尿液miR-548q在多发性骨髓瘤疾病中的应用制造技术

本发明专利技术提供一种尿液miR-548q的应用，具体为尿液miR-548q在制备用于多发性骨髓瘤相关检测制剂中的应用。本发明专利技术通过研究证实，与正常对照组相比，miR-548q在多发性骨髓瘤组表达降低，可用于多发性骨髓瘤相关的检测、监测及辅助诊断。本发明专利技术发挥尿液标本获取无创、可大规模重复取样、保存方便的优势，利用尿液标本检测尿液miR-548q。548q。548q。

【技术实现步骤摘要】
尿液miR-548q在多发性骨髓瘤疾病中的应用


[0001]本专利技术涉及尿液miR-548q的新用途，具体涉及尿液miR-548q在制备用于多发性骨髓瘤相关检测制剂中的应用。

技术介绍

[0002]多发性骨髓瘤（multiple myeloma, MM）属于B细胞恶性肿瘤，临床表现与多种因素有关，例如肿瘤压迫脊髓，细胞因子导致贫血，骨损伤引起疼痛，蛋白沉积肾脏导致肾损伤等。尿常规检测出现尿蛋白、红细胞、白细胞、管型，甚至出现慢性肾功能衰竭、高磷酸血症、高钙血症、高尿酸血症等，患者经常首诊于肾内科而贻误了治疗时间。因此寻找更为有效、无创的诊断指标有助于肿瘤的早期诊断和监测。
[0003]miRNA是一类小非编码单链RNA，约22个碱基长度。自1990年发现以来，已发现人类存在的miRNA约有2500种。miRNA参与了多种疾病的生理及病理过程，包括细胞分化、血管生成、凋亡、肿瘤发展、转移、药物抵抗等。识别miRNA表达改变具有重要价值，如果将miRNA的特定特征与正常生理病理状态相结合，可有望作为疾病早期标志物或疾病严重程度的生物标记物。
[0004]越来越多的研究证明miRNAs参与了MM的发生、发展，它们不仅可用于MM诊断，还可用于疾病分层、预后评估及疗效判断。人类miR-548基因家族成员目前已知有80个。miR58q在肾细胞癌过度表达，通过阻断ILT2，增强NK细胞介导的HLA-G依赖性细胞毒性，控制免疫效应细胞活性。此外，miR-548q在鼻咽癌诊断中发挥关键作用。本研究中结果显示miR-548q靶基因8个，分别参与MAPK、Ras、PI3K-Akt、Hippo 等信号通路，这些信号通路失调与癌症，包括MM的发生有关。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种尿液miR-548q在制备用于多发性骨髓瘤相关检测制剂中的应用。
[0006]优选地，所述尿液miR-548q的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示（ccgccauuac uuuugc）。
[0007]优选地，所述尿液miR-548q在多发性骨髓瘤患者中低表达。
[0008]优选地，所述制剂为多发性骨髓瘤患者尿液miR-548q检测试剂盒。
[0009]优选地，所述试剂盒包括反转录系统、扩增系统和定量内参标准化系统，其中，所述扩增系统由实时荧光定量PCR反应体系组成，所述实时荧光定量PCR反应体系包含能够与miR-548q反转录产物特异性结合的扩增引物、cDNA、RNase-free水和SYBR Green聚合酶链式反应体系。
[0010]优选地，所述反转录系统由反转录体系试剂组成，其中，所述反转录体系试剂包括逆转录酶缓冲液、逆转录引物、逆转录酶。
[0011]优选地，所述定量内参标准化系统由内参引物组成。
[0012]专利技术人首先收集了正常健康体检组和多发性骨髓瘤患者的尿液标本，离心后取上清，采用miRNeasy kit试剂盒提取RNA，使用Agilent Human, Release 21.0 (8*60K, Design ID: 070156)分析MM和正常对照组miRNA差异表达， Feature Extraction software (version10.7.1.1, Agilent Technologies)获取图像和原始数据，Genespring software (version 13.1, Agilent Technologies)进行分析。采用层次聚类的方法来显示样本间可区分的miRNA表达模式，利用miRWalk 3.0和miRDB 6.0数据库，对筛选出的差异miRNA进行靶基因预测。用Student's t检验计算fold change和P值，筛选差异表达的miRNAs。上调和下调基因的阈值设置为fold change >2.0，P<0.05具有统计学意义。
[0013]本专利技术通过研究证实与正常对照组相比，尿液miR-548q在多发性骨髓瘤患者的尿液中低表达，并在MM初诊组、复发组、缓解组均较正常对照显著减低。
[0014]ROC曲线分析显示miR-548q产生的AUC分别为0.924 (P = 0.000, 95% CI: 0.820-1.000)。从而提出检测尿液miR-548q可用于多发性骨髓瘤疾病的检测、监测或辅助诊断。
[0015]进一步，专利技术人将miR-548q与临床参数进行相关性分析，包括血红蛋白 (Hemoglobin, Hb), 血小板 (Thrombocytes, PLT)、白蛋白(Albumin, ALB)、乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase, LDH)、血肌酐(Creatinine, Cr)、尿酸、血β2-微球 (β2-microglobulin, β2-MG)、C反应蛋白 (C-reactive protein, CRP)、免疫球蛋白IgG (Immune globulin, IgG)、免疫球蛋白 (IgG+ IgA+ IgM) 和尿轻链（κ+λ）。MM 患者, miR-548q与ALB正相关 (r = 0.492 P = 0.009)，与尿轻链（κ+λ）负相关 (r =
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0.469 P = 0.016)，与HB、PLT、LDH、Cr、β2-MG、IgG、CRP、免疫球蛋白 (IgG+ IgA+ IgM) 不相关 (P > 0.05)。
[0016]本专利技术发挥尿液标本获取无创、可大规模重复取样、保存方便的优势，利用尿液标本检测白蛋白及其多肽片段。
[0017]为让本专利技术的上述和其它目的、特征和优点能更明显易懂，下文特举较佳实施例，并配合附图，作详细说明如下。
附图说明
[0018]图1是Agilent芯片技术分析MM患者尿液差异miRNA表达谱。
[0019]图2是qRT-PCR分析miR-548q在正常对照组、MM初诊组、复发组、缓解组患者尿液样本之间的差异表达。
[0020]图3是ROC曲线分析miR-548q在MM中的诊断价值。
[0021]图4是 MM患者尿液中miR-548q与血清ALB的相关性分析。
[0022]图5是MM患者尿液中miR-548q与尿轻链（κ+λ）的相关性分析。
具体实施方式
[0023]实施例1 尿液标本的收集与处理收集2017-2019年首都医科大学附属北京世纪坛医院住院的多发性骨髓瘤MM）病例，其诊断分别符合美国国立综合癌症网络（NCCN）标准。正常对照组（HC）为健康体检者。尿液收集后，400
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g离心5min，取上清，RNase-free管分装，-80℃冻存。研究对象的临床特征见表1
(A)聚合酶(NEB, M0276L)，将poly (A) tail添加到RNA的3 '端。加入引物和逆转录酶(Vazyme R223-01)，用1μg总RNA合成循环DNA合成第一链，SnRNA U6做内参本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.尿液miR-548q在制备用于多发性骨髓瘤相关检测制剂中的应用。2. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述尿液miR-548q的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述尿液miR-548q在多发性骨髓瘤患者中低表达。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述制剂为多发性骨髓瘤患者尿液miR-548q检测试剂盒。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述试剂盒包括反转录系统、扩增系统和定量内参标...

【专利技术属性】
技术研发人员：张曼，李佳，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京世纪坛医院，
类型：发明
国别省市：