNA，一些肿瘤包括非小细胞肺癌、结直肠癌、前列腺癌、卵巢癌和胰腺癌患者血清中miRNA表达谱与正常人有显著差异，均有各自特异的表达谱，miRNA作为疾病标记物引起越来越多的重视。
[0005]血浆miRNA作为诊断标记物优点很多：高度稳定性、高度灵敏性、样本获取无创性和可参照性等。具体特点解释：
[0006](1)高度的稳定性。研究表明，血浆中长期稳定存在大量处于循环状态的microRNA，其表达的稳定性高于组织和细胞中microRNA，耐RNA酶降解,耐煮沸，耐反复冻融和酸碱环境，长期保存仍能够获得稳定、高质量的microRNA。因此血浆microRNA检测较便捷，成本低，可重复性强，可信度高。
[0007](2)高度的灵敏度。血浆microRNA不仅具有组织特异性，并且在不同疾病以及疾病的不同分期中，microRNA的表达谱均不同，提示microRNA的表达谱能够动态反应疾病的进展和变化，能够作为疾病诊断、病程进展和转移的有效标记物。
[0008](3)检测的无创性。肿瘤组织中microRNA虽可作为一种新的肿瘤诊断和转移预测的标志物，但采集肿瘤组织microRNA的手术或穿刺均具有较大的创伤性。而相比而言，血浆microRNA检测具有无创性、非侵入性和连续测量性的优势，临床上操作便捷，易于推广等特点，是优于手术获得组织microRNA的一种检测方法。
[0009](4)可参照性。研究表明，血浆microRNA在不同的健康个体中均具有稳定表达的特点，不存在明显的性别差异和个体差异性，便于设定参照值以对比诊断。通过多个microRNA生物标志物联合应用可以快速、准确、低成本的早期预测和判断HCC患者的转移状况。
[0010]综上，血浆microRNA是一种理想的HCV感染确证的诊断标志物。
技术实现思路
[0011]本专利技术旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。
[0012]为此，在本专利技术的第一方面，本专利技术提出了一组血浆miRNA标志物，所述血浆miRNA标志物用于确定HCV感染。根据本专利技术的实施例，所述标志物包括：miR-20和miR-122。专利技术人通过对血浆中的miRNA差异表达分析发现，使用根据专利技术实施例的血浆miRNA标志物对抗-HCV+/HCV RNA+(抗-HCV阳性、HCV RNA阳性)献血者；抗-HCV+/HCV RNA-(抗-HCV阳性、HCV RNA阴性)献血者；和抗-HCV-/HCV RNA+(抗-HCV阴性、HCV RNA阳性)献血者的确证诊断，具有较好的灵敏度和特异性及通用性。
[0013]根据本专利技术的实施例，上述标志物还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：
[0014]根据本专利技术的实施例，所述miR-20具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列，所述miR-122具有SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。
[0015]CAAAGUGCUCAUAGUGCAGGUAG(SEQ ID NO:1)。
[0016]UGGAGUGUGACAAUGGUGUUUG(SEQ ID NO:2)。
[0017]在本专利技术的第二方面，本专利技术提出了miR-20以及miR-122作为血浆miRNA标志物中用途，所述血浆miRNA标志物用于确定HCV感染。
[0018]根据本专利技术的实施例，所述miR-20具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列，所述miR-122具有SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。
[0019]在本专利技术的第三方面，本专利技术提出了试剂在制备试剂盒中的用途，所述试剂用于检测前面所述的血浆miRNA标志物，所述试剂盒用于确定血浆来源待测个体是否具有HCV感染。包含特异性检测根据本专利技术的血浆miRNA标志物的试剂的试剂盒，对抗-HCV+/HCV本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一组血浆miRNA标志物，所述血浆miRNA标志物用于确定HCV感染，其特征在于，包括：miR-20和miR-122。2.根据权利要求1所述的标志物，其特征在于，所述miR-20具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列，所述miR-122具有SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。3.miR-20和miR-122作为血浆miRNA标志物中用途，所述血浆miRNA标志物用于确定HCV感染。4.根据权利要求3所述的所述的用途，其特征在于，所述miR-20具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列，所述miR-122具有SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。5.试剂在制备试剂盒中的用途，所述试剂用于检测权利要求1或2所述的血浆miRNA标志物，所述试剂盒用于确定血浆来源待测个体是否具有HCV感染。6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述试剂为特异性检测所述标志物的引物、探针或荧光反应剂。7.根据权利要求5所述的用途，...
【专利技术属性】
技术研发人员：权利要求书一页说明书一二页序列表三页附图五页，
申请(专利权)人：深圳市血液中心，
类型：发明
国别省市：
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