蛋白质异二聚体及其用途制造技术

提供了蛋白质异二聚体、包含所述蛋白质异二聚体的药物组合物、药物和/或试剂盒、产生所述蛋白质异二聚体的方法以及所述蛋白质异二聚体的用途。聚体的用途。聚体的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】蛋白质异二聚体及其用途

技术介绍

[0001]尽管可以检测针对肿瘤抗原的免疫反应(Disis等人(1997)J.Clin.Oncol.(《临床肿瘤学杂志》)15:3363
‑
3367)，但导致疾病的恶性细胞通常不会引发引起排斥的免疫反应。研究证实，可以通过向肿瘤细胞引入诸如细胞因子和共刺激分子等免疫调节分子来增强肿瘤细胞的免疫原性。然而，所引入的免疫调节分子的表达和稳定性通常不尽如人意。由免疫系统细胞产生的诸如细胞因子等免疫调节因子可以直接或间接地活化具有适应性免疫反应的细胞，并且能够在引发保护性抗肿瘤免疫中发挥重要作用。先天免疫系统可以由引起释放诸如IFN
‑
α、TNF
‑
α和白介素等促炎性细胞因子的细菌产物或“危险”信号触发。
[0002]多个研究已显示，免疫调节因子(诸如白介素)可能适用于对动物模型和癌症患者发挥抗肿瘤作用。然而，白介素在体内具有相对较短的血清半衰期。例如，如通过体外生物检定或通过感染性休克模型系统中的功效所测量的(参见Smith等人,Cellular Immunology(《细胞免疫学》)173:207
‑
214(1996))，IL10在小鼠中的半衰期为约2小时到6小时。白介素活性丧失可能由若干因素所致，包含肾清除率、蛋白质水解性降解和血流中的单体化。
[0003]因此，十分需要可以按工业规模以相对较高产率进行生产并且将在体内具有相对较长半衰期以适用于治疗与细胞和/或组织的过度增殖相关的病症或疾病(例如，各种赘生物、不同类型的癌症和/或肿瘤)的长效免疫调节剂。另外，此类产品的产率应足够高，以避免复杂的纯化工艺和/或降低与不期望的杂质相关的风险。

技术实现思路

[0004]本公开解决这类需求同时提供相关优势。本公开涵盖适用于抑制肿瘤生长的蛋白质异二聚体，以及包括所述蛋白质异二聚体的组合物、药物和/或试剂盒。另外，本公开提供了蛋白质混合物，其包括所述蛋白质异二聚体并具有极少(如果有)不期望的杂质(诸如不期望的蛋白质同二聚体或蛋白质聚集体)。本公开还提供了产生蛋白质异二聚体或蛋白质混合物的方法，以及蛋白质异二聚体和/或蛋白质混合物在抑制肿瘤生长(包含但不限于治疗癌症)中的药学用途。
[0005]一方面，本公开提供了一种蛋白质异二聚体，其包括第一单体成员和不同于第一单体成员的第二单体成员，其中：第一单体成员包括第一Fc亚基，第二单体成员包括第二Fc亚基，并且第一单体成员与第二单体成员缔合，以通过第一Fc亚基与第二Fc亚基的复合而形成异二聚体；其中，蛋白质异二聚体进一步包括一个或多个与第一Fc亚基或第二Fc亚基的羧基端氨基酸直接或间接融合的IL10；并且其中，蛋白质异二聚体不包括展现对肿瘤抗原的结合特异性的任何抗体重链可变区或任何抗体轻链可变区。
[0006]在一些实施方案中，第一单体成员和第二单体成员形成不对称二聚体。
[0007]在一些实施方案中，所述蛋白质异二聚体包括两个与第一Fc亚基或第二Fc亚基的羧基端氨基酸直接或间接融合的IL10。
[0008]在一些实施方案中，两个IL10彼此直接或间接融合。
[0009]在一些实施方案中，两个IL10通过肽接头彼此融合。
[0010]在一些实施方案中，两个IL10中的第一IL10与第一Fc亚基或第二Fc亚基的羧基端氨基酸直接或间接融合，并且两个IL10中的第二IL10与第一IL10的羧基端氨基酸直接或间接融合。
[0011]在一些实施方案中，所述一个或多个IL10通过肽接头与第一Fc亚基或第二Fc亚基的羧基端氨基酸融合。
[0012]在一些实施方案中，第一Fc亚基和/或第二Fc亚基源自IgG分子。在一些实施方案中，IgG选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。在一些实施方案中，IgG是人IgG1。
[0013]在一些实施方案中，所述蛋白质异二聚体不包括展现对任何肿瘤抗原的结合特异性的任何靶向部分。
[0014]在一些实施方案中，所述蛋白质异二聚体不包括任何抗体重链可变区或任何抗体轻链可变区。
[0015]在一些实施方案中，第一Fc亚基不同于第二Fc亚基，并且第一和/或第二Fc亚基包括促进第一Fc亚基和第二Fc亚基之间的异二聚体化的修饰。
