一种快速检测子痫前期的免疫层析检测卡及其制备方法与应用技术

本发明专利技术提供一种快速检测子痫前期的免疫层析检测卡及其制备方法与应用，该检测卡包括试纸条，试纸条包括样品垫、结合垫和反应膜，反应膜上设有第一检测线、第二检测线和质控线，第一检测线上包被有抗FKBPL第一单克隆抗体，第二检测线上包被有抗CD44第一单克隆抗体或第一检测线上包被有抗CD44第一单克隆抗体、第二检测线上包被有抗FKBPL第一单克隆抗体，质控线上包被有第一阴性对照抗体；结合垫上包被有上转换发光纳米颗粒

【技术实现步骤摘要】
一种快速检测子痫前期的免疫层析检测卡及其制备方法与应用


[0001]本专利技术涉及医学检验
，具体涉及一种快速检测子痫前期的免疫层析检测卡及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]子痫前期(Preeclampsia)指妊娠20周以后，出现血压升高、蛋白尿、头痛、眼花、恶心、呕吐、上腹不适等症状，属于妊娠期特发性高血压。子痫(Eclampsia)是由子痫前期发展成更为严重的症状，引起抽搐发作或昏迷，可导致严重的母儿并发症，危及到母儿的生命。目前，子痫前期缺乏有效的诊断和治疗策略，除终止妊娠外，没有其他有效的治疗方法，现有的治疗是为了控制病情，争取延长孕周，因此及时的诊断出子痫前期十分重要。
[0003]先兆子痫有两种主要类型：在怀孕34周之前诊断出的早发性先兆子痫和34周以后诊断出的晚发性先兆子痫。绝大多数的筛查和监测策略集中于早期发作的先兆子痫，这只占所有先兆子痫病例的10
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15％，而晚期先兆子痫在很大程度上被忽视了。
[0004]目前，子痫前期的临床诊断需要满足以下三个依据：(1)量血压(收缩压/舒张压≥140/90mmHg)；(2)测蛋白尿(≥0.3g/24h)；(3)经有经验的医生通过子痫前期的相关症状对患者做出推测来进行筛查。然而，这种诊断方法的样本采集过程比较繁琐，耗时长。目前还没有一个可以对子痫前期进行定性和定量的指标来对患者进行筛查。因此，临床上急需有效的、快速的子痫前期筛查的标志物和相关的检测工具。
[0005]FKBPL是肽基脯氨酰顺反异构酶，属于免疫亲和蛋白组，是调控血管生成的关键蛋白，具有强大的抗血管生成活性，在发育和病理血管生成以及干细胞分化中都发挥着重要作用。FKBPL对血管生成的破坏依赖于与细胞表面受体CD44的结合。有研究已经确定FKBPL是子痫前期的预后生物标志物。健康妊娠女性和患有子痫前期的妊娠女性中的FKBPL和CD44浓度存在一定的差异。因此，基于这一研究基础将CD44和FKBPL作为子痫前期的诊断与预测指标。目前尚未发现以血清中的CD44和FKBPL浓度为检测指标的子痫前期免疫层析检测卡的相关报道。

