一种用于动物源性食品中喹诺酮类药物残留的检测方法技术

本发明专利技术属于食品安全检测领域。技术方案是：一种用于动物源性食品中喹诺酮类药物残留的检测方法，按如下步骤进行：1)样品预处理：称取1

【技术实现步骤摘要】
一种用于动物源性食品中喹诺酮类药物残留的检测方法


[0001]本专利技术属于食品安全检测领域，尤其涉及一种动物源性食品中喹诺酮类药物残留的检测方法。

技术介绍

[0002]喹诺酮类抗生素广泛用于人和动物疾病的预防和治疗，是一类具有抗菌谱广，抗菌性强，价格低廉等特点的人工合成抗菌药；然而摄入含有喹诺酮类残留的动物源性食品，除造成药物致敏和其它对人体的毒副作用外，还容易产生细菌耐药性。是目前兽药残留的监测重点，我国农业部也对动物源性食品中多种喹诺酮类药物制定了最高残留限量。当前现行检测动物源性食品中喹诺酮类抗生素的国家标准方法为高效液相色谱
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串联质谱法，均采用外标法定量，GB/T 20366
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2006的前处理方法中需要大量提取液提取，经正己烷除脂后再旋转蒸发浓缩，耗时长；GB/T 21312
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2007需用缓冲盐溶液提取，再经传统HLB固相萃取小柱净化，操作繁琐，具有一定的局限性。
[0003]磁固相萃取(MSPE)是近年来发展的一种以磁性纳米材料作为吸附剂的固相萃取技术,以碳材料改性的磁性纳米颗粒因其比表面积大和吸附能力优良在兽药残留检测取得了广泛的应用，常用的碳材料有碳纳米管、石墨烯或氧化石墨烯、多孔碳、富勒烯等。其中石墨烯(G)除了本身具有超高的比表面积外，其原子以一种类似六角形蜂窝的形状排列，特殊的结构可以和其他有机化合物形成较强的π
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π相互作用，具有较强的疏水性和独特的共轭体系。石墨烯氧化物(GO)除具有大离域π电子共轭系统外，还具有
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OH，
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COOH等极性官能团，通过π
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π堆积、疏水作用、氢键作用、静电作用对多种有机化合物都表现出较强的吸附能力。将G/GO与磁性纳米材料复合制备的磁性石墨烯纳米复合材料兼具二者优势，是极具潜力的磁固相萃取吸附剂。
[0004]分子印迹技术(molecularly imprinted technique,MIT)是制备对模板分子具有特异选择性识别能力的聚合物
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分子印迹聚合物的技术。该聚合物对模板分子具有较高的选择识别能力,并且在较为恶劣的条件下，也不会丧失对目标分子结合的能力。分子印迹固相萃取技术由于选择性较强、稳定性好、易于制备而受到广泛关注，石墨烯磁性纳米粒子表面合成分子印迹壳层。不仅具有分子印迹的优势，能够特异性识别和吸附目标分子,而且能在磁场的作用下快速分离，同时由于氧化石墨烯粒径较小，具有较大的比表面积，吸附容量较大，是一种更为理想的样品前处理手段。在兽药残留检测中有着广泛的应用前景。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是克服动物源性食品中喹诺酮类药物检测复杂的前处理手段，提供一种用于动物源性食品中喹诺酮类药物残留的检测方法，该方法应具备选择性好、灵敏度高、检测时间短的特点，以提高检测效率。
[0006]为实现上述目的，本方法提供了如下技术方案：
[0007]一种用于动物源性食品中喹诺酮类药物残留的检测方法，依照如下步骤进行：
[0008]1)样品预处理：称取1
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2g样品于50mL离心管中，加入10mL乙二胺四乙酸二钠(NA2EDTA)
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磷酸氢二钾缓冲溶液，10
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50μL氯化胆碱对甲苯酚混合溶液、0.05
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0.1g磁性氧化石墨烯分子印迹聚合物，涡旋、超声提取后，用磁力枪将磁性氧化石墨烯分子印迹聚合物吸出；加入1mL0.2％甲酸甲醇洗脱液将样品中的喹诺酮类药物解析出来,混匀后，过0.22μm有机滤膜，获得待测液；
[0009]2)待测液的检测：运用HPLC
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MS/MS，在质谱ESI源下正离子模式下测定，内标法定量。
[0010]所述乙二胺四乙酸(NA2EDTA)
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磷酸氢二钾缓冲溶液，按如下方法制备：30.25g乙二胺四乙酸二钠(Na2EDTA
·
2H2O)、4.56g磷酸氢二钾(K2HPO3)用纯水溶解，用10mol/LNAOH调pH到7.2
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7.4，用水定容至1L。
[0011]所述氯化胆碱对甲苯酚混合溶液，按如下方法制备：氯化胆碱、对甲苯酚、乙二醇单甲醚按0.1:0.25:1摩尔比例称取适量，在60℃恒定搅拌下加热，直至形成稳定的均匀透明的液体；将制备的混合溶液储存在密封的小瓶中并保存在干燥器中。
[0012]所述磁性氧化石墨烯分子印迹聚合物，按如下方法制备：
[0013](1)氧化石墨烯的修饰：将石墨烯粉末置于
