结合人NGF的抗体、其制备方法和用途技术

本发明专利技术属于疼痛治疗和生物技术领域，涉及一种结合人NGF的抗体或其抗原结合片段，能够有效结合人NGF，阻断NGF-TrKA的信号通路，应用于制备治疗NGF过表达的疾病(例如创伤、炎症、慢性疼痛)的药物，具有良好的临床应用前景。具有良好的临床应用前景。

【技术实现步骤摘要】
结合人NGF的抗体、其制备方法和用途


[0001]本专利技术属于疼痛治疗和生物
，涉及一种结合人NGF的抗体、其制备方法和用途。

技术介绍

[0002]神经生长因子(NGF)对神经系统的生长发育具有十分重要的作用，为神经元增殖、分化和存活以及功能维持所必需，并能促进神经损伤后的修复和再生。NGF的主要受体是TrkA。NGF有疼痛信号传递功能，罕见人体基因变异表明阻断NGF或其受体TrkA可以终止疼痛信号。大量的动物和人体实验表明，NGF的表达水平在创伤、炎症和慢性疼痛中都有所升高。阻断NGF-TrkA信号可显著抑制疼痛，并且不会对中枢神经系统造成严重影响。
[0003]疼痛是影响人们生活质量和致残的主要疾病，是未被满足的重大医疗需求之一。虽然阿片类止痛药效果很好，但其成瘾性和大规模使用带来的滥用已成为一个严重的社会问题，美国阿片止痛药滥用已经到了影响人均寿命的程度。但是疼痛也是动物感知环境风险的重要机制，所以高选择性止痛药物发现难度极大。临床试验结果显示，NGF中和抗体是少有的疗效能和吗啡类药物媲美但无成瘾风险的止痛药。
[0004]Tanezumab是第一个进入临床的NGF中和抗体，最早由Rinat Neuroscience开发。由于阿片类和非甾体抗炎类(Nonsteroidal Anti-inflammatory Drugs，NSAIDs)止痛药的滥用，理论上没有成瘾风险的Tanezumab备受监管机构和业内期待。2017年6月，FDA授予Tanezumab治疗骨关节炎、慢性腰背痛的快速通道资格。目前尚无此机制产品上市。然而，仍亟待开发新型、特异、高效、无风险的NGF中和抗体满足临床治疗需求，从而能够改善患有创伤、炎症和慢性疼痛类疾病人群的生活质量，为患者提供更多、更有效的治疗方案。

