右雷佐生有关物质及其检测方法技术

本发明专利技术公开了右雷佐生有关物质及其检测方法，提供了右雷佐生的四种新氧化杂质：氧化杂质1、氧化杂质2、显色杂质1、显色杂质2，并采用高效液相色谱的方法进行定性或/和定量检测上述有关物质，液相色谱的检测条件包括：色谱柱：C18或等效色谱柱；流动相：流动相A、流动相B，其中，流动相A为磷酸缓冲液，流动相B为磷酸缓冲液：乙腈体积比为80～90:10～20的混合溶液，梯度洗脱。采用本发明专利技术的方法能够同时有效检测右雷佐生的9种有关物质，通过系统适用性、专属性、准确度、精密度、线性范围、定量限检测限、耐用性验证实验表明本方法能够达到准确定量分析的目的，有利于对右雷佐生进行更严格的质量控制。质量控制。质量控制。

【技术实现步骤摘要】
右雷佐生有关物质及其检测方法


[0001]本专利技术涉及检测方法领域，特别是涉及右雷佐生有关物质及其检测方法。

技术介绍

[0002]右雷佐生(dexrazoxane)，又称右丙亚胺，是丙亚胺(razoxane)的d
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异构体，是美国FDA批准的唯一佐剂，用于治疗DIC(弥散性血管内凝血disseminated or diffuse intravascular coagulation,DIC)。
[0003]右雷佐生能迅速透过细胞膜，在细胞内水解为TCRE
‑
198，再与细胞内的铁螯合，使三价铁离子与多柔比星等蒽环类抗肿瘤药物的复合物减少，防止自由基的形成，降低多柔比星等蒽环类抗肿瘤抗生素的心脏毒性。右雷佐生还能抑制拓朴异构酶II产生的细胞毒性作用，在动物模型中对某些抗肿瘤药物的细胞毒性有增强或拮抗作用。研究表明，右雷佐生能够使心脏毒性发生率减少约三分之二，同时不影响化疗的效果或者总体生存率，临床用于减少或减轻蒽环类抗生素化疗引起的心肌毒性。
[0004]作为重要的抗肿瘤辅助药，右雷佐生的质量直接影响着患者的健康，因此对右雷佐生进行质量控制尤为重要。右雷佐生对碱性条件和氧化条件敏感，但现有的文献资料仅报道了碱性水解条件下的降解过程，对于右雷佐生的氧化过程未见报道，导致目前已知的右雷佐生有关物质多局限于降解杂质，种类较少，使得右雷佐生的质量控制存在一定的局限性，且目前各国标准均未收载右雷佐生及其制剂的质量检测标准，无法对其进行严格的质量控制。
[0005]由此可见，对右雷佐生的降解机理进行更深入地研究，确认更多的右雷佐生有关物质并开发适用的检测方法，对右雷佐生的全面质量控制具有重要意义。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种右雷佐生有关物质及其检测方法，可对右雷佐生原料药或制剂更好地进行质量控制。
[0007]目前已知的右雷佐生有关物质有杂质A(IMP
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A)、杂质B(IMP
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B)、杂质C(IMP
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C)、杂质D(IMP
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D)，均为右雷佐生在碱性条件下水解容易产生的杂质(路径见图1)，还可能存在工艺杂质NMP。为了对右雷佐生进行更全面的质量控制，专利技术人对右雷佐生的氧化过程进行了分析，并通过HPLC结合MS鉴定出了右雷佐生的四种氧化杂质，分别为氧化杂质1、氧化杂质2、氧化杂质3(显色杂质1)、氧化杂质4(显色杂质2)，见图2，其中，氧化杂质1、氧化杂质2为一对同分异构体，氧化杂质3、氧化杂质4也是一对同分异构体且为显色杂质。
[0008]本专利技术涉及的杂质及其对应结构见表1。
[0009]表1右雷佐生及其杂质结构列表
[0010][0011][0012]为了解决上述问题，本专利技术提供了一种化合物，选自如下结构：
[0013][0014]在氧化过程中，氧化杂质1/2脱除OH
‑
生成显色杂质1/2，因此X
‑
可以是OH
‑
，同时由于本专利技术使用的注射用右雷佐生处方中加入的是盐酸右雷佐生，体系中的阴离子主要是Cl
‑
，因此在本专利技术中X
—
还可以是Cl
‑
，特别是注射用右雷佐生的原料药和制剂均采用盐酸/氢氧化钠调节pH，最终制剂产品pH在1.0
‑
2.5之间，OH
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的含量极低，可忽略，X
‑
主要为Cl
‑
。
[0015]当采用不同的酸与右雷佐生成盐，或添加了其它含阴离子的辅料时，本专利技术中的鎓离子(显色杂质1/2)则与对应存在的阴离子匹配形成鎓盐离子对。
[0016]进一步地，本专利技术检测的是溶液体系，实际检测出的化合物选自如下结构：
[0017][0018]本专利技术还提供了一种右雷佐生或其制剂中的有关物质的检测方法，所述有关物质选自上述化合物中的一种或多种，采用高效液相色谱进行定性或/和定量检测，液相色谱的检测条件包括：
[0019]色谱柱：C18或等效色谱柱；
