一种白蛋白结合型紫杉醇注射剂中辛酸钠含量的检测方法技术

本发明专利技术涉及一种白蛋白结合型紫杉醇注射剂中辛酸钠含量的检测方法，属于白蛋白结合型紫杉醇注射剂质量控制技术领域。本发明专利技术提供了一种白蛋白结合型紫杉醇注射剂中辛酸钠含量的检测方法，采用高效液相色谱法，色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相由A相和B相组成，其中流动相A为磷酸缓冲溶液与乙腈的混合溶液，流动相B为乙腈，流动相A和B按一定比例混合进行梯度洗脱。本发明专利技术提供的检测方法能够快速、准确地检测白蛋白结合型紫杉醇注射剂中辛酸钠含量，从而能够确定该仿制制剂中辛酸钠的含量是否与参比制剂一致，是否满足生物等效性的要求，具有实际推广应用价值。具有实际推广应用价值。具有实际推广应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种白蛋白结合型紫杉醇注射剂中辛酸钠含量的检测方法


[0001]本专利技术涉及一种白蛋白结合型紫杉醇注射剂中辛酸钠含量的检测方法，属于白蛋白结合型紫杉醇注射剂质量控制


技术介绍

[0002]白蛋白结合型紫杉醇注射剂(商品名：)是美国生物制药公司赛尔基因(Celgene)研制的一种紫杉醇新型特殊靶向制剂，适用于治疗联合化疗失败的转移性乳腺癌或辅助化疗后6个月内复发的乳腺癌。是将人血白蛋白与紫杉醇通过高压振动技术制成的纳米微粒冻干粉针，规格为每支含紫杉醇100mg和人血白蛋白约900mg。其中，辛酸钠被作为人血白蛋白稳定剂中的一种辅料，它在人血白蛋白加热保温过程中能够起稳定和保护作用，防止白蛋白的变性，确保制品有良好的外观。然而，辛酸钠有一定的毒性，需要控制其在人血白蛋白的含量，根据《中国药典》明确规定每1g蛋白质中辛酸钠含量应为0.140～0.180mmol，如辛酸钠与乙酰色氨酸混合使用，则每1g蛋白质中辛酸钠含量应为0.064～0.096mmol。
[0003]另外，欧洲药品管理局EMA已公布特殊制剂的指导原则，其明确规定：the composition of the micelle infusion immediately before administration should be qualitatively and quantitatively the same as that currently approved,and satisfactory data should be provided to demonstrate similar physicochemical characteristics(给药前的胶束输液的成分应与目前批准的产品在质量和数量上相同，并提供令人满意的数据来证明具有相似的物理化学性质)。与普通注射剂不同，特殊注射剂进入体内后通常存在释药过程和体液成分吸附等因素，因此，受试制剂与参比制剂处方和工艺的差异可能导致药物体内药代动力学行为发生改变，从而带来有效性和毒性的变化。
[0004]基于上述考虑，因此我们不仅要控制辛酸钠在人血白蛋白的含量，而且需要研究仿制紫杉醇白蛋白制剂中的辛酸钠的含量与参比制剂是否一致。
[0005]目前有许多文献报道检测人血白蛋白中辛酸钠的含量的方法，如文献1(卢胜娟等.反相高效液相色谱法测定人血白蛋白制品中辛酸钠含量[J],应用技术,2015,4:95
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96.)采用戴安C18色谱柱，含0.05％三氟乙酸的乙腈
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水(40:60V/V)等度洗脱，样品溶液的制备：人血白蛋白制剂用纯水稀释成5％。然后5％溶液中加入其两倍的含0.05％三氟乙酸的乙腈溶液，混匀，离心。本专利技术人尝试用乙腈溶液沉淀紫杉醇(白蛋白结合型)制剂，发现白蛋白纳米粒会团聚，形成块状沉淀，辛酸钠会被包裹其中，导致辛酸钠不能准确被定量。
[0006]文献2(中华人民共和国药典2020年版四部)采用气相色谱法对人血白蛋白中辛酸钠含量进行检测，本专利技术人采用药典的方法对紫杉醇(白蛋白结合型)制剂中辛酸钠的含量进行检测，但发现样品前处理过程较繁琐，需要先将三氯甲烷萃取溶剂挥发至干后，再用适量三氯甲烷溶解挥干物后进样；另外，人血白蛋白和辛酸钠通过离心分离，由于水相和三氯甲烷有机相不易完全分离，少量的白蛋白会存在于挥干物中，再用适量三氯甲烷溶解会形
成形成黑色残渣，干扰进样检测。
[0007]因此，现有技术不能检测注射用紫杉醇(白蛋白结合型)中辛酸钠的含量，先迫切需要一种可以快速、准确地检测该制剂中辛酸钠的含量的方法。