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18℃冰箱中冷冻1小时，称取3g石墨烯粉末，缓慢加入200mL按3:1:0.1比例混合的浓硫酸H2SO4、浓硝酸HNO3、异丙醇的混合溶液中之后，加入高锰酸钾(KMnO4)5g，搅拌30min后，缓慢升温至55℃，超声反应3h，在80℃下加热搅拌反应2h，抽滤，用蒸馏水涤至中性，于50℃真空干燥至恒重，研磨过筛获得氧化石墨烯，备用；
[0014](2)溶剂热法制备磁性碳纳米管：称取5.410g三氯化铁(FeCl3·
6H2O)和3.475g硫酸亚铁(FeSO4·
7H2O)置于250mL平底烧瓶中加入100mL水，60℃下恒温磁力搅拌，全部溶解后，加入25mL氨水、2g步骤(1)制得的氧化石墨烯、5mL按1:1比例组成的乙二醇与聚乙二醇混合溶剂中，60℃下恒温磁力搅拌2h得到黑色的混合溶液，用乙醇和水洗数次，于50℃真空干燥至恒重获得磁性碳纳米管，备用；
[0015](3)将步骤(2)得到的磁性碳纳米管、1mmol恩诺沙星、5mmol甲基丙烯酸、5mmol丙烯酸、1mL二甲基亚砜、50mL按9:1比例组成的乙醇
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聚乙二醇混合溶液涡旋混合1min，再加入10mmol乙二醇二甲基丙烯酸酯、0.2g聚乙烯吡咯烷酮、0.010g偶氮二异丁脐(AIBN)引发剂，通氮气密封，80℃水浴超声3h；反应结束后磁场分离除去上清液，其余料用体积比为9∶1混合的甲醇与甲酸混合溶液反复超声洗涤，直至上清液经示差检测器检测不到模板分子为止，于50℃真空干燥至恒重，得到磁性氧化石墨烯分子印迹聚合物。
[0016]超高效液相色谱
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三重四极杆质谱仪色谱条件为：
[0017]色谱柱：安捷伦SB
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C18色谱柱(2.1
×
100mm,1.8μm))；流速：0.30mL/min；进样量：5μL；柱温：35℃。溶液A—0.1％甲酸水溶液，B
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乙腈(含0.1％甲酸)，梯度洗脱程序：0min，10％B％，0min
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2.00min，10％B％
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40％B％，2.00min
–
4.00min，40％
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90％B％，4.00min
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5.00min，90％B％，5.00min...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于动物源性食品中喹诺酮类药物残留的检测方法，依照如下步骤进行：1)样品预处理：称取1
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2g样品于50mL离心管中，加入10mL乙二胺四乙酸二钠
‑
磷酸氢二钾缓冲溶液，10
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50μL氯化胆碱对甲苯酚混合溶液、0.05
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0.1g磁性氧化石墨烯分子印迹聚合物，涡旋、超声提取后，用磁力枪将磁性氧化石墨烯分子印迹聚合物吸出；加入1mL0.2％甲酸甲醇洗脱液将样品中的喹诺酮类药物解析出来,混匀后，过0.22μm有机滤膜，获得待测液；2)待测液的检测：运用HPLC
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MS/MS，在质谱ESI源下正离子模式下测定，内标法定量。2.根据权利要求1所述的用于动物源性食品中喹诺酮类药物残留的检测方法，其特征在于：所述乙二胺四乙酸二钠
‑
磷酸氢二钾缓冲溶液，按如下方法制备：30.25g乙二胺四乙酸二钠、4.56g磷酸氢二钾用纯水溶解，用10mol/LNAOH调pH到7.2
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7.4，用水定容至1L。3.根据权利要求2所述的用于动物源性食品中喹诺酮类药物残留的检测方法，其特征在于：所述氯化胆碱对甲苯酚混合溶液，按如下方法制备：氯化胆碱、对甲苯酚、乙二醇单甲醚按0.1:0.25:1摩尔比例称取适量，在60℃恒定搅拌下加热，直至形成稳定的均匀透明的液体；将制备的混合溶液储存在密封的小瓶中并保存在干燥器中。4.根据权利要求3所述的用于动物源性食品中喹诺酮类药物残留的检测方法，其特征在于：所述磁性氧化石墨烯分子印迹聚合物，按如下方法制备：(1)氧化石墨烯的修饰：将石墨烯粉末置于
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18℃冰箱中冷冻1小时，称取3g石墨烯粉末，缓慢加入200mL按3:1:0.1比例混合的浓硫酸
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浓硝酸
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异丙醇混合溶液中之后，加入KMnO45g，搅拌30min后，缓慢升温至55℃，超声反应3h，在80℃下加热搅拌反应2h，抽滤，用蒸馏水涤至中性，于50℃真空干燥至恒重，研磨过筛获得氧化石墨烯，备用；(2)溶剂热法制备磁性碳纳米管：称取5.41...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶磊海，钟世欢，叶佳明，杨娜，黄南，盛丽娜，顾秀英，王静，
申请(专利权)人：赞宇科技集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：