[0020]流动相：流动相A、流动相B，其中，流动相A为磷酸缓冲液，流动B为磷酸缓冲液：乙腈体积比为80～90:10～20的混合溶液，采用如下洗脱程序进行梯度洗脱：
[0021]表2
[0022][0023][0024]所述“其制剂”是指右雷佐生的制剂，包括但不限于注射剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、
乳剂、脂质体、喷雾剂、吸入剂、微球等。
[0025]右雷佐生作为广泛应用的治疗佐剂，对其进行质量控制具有重要的实际意义，右雷佐生不含π
‑
π共轭键，只有在低波长的208nm下存在最大吸收，因此很多溶剂、流动相的末端吸收都可能会造成背景干扰，如常用的甲醇、甲酸铵、离子对试剂，均不建议使用。
[0026]CN108226309B公开了在一种右雷佐生的检测方法，可检测右雷佐生和三种降解杂质，但其使用的有机溶剂为甲醇，专利技术人经过实验，发现在实际检测中甲醇在其检测波长(208nm)下存在末端吸收，色谱图中会出现梯度峰，容易干扰附近的杂质检测，降低响应值，不利于精确检测。
[0027]专利技术人经过不断的尝试和探索，最终得到本专利技术检测方法，采用低pH值的磷酸缓冲液与乙腈搭配，结合特定的梯度程序进行洗脱，可实现右雷佐生有关物质的有效分离，分离效果好，且不会存在末端吸收等背景干扰问题。
[0028]进一步地，流动相B为磷酸缓冲液：乙腈体积比为85:15的混合溶液，采用如下程序进行梯度洗脱：
[0029]表3
[0030]时间/min流动相A/vol.％流动相B/vol.％0100071000305050。
[0031]所述流动相的梯度洗脱程序中，时间只限定到25～35min，并不代表所述梯度洗脱程序只有25～35min，此处对梯度洗脱程序的限定应认为是开放式限定，梯度洗脱程序在25～35min以后还可继续包括其它的洗脱程序。
[0032]进一步地，流动相在30min以后采用如下梯度洗脱程序：
[0033]表4
[0034]时间/min流动相A/vol.％流动相B/vol.％405050451000551000
[0035]。
[0036]在本专利技术的具体实施方式中，所述磷酸缓冲液为磷酸二氢盐
‑
磷酸缓冲液。
[0037]进一步地，所述磷酸缓冲液中：磷酸二氢盐的浓度为0.005mol/L～0.015mol/L，用磷酸调节pH为1.5～2.5。
[0038]在本专利技术的具体实施方式中，所述磷酸缓冲液中：磷酸二氢盐的浓度为0.01mol/L，用磷酸调节pH为1.8～2.25，优选2.15～2.25，最优选2.2。
[0039]在本专利技术的具体实施方式中，所述有关物质还包括杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、N
‑
甲基吡咯烷酮(NMP)中的一种或本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种化合物，其特征在于，选自如下结构：其中X
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为OH
‑
或Cl
‑
。2.根据权利要求1所述化合物，其特征在于，选自如下结构：3.一种右雷佐生或其制剂中有关物质的检测方法，其特征在于，所述有关物质选自权利要求1或2所述化合物的一种或多种，采用高效液相色谱进行定性或/和定量检测，液相色谱的检测条件包括：色谱柱：C18或等效色谱柱；流动相：流动相A、流动相B，其中，流动相A为磷酸缓冲液，流动相B为磷酸缓冲液：乙腈体积比为80～90:10～20的混合溶液，采用如下程序进行梯度洗脱：时间/min流动相A/vol.％流动相B/vol.％095～1000～55～895～1000～525～3545～5545～55；进一步地，流动相B为磷酸缓冲液：乙腈体积比为85:15的混合溶液，采用如下程序进行梯度洗脱：时间/min流动相A/vol.％流动相B/vol.％0100071000305050；进一步地，流动相在30min以后采用如下梯度洗脱程序：时间/min流动相A/vol.％流动相B/vol.％405050451000551000。4.根据权利要求2所述检测方法，其特征在于，所述磷酸缓冲液为磷酸二氢盐
‑
磷酸缓冲液；
进一步地，所述磷酸缓冲液中：磷酸二氢盐的浓度为0.005mol/L～0.015mol/L，优选0.01mol/L，用磷酸调节pH为1.5～2.5，优选1.8～2.25，更优选2.15～2.25，最优选2.2。5.根据权利要求2所述检测方法，其特征在于，所述有关物质还包括杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、N
‑
甲基吡咯烷酮中的一种或多种。6.根据权利要求3～5任一项所述检测方法，其特征在于，所述液相色谱检测条件还包括以下的i～iv中的一项或多项：i色谱柱规格：4.6
×
250mm，3μm～5μm；ii柱温：28℃～32℃；iii流速：0.5ml/min～1.0ml/min；i...

【专利技术属性】
技术研发人员：张瑜，丁兆，胡和平，李彬，
申请(专利权)人：四川汇宇海玥医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：