一种高通量单个免疫细胞表面受体核酸序列检测方法技术

本发明专利技术涉及单细胞分析领域，具体涉及一种高通量单个免疫细胞表面受体核酸序列检测方法。本发明专利技术提供一种低成本、简便的高通量单个免疫细胞表面受体核酸序列检测方法。本发明专利技术利用泊松分布原理使每个单细胞分配一个捕获磁珠，通过链特异性PCR可以完成单细胞TCR的富集，可有效提高细胞检测的通量，一次实验可以检测500

【技术实现步骤摘要】
一种高通量单个免疫细胞表面受体核酸序列检测方法


[0001]本专利技术涉及单细胞分析领域，具体涉及一种高通量单个免疫细胞表面受体核酸序列检测方法。

技术介绍

[0002]获得性免疫系统由B淋巴细胞和T淋巴细胞组成，其细胞表面均有负责特异性识别及结合抗原的分子，分别称为B细胞受体（BCRs）和T细胞受体( TCRs)。T细胞受体、B细胞受体和分泌型抗体的多样性构成复杂免疫系统的核心，并作为保护身体免受入侵病毒、细菌和其他物质的关键防御成分。TCR由异二聚体αβ链（~95％，TRA，TRB）或γδ链（~5％）组成，而BCR由两条重链（IGH）和两条轻链（IGK或IGL）组装而成。在结构上，每条链可分为可变结构域和恒定结构域。由于可变结构域上V（D）J基因重排以及种系核苷酸的随机缺失，TCR和BCR谱呈巨大的多样性。在人类中，从理论上估计TCR
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αβ受体的多样性在胸腺中超过10
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，TCR的多样性直接决定了TCR的抗原结合特异性。考虑到体细胞突变，B细胞受体的多样性甚至更大。
[0003]近年来，由于测本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高通量单个免疫细胞表面受体核酸序列检测方法，特征在于，所述方法包括如下步骤： （1）将PBMC细胞悬液台盼蓝染色后加至微流控芯片，通过微孔分离单个细胞，使每个孔中得到一个细胞；（2）将能够捕获RNA的磁珠注入微流控芯片中，使PBMC细胞和磁珠在同一个微孔中；（3）向微流控芯片中注入细胞裂解液，使细胞裂解释放出RNA，释放出的RNA被磁珠捕获；（4）捕获完成后，取出带有RNA的磁珠，用反转录试剂进行反转录，合成CDNA第一链；（5）反转录完成后的产物进行PCR富集TCR/BCR。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中所述PBMC悬液的细胞浓度为1~2
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5 cells/mL，细胞活性大于85%。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中所述微流控芯片的微孔数为1000~50000个。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中所述同一个微孔为每个微孔中同时含有一个PBMC细胞和一个能捕获RNA引物的条形码的磁珠。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）中所述细胞裂解液的组成成分中含有1 M ~2M Tris
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Hcl 5μL，0.5 M~1M Licl 10 μL，10%~15%Triton 0.5μL，5~10mM EDTA 2μL，5mM DTT 5μL，Dnase/Rnase
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Free Water 72.5μL，dNTP mix 5μL。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的细胞裂解液的组成成分为：每100 μL的细胞裂解液中含有2M T...

【专利技术属性】
技术研发人员：訾晓渊，朱文奇，
申请(专利权)人：南京通元医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：