CFTR-Dvl2-β-catenin途径在白血病中的应用及产品制造技术

本发明专利技术公开了CFTR

【技术实现步骤摘要】
CFTR
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Dvl2
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β
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catenin途径在白血病中的应用及产品


[0001]本专利技术涉及CFTR
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Dvl2
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β
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catenin途径的应用和产品，尤其涉及CFTR
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Dvl2
‑
β
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catenin途径在白血病检测中的应用及产品，属于生物工程


技术介绍

[0002]白血病是一类造血干细胞恶性克隆性疾病。克隆性白血病细胞因为增值失控、分化障碍、凋亡受阻等机制在骨髓和其他造血组织中大量增值累积，并浸润其他非造血组织和器官，同时抑制正常造血功能。
[0003]目前，白血病的检查项目包括：血液生化六项检查、血常规、骨髓增生程度及骨髓象分析，从检查手段来看主要是基于血细胞数量、形态以及生化指标来判断，基本不用基因表达水平变化的分子水平的检测。且，现在的检查方法需要较丰富的临床经验、培训，这容易造成因人而异的检测差异，因此，发展分子水平的白血病检测方法很有必要，对提高检测的准确性、易行性至关重要。
[0004]于2006年11月29日公开了一种公开号为CN1869225，名称为“一种白血病相关基因ASH2L在白血病分子分型诊断中的应用”的专利文献，其中，公开了：白血病相关基因ASH2L编码的蛋白可与基因DPY
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30
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like编码的蛋白相互作用，二者是组蛋白甲基化转移酶复合体的成员。该专利技术研究发现ASH2L的表达在PMA刺激K562分化过程中被特异地下调，与ASH2L功能相关的DPY
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30
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like以及复合体另一个稳定成员WDR5的表达则没有如ASH2L的规律性变化，证明ASH2L的表达与K562增殖状态的正相关性是相对独特的，因此ASH2L可作为白血病分子分型诊断的侯选标志物。

技术实现思路

[0005]在长期的研究中，专利技术人团队发现：CFTR
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Dvl2
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β
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catenin途径在白血病病人的血液细胞中出现显著的高表达模式，通过定量PCR检测，该高表达模式作为检测白血病的全新指标，因此，结合现有技术的不足，本专利技术将CFTR
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Dvl2
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β
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catenin途径应用于定量检测白血病，并提出CFTR
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Dvl2
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β
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catenin途径在白血病中的应用及产品。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术的技术方案如下：CFTR
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Dvl2
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β
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catenin途径在白血病中的应用，包括所述CFTR
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Dvl2
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β
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catenin途径在制备白血病检测的产品中的应用。
[0007]进一步的，所述白血病包括B细胞急性淋巴细胞白血病和T细胞急性淋巴细胞白血病。
[0008]进一步的，所述检测是针对受试者的生物样本进行，生物样本选自外周血。
[0009]CFTR
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Dvl2
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β
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catenin途径在白血病检测中的产品，包括检测试剂盒，检测试剂盒以通过检测样本中的CFTR
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Dvl2
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β
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catenin途径基因表达量作为检测指示，若样本中的CFTR
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Dvl2
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β
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catenin途径基因表达量升高且具有显著性，则表示检测为阳性，则判断为白血病病人；反之，则为非白血病病人。其中，样本为外周血。
[0010]进一步的，所述检测试剂盒包括CFTR
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Dvl2
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β
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catenin途径基因扩增引物、阳性对照、阴性对照、人外周血淋巴细胞分离液、总RNA提取试剂及反转录溶剂体系；其中，CFTR
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Dvl2
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β
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catenin途径基因扩增引物包括CFTR基因扩增引物、Dvl2基因扩增引物及β
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catenin基因扩增引物，CFTR基因扩增引物中，上游引物为AAAAGGCCAGCGTTGTCTCC，下游引物为AAACATCGCCGAAGGGCATTA；Dvl2基因扩增引物中，上游引物为GAGGAAGAGACTCCCTACCTG，下游引物为CGGGCGTTGTCATCTGAAAT；β
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catenin基因扩增引物中，上游引物为AAAGCGGCTGTTAGTCACTGG，下游引物为CGAGTCATTGCATACTGTCCAT；阳性对照和内参均为β
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actin基因的表达量，β
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actin基因扩增引物中，上游引物为CATGTACGTTGCTATCCAGGC，下游引物为CTCCTTAATGTCACGCACGAT；阴性对照为无菌去离子水；CFTR基因的表达量、Dvl2基因的表达量和β
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catenin基因的表达量均与β
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actin基因的表达量相除，获得相对表达量。
[0011]经检测：白血病病人的CFTR
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Dvl2
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β
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catenin途径基因表达量为非白血病病人的CFTR
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Dvl2
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β
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catenin途径基因表达量的至少2倍。
[0012]进一步的，引物扩增时的tm值均为60℃，便于可在同一扩增程序中进行，节约检测时间。
[0013]在本技术方案中，涉及的术语解释或机理包括，CFTR（囊性纤维化跨膜调节因子，cystic fibrosis transmembrane conductance regulator)基因突变是导致囊性纤维化(cystic fibrosis, CF)发病的重要原因，现已知CFTR位于人类7号染色体长臂上q31一q32区域，是一种磷酸化依赖性细胞膜氯离子通道，是一种多次跨膜的膜内在糖蛋白,在跨上皮盐转运及体液分泌和吸收中起着核心作用；Dvl2是Wnt/β
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catenin信号通路胞内关键因子之一，当细胞跨膜受体(Frz)、LRP5/6与外界来源细胞分泌的Wnt蛋白结合,胞质内的转导通路信号被触发，Wnt通路开放，Dvl2被招募到细胞膜上，与Frz结合，导致GSK3β和CK1磷酸化，无法形成降解β
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catenin的复合物GSK3β
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Axin
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APC
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CK1，使β
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catenin在胞内积累并进入细胞核，与核内TCF/LEF...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.CFTR
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Dvl2
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β
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catenin途径在制备白血病检测的产品中的应用。2.根据权利要求1所述的CFTR
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Dvl2
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β
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catenin途径在制备白血病检测的产品中的应用，其特征在于：所述白血病包括B细胞急性淋巴细胞白血病和T细胞急性淋巴细胞白血病。3.根据权利要求1所述的CFTR
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Dvl2
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β
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catenin途径在制备白血病检测的产品中的应用，其特征在于：所述检测是针对受试者的生物样本进行，生物样本选自外周血。4.CFTR
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Dvl2
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β
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catenin途径在白血病检测中的产品。5.根据权利要求3所述的CFTR
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Dvl2
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β
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catenin途径在白血病检测中的产品，其特征在于：所述产品包括检测试剂盒，检测试剂盒以通过检测样本中的CFTR
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Dvl2
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β
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catenin途径基因表达量作为检测指示，若样本中的CFTR
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Dvl2
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β
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catenin途径基因表达量升高且具有显著性，则表示检测为阳性，则判断为白血病病人；反之，则为非白血病病人。6.根据权利要求4所述的CFTR
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Dvl2
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β
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catenin途径在白血病检测中的产品，其特征在于：所述样本为外周血。7.根据权利要求5所述的CFTR
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Dvl2
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β
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【专利技术属性】
技术研发人员：孙华钦，刘燕燕，林子媛，
申请(专利权)人：四川大学华西第二医院，
类型：发明
国别省市：