一种抗FGF19抗体及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种抗FGF19抗体及其应用，所述抗FGF19抗体由杂交瘤细胞系产生，所述杂交瘤细胞系命名为鼠抗人FGF19单克隆抗体杂交瘤细胞系MJ19

【技术实现步骤摘要】
一种抗FGF19抗体及其应用


[0001]本专利技术属于免疫化学
，涉及一种抗FGF19抗体及其应用。

技术介绍

[0002]人成纤维细胞生长因子（FGF）信号通路在细胞增殖、分化和血管生成等多种细胞进程中发挥着重要作用。人成纤维细胞生长因子19（FGF19）是FGF蛋白家族的一员，基因位于11q13.1，分子量约为21 kDa，为分泌型蛋白。FGF19表达于胎儿脑、软骨、视网膜、成人胆囊以及肿瘤细胞中。
[0003]研究表明，FGFR4是FGF19的唯一特异性受体。FGF19和FGFR4结合可以抑制细胞凋亡和NF
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κβ信号，上调细胞增殖相关基因，从而促进肿瘤细胞的增殖。FGF19的扩增和过表达与恶性肿瘤的发生和发展密切相关，如在肝细胞癌、胰腺癌、膀胱癌、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、宫颈癌、骨髓瘤等肿瘤组织中，FGF19的表达显著高于正常组织。进一步的研究显示，人肝细胞癌细胞中FGF19通过激活肝细胞表面的FGFR4，从而引起肝细胞增殖和肝细胞癌形成。因此，FGF19是肝细胞癌（HCC）的潜在治疗靶点。
[0004]BLU
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554是处于临床试验阶段的新型靶向药，作用靶点是FGFR4。针对FGF19
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FGFR4信号通路异常的晚期肝细胞癌的I期试验数据显示，BLU
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554对66例FGF19免疫组化阳性（TC≥1%，IHC+）患者的总缓解率为17%，而对32例FGF19免疫组化阴性（TC<1%，IHC
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）患者的总缓解率为0%，说明FGF19的表达水平可指导FGFR4抑制剂的使用。因此，制备一种高特异性和灵敏度的抗FGF19抗体是临床诊断所必需的。
[0005]目前，市场上能够特异性并高灵敏检测FGF19的抗体数量极少，尤其是能够应用于免疫组织化学（IHC）的抗FGF19单克隆抗体。经过对商品化试剂的查新和筛选，市场上针对人FGF19的单克隆抗体中，特异性和灵敏度较好的抗体包括CST的克隆D1N3R（货号83348）、Santa Cruz的克隆H
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12（货号sc
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390621）和义翘神州的克隆#032（货号12226
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R032）。
[0006]因此，制备特异性强、灵敏度高、应用范围广的抗FGF19单克隆抗体，具有重要的现实意义和应用价值。