技术实现思路

[0006]为解决上述问题，本专利技术提供了一种快速检测子痫前期的免疫层析检测卡及其制备方法与应用。本专利技术以CD44和FKBPL作为子痫前期的生物标记物，设计了一种免疫层析检测卡，可以同时对血清中的CD44和FKBPL浓度进行定量检测，以实现对子痫前期患者进行快速检测和筛查的目的。
[0007]根据本专利技术的一个方面，提供一种快速检测子痫前期的免疫层析检测卡，该检测卡包括试纸条，试纸条包括样品垫、结合垫和反应膜，反应膜上设有第一检测线、第二检测线和质控线，第一检测线上包被有抗FKBPL第一单克隆抗体、第二检测线上包被有抗CD44第一单克隆抗体或第一检测线上包被有抗CD44第一单克隆抗体、第二检测线上包被有抗
FKBPL第一单克隆抗体，质控线上包被有第一阴性对照抗体；结合垫上包被有上转换发光纳米颗粒
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抗CD44第二单克隆抗体、上转换发光纳米颗粒
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抗FKBPL第二单克隆抗体、上转换发光纳米颗粒
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第二阴性对照抗体。
[0008]优选地，样品垫和结合垫均由玻璃纤维素膜制备而成。
[0009]优选地，反应膜由硝酸纤维素膜制备而成。
[0010]本专利技术的检测卡分别设置两条检测线对CD44和FKBPL进行检测，能够同时定量地检测血清中的CD44和FKBPL浓度，并可通过计算得出CD44与FKBPL的浓度比值，其可能成为预测子痫前期的标志物。本专利技术中涉及的抗CD44第一单克隆抗体、抗CD44第二单克隆抗体均为抗CD44的单克隆抗体，均能与CD44进行结合；抗FKBPL第一单克隆抗体、抗FKBPL第二单克隆抗体均为抗FKBPL的单克隆抗体，均能与FKBPL进行结合。把液态的待测样品滴加在样品垫上，待测样品能够由样品垫向结合垫层析；随后待测样品向前层析到结合垫上，当待测样品中含有CD44和FKBPL时，CD44和FKBPL能够分别与结合垫上包被的上转换发光纳米颗粒
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抗CD44第二单克隆抗体、上转换发光纳米颗粒
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抗FKBPL第二单克隆抗体结合形成上转换发光纳米颗粒
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抗CD44第二单克隆抗体
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CD44、上转换发光纳米颗粒
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抗FKBPL第二单克隆抗体
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FKBPL；继续由结合垫向反应膜层析，当上转换发光纳米颗粒
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抗FKBPL第二单克隆抗体
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FKBPL和上转换发光纳米颗粒
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抗CD44第二单克隆抗体
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CD44经过两条检测线时，能够在相应的包被有能与FKBPL、CD44进行结合的单克隆抗体的检测线上固定下来，形成上转换发光纳米颗粒
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抗FKBPL第二单克隆抗体
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FKBPL
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抗FKBPL第一单克隆抗体、上转换发光纳米颗粒
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抗CD44第二单克隆抗体
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CD44
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抗CD44第一单克隆抗体的双抗体夹心结构。而结合垫上包被的上转换发光纳米颗粒
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第二阴性对照抗体和质控线上包被的第一阴性对照抗体的作用原理与上述作用原理相同，其作用在于对检测过程的正确性和免疫层析检测卡是否失效进行监控。
[0011]本专利技术采用的是上转换发光技术，即以稀土金属元素构成的上转换发光纳米颗粒作为标记物的免疫层析技术。首先，本专利技术采用的上转换发光纳米颗粒，为纳米材料，其具有优越的信号放大作用，能够达到良好的灵敏度和特异度。其次，上转换发光纳米颗粒在红外激发光下可发射出不同波长的可见光，其独特的上转换发光现象，使得以其作为标记物的检测过程排除了待检测生物样品自发荧光对检测结果造成干扰的可能，同时具有抗光漂白能力强、毒性低、背景荧光干扰小、发光特性稳定等优点，在免疫检测中可提高信噪比，从而提高了检测的灵敏度和稳定性，尤其适用于复杂样本的检测。此外，上转换发光纳米颗粒在足量的激发光照射下可以发出更强的发射光，能够进一步地提高检测的灵敏度。上转换发光纳米颗粒其自身的特点使得以其作为标记物的免疫层析检测可与仪器相结合，实现对被检测物高灵敏度的定量检测。并且，上转换发光纳米颗粒具有多种特征光谱(包括激发光谱和发射光谱)，使得基于上转换发光技术的免疫层析检测可进行灵敏度极高的多重分析，即一次性对生物样品的多目标被检测物进行检测。
[0012]优选地，上转换发光纳米颗粒的粒径为25
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200nm。
[0013]优选地，上转换发光纳米颗粒的粒径为50nm。
[0014]粒径小于10nm的上转换发光纳米颗粒的荧光效率较低，本方案选用粒径适中的纳米颗粒，能够减少空间位阻，避免其难和特异性抗体结合，同时在一定程度上能够提高上转换发光纳米颗粒的荧光效率，进而提高检本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种快速检测子痫前期的免疫层析检测卡，其特征在于：所述检测卡包括试纸条，所述试纸条包括样品垫、结合垫和反应膜，所述反应膜上设有第一检测线、第二检测线和质控线，所述第一检测线上包被有抗FKBPL第一单克隆抗体、所述第二检测线上包被有抗CD44第一单克隆抗体，或所述第一检测线上包被有抗CD44第一单克隆抗体、所述第二检测线上包被有抗FKBPL第一单克隆抗体，所述质控线上包被有第一阴性对照抗体；所述结合垫上包被有上转换发光纳米颗粒
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抗CD44第二单克隆抗体、上转换发光纳米颗粒
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抗FKBPL第二单克隆抗体、上转换发光纳米颗粒
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第二阴性对照抗体。2.如权利要求1所述的一种快速检测子痫前期的免疫层析检测卡，其特征在于：所述上转换发光纳米颗粒的粒径为25
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200nm。3.如权利要求1所述的一种快速检测子痫前期的免疫层析检测卡，其特征在于：所述上转换发光纳米颗粒的粒径为50nm。4.如权利要求1所述的一种快速检测子痫前期的免疫层析检测卡，其特征在于：所述上转换发光纳米颗粒是经过羧基化修饰得到的。5.如权利要求1所述的一种快速检测子痫前期的免疫层析检测卡，其特征在于，所述上转换发光纳米颗粒
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抗CD44第二单克隆抗体的制备方法包括以下步骤：利用上转换发光纳米颗粒和PB缓冲液制备悬浊液，向其中依次加入NHS和EDC进行反应；随后离心去除上清，加入PB缓冲液混匀；再向体系中加入抗CD44第二单克隆抗体进行反应，反应结束后加入BSA封闭，离心洗涤，得到所述上转换发光纳米颗粒
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抗CD44第二单克隆抗体；所述上转换发光纳米颗粒
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抗FKBPL第二单克隆抗体的制备方法包括以下步骤：利用上转换发光纳米颗粒和PB缓冲液制备悬浊液，向其中依次...

【专利技术属性】
技术研发人员：何皓，翟文康，
申请(专利权)人：深圳市光与生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：