技术实现思路

[0008]本专利技术目的在于提供一种快速、准确地检测注射用紫杉醇(白蛋白结合型)中辛酸钠含量的检测方法。
[0009]为实现上述目的，本专利技术提供了一种高效液相色谱法检测注射用紫杉醇(白蛋白结合型)中辛酸钠含量的检测方法，所述高效液相色谱法采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以流动相A和B按一定比例进行梯度洗脱；其中，所述的流动相A磷酸缓冲溶液与乙腈的混合溶液；所述的流动相B为乙腈；
[0010]进一步地，本专利技术所述的色谱柱为YMC
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Pack ODS
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A，规格为4.6mm
×
150mm
×
3μm或效能相当的色谱柱；
[0011]进一步地，本专利技术所述的流动相A磷酸缓冲溶液选自磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸钾、磷酸钠、磷酸二氢铵、磷酸氢二铵、磷酸铵盐缓冲液中的一种或几种；
[0012]优选地，所述的流动相A磷酸缓冲溶液为磷酸二氢钠；
[0013]进一步地，所述流动相A中添加了pH调节剂，流动相中添加pH调节剂有助于分离物质和改善峰形，使检测结果的准确度及精密度更高；
[0014]优选地，所述pH调节剂为酸类；
[0015]更优选地，所述pH调节剂为磷酸；
[0016]进一步地，本专利技术所述的流动相A是磷酸二氢钠溶液与乙腈的混合溶液，用磷酸调节磷酸二氢钠溶液pH值至2.7～2.9；混合溶液中磷酸二氢钠溶液与乙腈的体积比为50：50；
[0017]进一步地，本专利技术所述的流动相A是磷酸二氢钠溶液浓度为0.03mol/L；
[0018]进一步地，本专利技术所述的流动相A和B按一定比例混合进行梯度洗脱，梯度比例为：
[0019]0→
15min，流动相A与B的体积比为100:0，
[0020]20min，流动相A与B的体积比为50:50，
[0021]20.1
→
30min，流动相A与B的体积比为100:0；
[0022]进一步地，本专利技术所述的色谱条件流速为0.8～1.2mL/min；
[0023]优选地，所述的流速为1mL/min；
[0024]进一步地，本专利技术所述的色谱条件进样量为10～20μl；
[0025]优选地，所述进样量为20μl；
[0026]进一步地，本专利技术所述的色谱条件柱温为20～50℃；
[0027]优选地，所述柱温为25℃；
[0028]进一步地，本专利技术所述的色谱条件检测器为紫外检测器；
[0029]进一步地，本专利技术所述的色谱条件检测波长为210
±
5nm；
[0030]优选地，检测波长为210nm；
[0031]本专利技术中还提供一种高效液相色谱法检测注射用紫杉醇(白蛋白结合型)中辛酸钠含量的方法，包括以下步骤：
[0032](1)供试品溶液：取紫杉醇(白蛋白结合型)制剂1瓶，加入0.9％氯化钠溶液20ml，轻轻振摇使分散，精密量取3ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，涡旋2min，滤过，精密量取续滤液4ml，置10ml量瓶，用流动相A稀释至刻度，摇匀；
[0033](2)对照品溶液：取辛酸钠适量，精密称定，用流动相A溶解并定量稀释制成1ml中约含86.4μg的溶本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种白蛋白结合型紫杉醇注射剂中辛酸钠含量的检测方法，其特征在于，采用高效液相色谱法，色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相由A相和B相组成，其中流动相A为磷酸缓冲溶液与乙腈的混合溶液，流动相B为乙腈。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述色谱柱为YMC
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PackODS
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A，规格为4.6mm
×
150mm
×
3μm。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述流动相A中的磷酸缓冲溶液选自磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸钾、磷酸钠、磷酸二氢铵、磷酸氢二铵、磷酸铵盐缓冲液中的一种或几种，优选为磷酸二氢钠溶液。4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述流动相A中的磷酸二氢钠溶液浓度为0.03mol/L，pH值为2.7～2.9。5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述流动相A中的磷酸二氢钠溶液与乙腈的体积比为50：50。6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，以流动相A和B按一定比例进行梯度洗脱，所述梯度洗脱比例...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨艳艳，詹晓勇，葛祥军，胡和平，
申请(专利权)人：四川汇宇海玥医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：