一种捕获cfDNA5hmC片段的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种捕获cfDNA5hmC片段的检测方法，包括以下步骤：步骤一：预先准备需要使用的试剂，置于冰上，建立体系，温度时间为37℃、2h；步骤二：加入2.5μlDBCO

【技术实现步骤摘要】
一种捕获cfDNA5hmC片段的检测方法


[0001]本专利技术涉及捕获cfDNA5hmC片段
，具体为一种捕获cfDNA5hmC片段的检测方法。

技术介绍

[0002]5‑
羟甲基胞嘧啶(5
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hydroxymethylcytosine,5hmC)最早于1952年在噬菌体DNA中被发现。它能被糖基转移酶介导发生糖基化修饰，从而使噬菌体DNA在进入宿主后能抵抗宿主限制酶的降解。但当时5hmC的功能并没有引起更多的重视。直到2009年，Heintz和Rao研究组分别在同期Science杂志上报道了在人和小鼠的脑、胚胎干细胞DNA中含有丰富的5hmC，这才让更多的研究人员重新着手认识这个修饰碱基，随着研究的深入,5hmC参与的重要生物学作用逐渐被人们发现,同时也促使着5hmC的检测和定量方法不断发展.为了区分5hmC与其他胞嘧啶衍生物,很多利用化学或者酶学修饰实现靶向检测或非靶向富集5hmC的方法应运而生.但目前效果并不理想。因此我们对此做出改进，提出一种捕获cfDNA5hmC片段的检测方法。r/>
技术实现思路
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种捕获cfDNA5hmC片段的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：预先准备需要使用的试剂，置于冰上，建立体系，温度时间为37℃、2h；步骤二：加入2.5μlDBCO
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PEG4
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biotin,37℃，孵育2h；步骤三：再使用MicroBio
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spin30column(Bio
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Rad)纯化；步骤四：取5μlCI磁珠，吹打均匀后置于磁力架上，待澄清后吸走上清液，加50μl的2*buffer1在旋转架上孵育3min后，置于磁力架上待澄清后吸走上清液，再加50μl的2*buffer1吹打均匀重悬磁珠；步骤五：将均匀的重悬磁珠加到已定容至50μl的1.5ml管中，在旋转架上孵育30min；步骤六：分别用100μl的buffer1(1x)，buffer2(1x),buffer3，andbuffer4洗脱，每种buffer洗两次，每次洗时置于旋转架上5min。2.根据权利要求1所述的一种捕获cfDNA5hmC片段的检测方法，其特征在于，所述步骤一中，建立体系选择试剂10*buffer、60μMUDP
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N3
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Gle、12.5UBGT、DNA和水的混合物，所述试剂的质量分别为2.5μl、0.5μl、1.25μl和21μl。3.根据权利要求1所述的一种捕获cfDNA5hmC片段的检测方法，其特征在于，所述步骤一中，试剂准备包括以下步骤：S1：AMPureXPbead应提前在室温放置30min，充分混匀成磁珠悬浮液；S2：取出新的1.5m低吸附离心管中，连接接头后的样本依次转入已标记的管，并加入80μL(0.8倍样本体积)AMPureXPbead，吹打混匀，室温放置5min后；S3：...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟晟，胡新蕾，严晓芹，闫子玥，
申请(专利权)人：深圳泰莱生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：