[0016]在一些实施方案中，第一Fc亚基包括第一修饰，并且第二Fc亚基包括第二修饰。
[0017]在一些实施方案中，第一修饰包括在T366位置处的氨基酸取代，以及在选自由以下各项构成的组的一个或多个位置处的氨基酸取代：Y349、F405、K409、D399、K360、Q347、K392和S354，其中，所述氨基酸的位置根据KABAT编号的EU索引确定。
[0018]在一些实施方案中，第一修饰包括的氨基酸取代选自Y349C、Y349D、D399S、F405K、K360E、K409A、K409E、Q347E、Q347R、S354D、K392D和T366W，其中，氨基酸的位置根据KABAT编号的EU索引确定。
[0019]在一些实施方案中，第一修饰包括2至5个氨基酸取代。
[0020]在一些实施方案中，第一修饰包括在选自以下任一组的一组位置处的氨基酸取代：1)Y349和T366；2)Y349、T366和F405；3)Y349、T366和K409；4)Y349、T366、F405、K360和Q347；5)Y349、T366、F405和Q347；6)Y349、T366、K409、K360和Q347；7)Y349、T366、K409和Q347；8)T366、K409和K392；9)T366和K409；10)T366、K409、Y349和S354；11)T366和F405；12)T366、F405和D399；以及13)T366、F405、Y349和S354；其中，所述氨基酸的位置根据KABAT编号的EU索引确定。
[0021]在一些实施方案中，第一修饰包括选自以下任一组的一组氨基酸取代：1)Y349C和T366W；2)Y349C、T366W和F405K；3)Y349C、T366W和K409E；4)Y349C、T366W和K409A；5)Y349C、T366W、F405K、K360E和Q347E；6)Y349C、T366W、F405K和Q347R；7)Y349C、T366W、K409A、K360E和Q347E；8)Y349C、T366W、K409A和Q347R；9)T366W、K409A和K392D；10)T366W和K409A；11)T366W、K409A和Y349D；12)T366W、K409A、Y349D和S354D；13)T366W和F405K；14)T366W、F405K和D399S；15)T366W、F405K和Y349D；以及16)T366W、F405K、Y349D和S354D；其中，所述氨基酸的位置根据KABAT编号的EU索引确定。
[0022]在一些实施方案中，第二修饰包括在T366、L368和Y407位置处的氨基酸取代，以及本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种蛋白质异二聚体，其包括第一单体成员和不同于所述第一单体成员的第二单体成员，其中：所述第一单体成员包括第一Fc亚基，所述第二单体成员包括第二Fc亚基，并且所述第一单体成员与所述第二单体成员缔合，以通过所述第一Fc亚基与所述第二Fc亚基的复合而形成所述异二聚体；其中，所述蛋白质异二聚体进一步包括一个或多个与所述第一Fc亚基或所述第二Fc亚基的羧基端氨基酸直接或间接融合的IL10；并且其中，所述蛋白质异二聚体不包括展现对肿瘤抗原的结合特异性的任何抗体重链可变区或任何抗体轻链可变区。2.根据权利要求1所述的蛋白质异二聚体，其中，所述第一单体成员和所述第二单体成员形成不对称二聚体。3.根据权利要求1至2中任一项所述的蛋白质异二聚体，其包括两个与所述第一Fc亚基或所述第二Fc亚基的羧基端氨基酸直接或间接融合的IL10。4.根据权利要求3所述的蛋白质异二聚体，其中，所述两个IL10彼此直接或间接融合。5.根据权利要求4所述的蛋白质异二聚体，其中，所述两个IL10通过肽接头彼此融合。6.根据权利要求3至5中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中，所述两个IL10中的第一IL10与所述第一Fc亚基或所述第二Fc亚基的羧基端氨基酸直接或间接融合，并且所述两个IL10中的第二IL10与所述第一IL10的羧基端氨基酸直接或间接融合。7.根据权利要求1至6中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中，所述一个或多个IL10通过肽接头与所述第一Fc亚基或所述第二Fc亚基的羧基端氨基酸融合。8.根据权利要求1至7中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中，所述第一Fc亚基和/或所述第二Fc亚基源自IgG分子。