技术实现思路

[0005]为了解决上述技术问题，本专利技术的专利技术人进行了大量试验，从抗原免疫、杂交瘤筛选、抗体表达纯化到生物活性鉴定，筛选获得了特异性结合人NGF的鼠源抗体，并在此基础上，进一步构建获得其嵌合抗体以及人源化抗体。
[0006]因此，本专利技术的目的在于提供一种结合人NGF的抗体或其抗原结合片段；提供编码所述结合人NGF的抗体或其抗原结合片段的核苷酸分子；提供包含所述核苷酸分子的表达载体；提供所述表达载体的宿主细胞；提供所述结合人NGF的抗体或其抗原结合片段制备方法；提供包含所述结合人NGF的抗体或其抗原结合片段药物组合物；提供所述结合人NGF的抗体或其抗原结合片段在制备药物中的应用。
[0007]为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：
[0008]本专利技术一方面提供一种结合人NGF的抗体或其抗原结合片段，包括：
[0009](a)重链互补决定区H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3，所述的H-CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示，所述的H-CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示，所述的H-CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：9所示，和
[0010](b)轻链互补决定区L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3，所述的L-CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：10所示，所述的L-CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：11所示，所述的L-CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：12所示。
[0011]本专利技术“抗体(Ab)”是约150000道尔顿的异四聚糖蛋白，其由两个相同的轻链(L)和两个相同的重链(H)组成。每条轻链通过一个共价二硫键与重链相连，而不同免疫球蛋白同种型的重链间的二硫键数目不同。每条重链和轻链也有规则间隔的链内二硫键。每条重链的一端有可变区(VH)，其后是恒定区。每条轻链的一端有可变区(VL)，另一端有恒定区；轻链的恒定区与重链的第一个恒定区相对，轻链的可变区与重链的可变区相对。本专利技术的抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体、由至少两种抗体形成的多特异性抗体(例如双特异性抗体)等。
[0012]本专利技术“单克隆抗体”指从一类基本均一的群体获得的抗体，即该群体中包含的单个抗体是相同的，除少数可能存在的天然发生的突变外。单克隆抗体高特异性地针对单个抗原位点。而且，与常规多克隆抗体制剂(通常是具有针对不同决定簇的不同抗体)不同，各单克隆抗体是针对抗原上的单个决定簇。除了它们的特异性外，单克隆抗体的好处还在于它们是通过杂交瘤培养来合成的，不会被其它免疫球蛋白污染。修饰语“单克隆”表示了抗体的特性，是从基本均一的抗体群中获得的，这不应被解释成需要用任何特殊方法来生产抗体。
[0013]本专利技术“抗原结合片段”是指能够与人NGF特异性结合的抗体的片段。本专利技术的抗原结合片段的例子包括Fab片段、F(ab
’
)2片段、Fv片段等。Fab片段是用木瓜蛋白酶消化抗体产生的片段。F(ab
’
)2片段是用胃蛋白酶消化抗体产生的片段。Fv片段是由抗体的重链可变区和轻链可变区紧密非共价关联的二聚物组成。
[0014]作为优选的方案，所述的抗体为鼠源抗体、嵌合抗体或人源化抗体。
[0015]本专利技术“鼠源抗体”是指来源于大鼠或小鼠的抗体，优选小鼠。本专利技术的鼠源抗体为使用人NGF为抗原免疫小鼠并进行杂交瘤细胞筛选获得。
[0016]本专利技术“嵌合抗体”是指包含来源于一个物种的重和轻链可变区序列以及来源于另一个物种的恒定区序列的抗体，例如具有与人恒定区连接的鼠重和轻链可变区的抗体。优选的，本专利技术的嵌合抗体是由鼠源抗体183C6重链可变区和轻链可变区序列与人的恒定区拼接获得。更优选的，本专利技术的嵌合抗体选自183C6-Chimeric。
[0017]本专利技术“人源化抗体”是指其CDR来源于非人物种(优选小鼠)抗体，抗体分子中残余的部分(包括框架区和恒定区)来源于人抗体。此外，框架区残基可被改变以维持结合亲和性。优选的，本专利技术的人源化抗体由鼠源抗体183C6的CDR区和来源自人抗体的非CDR区重组，增加第四个框架区并对部分有重要影响的残基进行突变获得。更优选的，本专利技术的人源化抗体选自183C6-Humanized。
[0018]作为优选的方案，所述的抗原结合片段包括Fab片段、F(ab
’
)2片段、Fv片段。
[0019]作为优选的方案，所述的结合人NGF的抗体或其抗原结合片段的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示；或所述的结合人NGF的抗体或其抗原结合片段的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：13所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：14所示。
[0020]作为优选的方案，所述的结合人NGF的抗体或其抗原结合片段的重链的氨基酸序
列如SEQ ID NO：19所示，轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO：20所示。
[0021]本专利技术另一方面提供了一种核苷酸分子，所述核苷酸分子编码上述结合人NGF的抗体或其抗原结合片段。
[0022]作为优选的方案，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.结合人NGF的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，包括：(a)重链互补决定区H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3，所述的H-CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示，所述的H-CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示，所述的H-CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：9所示，和(b)轻链互补决定区L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3，所述的L-CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：10所示，所述的L-CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：11所示，所述的L-CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：12所示。2.如权利要求1所述的结合人NGF的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的抗体为鼠源抗体、嵌合抗体或人源化抗体。3.如权利要求1所述的结合人NGF的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的抗原结合片段包括Fab片段、F(ab
’
)2片段、Fv片段。4.如权利要求1所述的结合人NGF的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的结合人NGF的抗体或其抗原结合片段的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示；或所述的结合人NGF的抗体或其抗原结合片段的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：13所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：14所示。5.如权利要求1所述的结合人NGF的抗体或其抗原结合片段，所述的结合人NGF的抗体或其抗原结合片段的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO：19所示，轻链的氨基酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱祯平，黄浩旻，陈建鹤，郭伟，赵杰，
申请(专利权)人：三生国健药业上海股份有限公司，
类型：发明
国别省市：