技术实现思路

[0007]针对现有技术的不足和实际需求，本专利技术提供了一种抗FGF19抗体及其应用，所述抗FGF19抗体对FGF19具有特异性高亲和力，在制备FGF19检测试剂盒中具有重要的应用前景。
[0008]为达此目的，本专利技术采用以下技术方案：第一方面，本专利技术提供了一种抗FGF19抗体，所述抗FGF19抗体由杂交瘤细胞系产生，所述杂交瘤细胞系命名为鼠抗人FGF19单克隆抗体杂交瘤细胞系MJ19
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7，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮政编码100101，保藏编号为CGMCC No. 21492，保藏日期为2021年1月20日。
[0009]本专利技术中，采用SEQ ID NO: 1所示的人源FGF19重组蛋白作为免疫原免疫小鼠，取
免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合形成杂交瘤细胞，筛选出灵敏度和特异性最强的杂交瘤细胞系克隆MJ19
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7用于制备抗FGF19抗体。
[0010]优选地，所述抗FGF19抗体的抗原为人源FGF19蛋白。
[0011]优选地，所述人源FGF19蛋白包括SEQ ID NO: 1所示的氨基酸序列。
[0012]优选地，所述抗FGF19抗体为重链IgG1、轻链κ型鼠源单克隆抗体。
[0013]优选地，当所述抗FGF19抗体应用于构建FGF19检测试剂盒时，所述抗FGF19抗体可以修饰有缀合物，所述缀合物包括辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶（AP）、生物素（Biotin）、异硫氰酸荧光素（FITC）、Cy3、Cy5等，连接方式包括化学键偶联、静电吸附或亲疏水性吸附。
[0014]第二方面，本专利技术提供了一种第一方面所述的抗FGF19抗体的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：（1）取经人源FGF19蛋白免疫的小鼠的脾细胞，与骨髓瘤细胞进行融合，制备杂交瘤细胞；（2）利用制备的杂交瘤细胞免疫小鼠，从小鼠中获得抗FGF19抗体。
[0015]第三方面，本专利技术提供了一种FGF19免疫组织化学检测试剂盒，所述FGF19免疫组织化学检测试剂盒包括第一方面所述的抗FGF19抗体。
[0016]优选地，所述FGF19免疫组织化学检测试剂盒还包括免疫组织化学抗原修复缓冲液、封闭液、酶标二抗、显色剂或苏木素复染液中的任意一种或至少两种的组合。
[0017]第四方面，本专利技术提供了一种FGF19免疫印迹检测试剂盒，所述FGF19免疫印迹检测试剂盒包括第一方面所述的抗FGF19抗体。
[0018]优选地，所述FGF19免疫印迹检测试剂盒还包括十二烷基硫酸钠
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聚丙烯酰胺凝胶、硝酸纤维素膜、封闭液或酶标二抗中的任意一种或至少两种的组合。
[0019]第五方面，本专利技术提供了一种FGF19酶联免疫吸附检测试剂盒，所述酶联免疫吸附检测试剂盒包括第一方面所述的抗FGF19抗体包被的酶标板。
[0020]优选地，所述酶联免疫吸附检测试剂盒还包括封闭液、酶标二抗、显色液或终止液中的任意一种或至少两种的组合。
[0021]第六方面，本专利技术提供了一种FGF19免疫荧光检测试剂盒，所述FGF19免疫荧光检测试剂盒包括第一方面所述的抗FGF19抗体。
[0022]优选地，所述抗FGF19抗体修饰有荧光基团，优选为FITC、Cy3或Cy5中的任意一种。
[0023]第七方面，本专利技术提供了一种FGF19流式细胞术检测试剂盒，所述FGF19流式细胞术检测试剂盒包括第一方面所述的抗FGF19抗体。
[0024]第八方面，本专利技术提供了第一方面所述的抗FGF19抗体、第三方面所述的FGF19免疫组织化学检测试剂盒、第四方面所述的FGF19免疫印迹检测试剂盒、第五方面所述的FGF19酶联免疫吸附检测试剂盒、第六方面所述的FGF19免疫荧光检测试剂盒或第七方面所述的FGF19流式细胞术检测试剂盒在制备FGF19蛋白表达检测产品中的应用。
[0025]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：（1）本专利技术将经过人源FGF19重组蛋白免疫的小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合形成杂交瘤细胞，制备的抗FGF19单克隆抗体的特异性好，与人源FGF19亲和力强；（2）本专利技术基于抗FGF19单克隆抗体的人源FGF19检测试剂盒灵敏度高，相较于市
售商品可以准确检测不同临床样本中FGF19蛋白的表达水平，在特异性、灵敏度方面均优于市售商品，具有重要的应用前景。
附图说明
[本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗FGF19抗体，其特征在于，所述抗FGF19抗体由杂交瘤细胞系产生，所述杂交瘤细胞系命名为鼠抗人FGF19单克隆抗体杂交瘤细胞系MJ19
‑
7，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No. 21492，保藏日期2021年1月20日。2.根据权利要求1所述的抗FGF19抗体，其特征在于，所述抗FGF19抗体的抗原为人源FGF19蛋白；所述人源FGF19蛋白包括SEQ ID NO: 1所示的氨基酸序列。3.根据权利要求1或2所述的抗FGF19抗体，其特征在于，所述抗FGF19抗体为重链IgG1、轻链κ型鼠源单克隆抗体；所述抗FGF19抗体修饰有缀合物；所述缀合物包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、生物素或荧光基团中的任意一种。4.一种权利要求1
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3任一项所述的抗FGF19抗体的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：（1）取经人源FGF19蛋白免疫的小鼠的脾细胞，与骨髓瘤细胞进行融合，制备杂交瘤细胞；（2）利用制备的杂交瘤细胞免疫小鼠，从小鼠中获得抗FGF19抗体。5.一种FGF19免疫组织化学检测试剂盒，其特征在于，所述FGF19免疫组织化学检测试剂盒包括权利要求1
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3任一项所述的抗FGF19抗体；所述FGF19免疫组织化学检测试剂盒还包括免疫组织化学抗原修复缓冲液、封闭液、酶标二抗、显色剂或苏木素复染液中的任意一种或至少两种的组合。6.一种FGF19免疫印迹检测试剂盒，...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖彦羚，陈才伟，张亚飞，戴平，姜威，
申请(专利权)人：迈杰转化医学研究苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：