9.根据权利要求8所述的蛋白质异二聚体，其中，所述IgG选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。10.根据权利要求9所述的蛋白质异二聚体，其中，所述IgG是人IgG1。11.根据权利要求1至10中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中，所述蛋白质异二聚体不包括展现对任何肿瘤抗原的结合特异性的任何靶向部分。12.根据权利要求1至11中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中，所述蛋白质异二聚体不包括任何抗体重链可变区或任何抗体轻链可变区。13.根据权利要求1至12中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中，所述第一Fc亚基不同于所述第二Fc亚基，并且所述第一和/或第二Fc亚基包括促进所述第一Fc亚基和所述第二Fc亚基之间的异二聚体化的修饰。14.根据权利要求13所述的蛋白质异二聚体，其中，所述第一Fc亚基包括第一修饰，并且所述第二Fc亚基包括第二修饰。15.根据权利要求14所述的蛋白质异二聚体，其中，所述第一修饰包括在T366位置处的氨基酸取代，以及在选自由以下各项构成的组中的一个或多个位置处的氨基酸取代：Y349、F405、K409、D399、K360、Q347、K392和S354，其中，所述氨基酸的位置根据KABAT编号的EU索引确定。16.根据权利要求15所述的蛋白质异二聚体，其中，所述第一修饰包括的所述氨基酸取代选自Y349C、Y349D、D399S、F405K、K360E、K409A、K409E、Q347E、Q347R、S354D、K392D和T366W，其中，所述氨基酸的位置根据KABAT编号的EU索引确定。17.根据权利要求14至16中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中，所述第一修饰包括2
至5个氨基酸取代。18.根据权利要求14至17中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中，所述第一修饰包括在选自以下任一组的一组位置处的氨基酸取代：1)Y349和T366；2)Y349、T366和F405；3)Y349、T366和K409；4)Y349、T366、F405、K360和Q347；5)Y349、T366、F405和Q347；6)Y349、T366、K409、K360和Q347；7)Y349、T366、K409和Q347；8)T366、K409和K392；9)T366和K409；10)T366、K409、Y349和S354；11)T366和F405；12)T366、F405和D399；以及13)T366、F405、Y349和S354；其中，所述氨基酸的位置根据KABAT编号的EU索引确定。19.根据权利要求14至18中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中，所述第一修饰包括选自以下任一组的一组氨基酸取代：1)Y349C和T366W；2)Y349C、T366W和F405K；3)Y349C、T366W和K409E；4)Y349C、T366W和K409A；5)Y349C、T366W、F405K、K360E和Q347E；6)Y349C、T366W、F405K和Q347R；7)Y349C、T366W、K409A、K360E和Q347E；8)Y349C、T366W、K409A和Q347R；9)T366W、K409A和K392D；10)T366W和K409A；11)T366W、K409A和Y349D；12)T366W、K409A、Y349D和S354D；13)T366W和F405K；14)T366W、F405K和D399S；15)T366W、F405K和Y349D；以及16)T366W、F405K、Y349D和S354D；其中，所述氨基酸的位置根据KABAT编号的EU索引确定。20.根据权利要求14至19中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中，所述第二修饰包括在T366、L368和Y407位置处的氨基酸取代，以及在选自由D356、D399、E357、F405、K360、K392、K409和Q347构成的组的一个或多个位置处的氨基酸取代，其中，所述氨基酸的位置根据KABAT编号的EU索引确定。