一种DMD基因外显子拷贝数变异的检测方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种DMD基因外显子拷贝数变异的检测方法及其应用；属于分子生物学技术领域。在PCR反应液中扩增DMD基因79个外显子，同时以一组或两组以上的内参基因监控PCR反应效率，通过毛细管电泳分析PCR产物以DMD基因皆为2拷贝数的DMD女性对照进行计算，对DMD基因79个外显子拷贝数进行相对定量的检测，计算出0、1、2、3拷贝数的DMD基因，区分DMD基因外显子拷贝数正常、缺失突变和重复突变，并可提示小的缺失与突变。从DNA样本开始，4小时内可以出结果，只需要一次PCR实验即可检测出DMD基因外显子拷贝数情况，检测技术流程简单，容易实现标准化。准化。

【技术实现步骤摘要】
一种DMD基因外显子拷贝数变异的检测方法及其应用


[0001]本专利技术属于分子生物学
，具体涉及一种DMD基因外显子拷贝数变异的检测方法及其应用。

技术介绍

[0002]进行性肌营养不良(Progressive muscular dystrophy)是一组以骨骼肌进行性无力萎缩为主要临床表现的异质性基因缺陷性疾病。可伴有中枢神经系统、心脏、骨骼、呼吸及胃肠道受累。不同类型起病时间、进展速度、受累范围、严重程度差异很大。杜氏肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy,DMD)，是最常见的进行性肌营养不良，新生男婴发病率为1/3500；贝氏肌营养不良症(Becker muscular dystrophy,BMD)，新生男婴发病率为1/30000。
[0003]DMD/BMD的致病基因为DMD基因，位于Xp21.2,所编码的蛋白称为抗肌萎缩蛋白(Dystrophin),分布于骨骼肌和心肌的细胞膜上，起支架作用，保护肌细胞膜在肌肉收缩时不受损伤。由于DMD基因缺陷，导致肌细胞膜上的抗肌萎缩蛋白功能异常，肌细胞受本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种DMD基因外显子拷贝数的PCR扩增反应检测方法，其特征在于：进行PCR扩增反应，同时扩增DMD基因79个外显子、内参基因与SRY基因；其中用于扩增DMD基因79个外显子与内参基因的引物至少包含两种不同的引物；第一种引物黏合DMD基因79个外显子与内参基因的上游区域，同时第一种引物5
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端含包含全部或部分的非人源性基因组序列引物 SEQ ID NO. 1；第二种引物黏合DMD基因79个外显子与内参基因的下游区域，同时第二种引物5
’
端包含全部或部分的非人源性基因组序列引物 SEQ ID NO. 2；其中用于扩增SRY基因的引物至少包含两种不同的引物，第一种引物黏合SRY基因的上游区域，第二种引物黏合SRY基因的下游区域。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述内参基因选自GAPDH、ACTB、HBB、CFTR、HPRT、RPP30或RPP40中的一种或几种。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述用于扩增DMD基因79个外显子的引物包含如SEQ ID NO. 3
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160所示序列；所述用于扩增SRY基因的引物包含如SEQ ID NO. 161/162所示序列。4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：在PCR扩增反应中，所述引物至少包含一种以上的荧光基团；所述荧光基团选自FAM、VIC、HEX、JOE、TMR、NED、PET、ROX中的任意一种。5.一种DMD基因拷贝数检测试剂盒，其特征在于：所述检测试剂盒，包括以下组分：DMD反应液、DMD引物混合液、DNA聚合酶、DMD女性对照、DMD男性对照、DMD空白对照；所述DMD引物混合液包括权利要求1所述用于扩增DMD基因79个外显子与内参基因的引物和用于扩增SRY基因的引物。6.根据权利要求5所述的检测试剂盒，其特征在于：所述DMD引物混合液包括引物SEQ ID NO. 1/2、SEQ ID NO. 3
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160、SEQ ID NO.161/162、ACTB上/下游引物和HBB上/下游引物。7.根据权利要求5所述的检测试剂盒，其特征在于：所述DMD引物混合液包括：DMD引物混合液1：包含检测引物SEQ ID NO. 1...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭亦亦，邱一帆，钟丽霞，李淑如，
申请(专利权)人：胜亚生物科技厦门有限公司，
类型：发明
国别省市：