一种猪繁殖与呼吸综合征突变病毒及其构建方法与应用技术

本发明专利技术属于病毒基因工程技术领域，具体涉及一种猪繁殖与呼吸综合征突变病毒RvJXwn

【技术实现步骤摘要】
一种猪繁殖与呼吸综合征突变病毒及其构建方法与应用


[0001]本专利技术属于病毒基因工程
，具体涉及一种猪繁殖与呼吸综合征突变病毒RvJXwn
‑
nsp1α
‑
G90A，并进一步公开其构建方法与应用。

技术介绍

[0002]猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种高度传染性疾病，在临床上主要以母猪严重的繁殖障碍和各生产阶段猪的呼吸道疾病为特征。1987年，该病首先发生于美国，随后迅速蔓延至全球主要养猪区域。我国于20世纪90年代中期出现PRRS疫情并确认病原，随后PRRSV很快传播到我国大部分养猪地区，成为影响我国养猪业健康发展的重要病原之一。2006年，我国出现高致病PRRSV(Highly pathogenic PRRSV，HP
‑
PRRSV)，引发以急性、高热(>42℃)、高发病率(100％)和高死亡率(30％
‑
100％)为特征的临床疫情，给我国养猪业造成了难以估量的经济损失。
[0003]大量数据表明，有效防控PRRSV面临的主要挑战是病毒的持续性感染，由于PRRSV可通过多种策略逃逸宿主的天然免疫和获得性免疫反应，可见，免疫逃逸是造成PRRSV持续性感染的主要原因。其中一个原因即是PRRSV JXwn06nsp1α能够下调其靶细胞
‑
猪肺泡巨噬细胞(PAMs)表面的SLA
‑
I分子，从而逃避宿主的细胞免疫反应，然而nsp1α的作用机制尚未阐述清楚。因此，鉴定nsp1α分子中发挥诱导降解作用的关键氨基酸位点，有助于解析PRRSV免疫逃逸的机制，为PRRSV疫苗的研发提供新靶点。
[0004]疫苗被认为是防控与净化PRRSV的重要工具和手段，然而，目前已商品化的PRRSV疫苗均存在各种问题，其中，减毒活疫苗的长期使用存在毒力返强等潜在风险则是一个重要因素。随着反向遗传操作技术的建立与发展，使对RNA病毒基因组在其cDNA分子水平上进行人工操作成为可能，如对基因进行点突变、缺失、插入、颠换、转位和互补等改造。目前，反向遗传操作技术已用于分析和研究PRRSV的基因结构与功能、病毒RNA合成的调控机制、致病机制，并为新型疫苗的研究提供技术保障。