21.根据权利要求20所述的蛋白质异二聚体，其中，所述第二修饰包括的所述氨基酸取代选自D356C、D399S、E357A、F405K、K360E、K392D、K409A、L368A、L368G、Q347E、Q347R、T366S、Y407A和Y407V，其中，所述氨基酸的位置根据KABAT编号的EU索引确定。22.根据权利要求14至21中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中，所述第二修饰包括4至6个氨基酸取代。23.根据权利要求14至22中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中，所述第二修饰包括在选自以下任一组的一组位置处的氨基酸取代：1)D356、T366、L368、Y407和F405；2)D356、T366、L368和Y407；3)D356、T366、L368、Y407和Q347；4)D356、T366、L368、Y407、K360和Q347；5)D356、T366、L368、Y407、F405和Q347；6)D356、T366、L368、Y407、F405、K360和Q347；7)T366、L368、Y407、D399和F405；8)T366、L368、Y407和F405；9)T366、L368、Y407、F405和E357；10)T366、L368、Y407和K409；11)T366、L368、Y407、K409和K392；和12)T366、L368、Y407、K409和E357；其中，所述氨基酸的位置根据KABAT编号的EU索引确定。24.根据权利要求14至23中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中，所述第二修饰包括选自以下任一组的一组氨基酸取代：1)D356C、T366S、L368A、Y407V和F405K；2)D356C、T366S、L368A和Y407V；3)D356C、T366S、L368A、Y407V和Q347R；4)D356C、T366S、L368A、Y407V、K360E和Q347E；5)D356C、T366S、L368A、Y407V、F405K和Q347R；6)D356C、T366S、L368A、Y407V、F405K、K360E和Q347E；7)T366S、L368A、Y407V、D399S和F405K；8)T366S、L368G、Y407A和F405K；9)T366S、L368A、Y407V、F405K和E357A；10)T366S、L368A、Y407V和K409A；11)T366S、L368A、Y407V、K409A和K392D；12)T366S、L368G、Y407A和K409A；13)T366S、L368A、Y407V、K409A和E357A；其中，所述氨基酸的位置根据KABAT编号的EU索引确定。
25.根据权利要求14至24中任一项所述的蛋白质异二聚体，其中，所述第一Fc亚基包括所述第一修饰，所述第二Fc亚基包括所述第二修饰，并且所述第一修饰和所述第二修饰包括在选自以下任一组的一组位置处的氨基酸取代：1)所述第一修饰：Y349和T366；和所述第二修饰：D356、T366、L368、Y407和F405；2)所述第一修饰：Y349、T366和F405；和所述第二修饰：D356、T366、L368和Y407；3)所述第一修饰：Y349、T366和K409；和所述第二修饰：D356、T366、L368、Y407和F405；4)所述第一修饰：Y349、T366、F405、K360和Q347；和所述第二修饰：D356、T366、L368、Y407和Q347；5)所述第一修饰：Y349、T366、F405和Q347；和所述第二修饰：D356、T366、L368、Y407、K360和Q347；6)所述第一修饰：Y349、T366、K409、K360和Q347；和所述第二修饰：D356、T366、L368、Y407、F405和Q347；7)所述第一...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐霆，彭建建，付凯，傅士龙，潘晓龙，丁健，宁姗姗，周立耀，
申请(专利权)人：苏州丁孚靶点生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：