技术实现思路

[0005]为此，本专利技术所要解决的技术问题在于针对猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫逃逸的生物特性，提供一种猪繁殖与呼吸综合征突变病毒RvJXwn
‑
nsp1α
‑
G90A，其诱导降解靶细胞表面SLA
‑
I分子的功能严重受损；
[0006]本专利技术所要解决的第二个技术问题在于提供上述突变病毒的构建方法；
[0007]本专利技术所要解决的第三个技术问题在于提供上述突变病毒作为疫苗候选株的用途。
[0008]为解决上述技术问题，本专利技术所述的一种猪繁殖与呼吸综合征突变病毒，所述突变病毒是一种诱导降解靶细胞表面SLA
‑
I分子功能严重受损的突变病毒，所述突变病毒为在非结构蛋白nsp1α基因编码区第90位氨基酸由甘氨酸突变为丙氨酸的突变病毒。
[0009]具体的，所述突变病毒在非结构蛋白nsp1α基因编码区第90位氨基酸位点的核苷酸序列为GCA、GCT、GCG或GCC。
[0010]具体的，所述猪繁殖与呼吸综合征突变病毒为JXwn06毒株突变病毒，所述突变病毒记为RvJXwn
‑
nsp1α
‑
G90A。
[0011]本专利技术还公开了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒载体，所述病毒载体包含所述猪繁殖与呼吸综合征突变病毒。
[0012]本专利技术还公开了一种所述猪繁殖与呼吸综合征突变病毒的构建方法，包括如下步骤：
[0013](1)构建猪繁殖与呼吸综合征突变病毒的克隆质粒；
[0014](2)将含有所述猪繁殖与呼吸综合征突变病毒的克隆质粒导入细胞中进行病毒拯救，即得。
[0015]具体的，所述步骤(1)中，所述猪繁殖与呼吸综合征突变病毒的克隆质粒为包括非结构蛋白nsp1α第90位氨基酸为丙氨酸的猪繁殖与呼吸综合征病毒序列，所述非结构蛋白nsp1α基因编码区第90位氨基酸位点处的核苷酸序列为GCA、GCT、GCG或GCC。
[0016]具体的，所述步骤(2)中，所述细胞包括MARC
‑
145、3D4/21、BHK
‑
21、PK
‑
15或Vero细胞中的至少一种。
[0017]本专利技术还公开了所述猪繁殖与呼吸综合征突变病毒或其传代培养后的病毒用于制备猪繁殖与呼吸综合征疫苗的用途。
[0018]本专利技术还公开了一种猪繁殖与呼吸综合征疫苗，含有所述猪繁殖与呼吸综合征突变病毒或其传代培养的病毒。
[0019]本专利技术还公开了所述猪繁殖与呼吸综合征突变病毒在研究猪繁殖与呼吸综合征病毒降解SLA
‑
I分子领域的应用。
[0020]本专利技术所述猪繁殖与呼吸综合征突变病毒RvJXwn
‑
nsp1α
‑
G90A，通过生物物理方法鉴定PRRSV JXwn06nsp1α中发挥诱导降解SLA
‑
I分子作用的关键氨基酸位点，并利用感染性克隆技术对病毒基因组核苷酸进行突变，通过将高致病性的PRRSV毒株JXwn06非结构蛋白nsp1α的第90位氨基酸由甘氨酸突变为丙氨酸获得突变病毒，获取了可降解PAMs表面SLA
‑
I分子功能受损的突变毒株。该突变病毒感染宿主细胞后，可诱导降解靶细胞表面SLA
‑
I分子的功能严重受损，且该突变病毒遗传性质表现稳定，可作为猪繁殖与呼吸综合征的疫苗侯选株，用于预防猪繁殖与呼吸综合征，具有良好的应用前景。
附图说明
[0021]为了使本专利技术的内容更容易被清楚的理解，下面根据本专利技术的具体实施例并结合附图，对本专利技术作进一步详细的说明，其中，
[0022]图1为突变病毒RvJXwn
‑
nsp1α
‑
G90A全长cDNA克隆质粒pWSK
‑
JXwn
‑
nsp1α
‑
G90A构建示意图，其中，A、B、C和D框分别代表JXwn06毒株的基因，突变位点为PRRSV JXwn06nsp1α基因编码区第269位碱基，由鸟嘌呤(G)突变为胞嘧啶(C)，从而导致nsp1α第90位氨基酸由甘氨酸突变为丙氨酸；
[0023]图2为突变病毒RvJXwn
‑
nsp1α
‑
G90A在MARC
‑
145细胞上产生的CPE，其中，(A)为RvJXwn
‑
WT；(B)为RvJXwn
‑
nsp1α
‑本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种猪繁殖与呼吸综合征突变病毒，其特征在于，所述突变病毒是一种诱导降解靶细胞表面SLA
‑
I分子功能严重受损的突变病毒，所述突变病毒在非结构蛋白nsp1α基因编码区第90位氨基酸由甘氨酸突变为丙氨酸的突变病毒。2.根据权利要求1所述的猪繁殖与呼吸综合征突变病毒，其特征在于，所述突变病毒在非结构蛋白nsp1α基因编码区第90位氨基酸位点的核苷酸序列为GCA、GCT、GCG或GCC。3.根据权利要求1或2所述的猪繁殖与呼吸综合征突变病毒，其特征在于，所述猪繁殖与呼吸综合征突变病毒为JXwn06毒株突变病毒，所述突变病毒记为RvJXwn
‑
nsp1α
‑
G90A。4.一种猪繁殖与呼吸综合征病毒载体，其特征在于，所述病毒载体包含权利要求1
‑
3任一项所述猪繁殖与呼吸综合征突变病毒。5.一种权利要求1
‑
3任一项所述猪繁殖与呼吸综合征突变病毒的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)构建猪繁殖与呼吸综合征突变病毒的克隆质粒；(2)将含有所述猪繁殖与呼吸综合征突变病毒的克隆质粒导入细胞中进行病毒拯救，即得。6.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨汉春，刘园园，韩军，郭鑫，周磊，盖新娜，张永宁，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：