一种SARS-CoV-2的可视化LAMP同步检测试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术公开了一种用于新型冠状病毒检测的可视化逆转录环介导等温扩增试剂盒及其使用方法。所述试剂盒，由新型冠状病毒核衣壳(N)基因环介导等温扩增引物组构成，试剂盒成分主要由新冠病毒N基因环介导等温扩增引物组溶液、环介导等温扩增反应混合液、钙黄绿素

【技术实现步骤摘要】
一种SARS
‑
CoV
‑
2的可视化LAMP同步检测试剂盒及检测方法


[0001]本专利技术属于分子检测
，具体涉及一种SARS
‑
CoV
‑
2的可视化LAMP同步检测试剂盒及检测方法。

技术介绍

[0002]新冠病毒，又称为新型冠状病毒，国际病毒分类委员会已将其命名为“SARS
‑
CoV
‑
2”。新型冠状病毒肺炎临床表现以发热、乏力、干咳为主要表现，鼻塞、流涕等上呼吸道症状少见。约半数患者多在一周后出现呼吸困难，严重者快速进展为急性呼吸窘迫综合征、脓毒征休克、难以纠正的代谢性酸中毒和出凝血功能障碍。
[0003]按照最新指南规定，利用荧光RT
‑
PCR检测新型冠状病毒核酸阳性仍然是确诊的金标准。但需要较昂贵的仪器和专业的技术人员，检测时间长，试验成本也偏高。
[0004]环介导等温扩增(LAMP)检测技术的特点是针对靶基因的6个区域设计4种特异引物，在Bst DNA聚合酶的作用下，恒温条件下进行核酸扩增，具有操作简单、特异性强特点。另外通过环引物的添加，大大加快了反应的速度。LAMP检测技术最大的优势在于不依赖于昂贵的专业检测设备，该方法简便易操作，实验流程简单快速，不具备专业技能的一般人员就能在疾病现场进行快速诊断。

技术实现思路

[0005]本专利技术所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种SARS
‑
CoV
‑
2的可视化LAMP同步检测试剂盒及检测方法。该试剂盒定性准确、重复性好、灵敏度高、快速、简单，具有较低的应用成本。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是：一种SARS
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CoV
‑
2的可视化LAMP同步检测试剂盒，包括：SARS
‑
CoV
‑2‑
N
‑
F3引物、SARS
‑
CoV
‑2‑
N
‑
B3引物、SARS
‑
CoV
‑2‑
N
‑
FIP引物、SARS
‑
CoV
‑2‑
N
‑
BIP引物、1
×
Lamp PCR Master Mix、Bst 3.0DNA聚合酶、钙黄绿素
‑
Mn
2+
染料和ddH2O；
[0007]所述检测新冠病毒SARS
‑
CoV
‑
2的N基因的RT
‑
LAMP引物组包括2条外引物SARS
‑
CoV
‑2‑
N
‑
F3/SARS
‑
CoV
‑2‑
N
‑
B3和2条内引物SARS
‑
CoV
‑2‑
N
‑
FIP/SARS
‑
CoV
‑2‑
N
‑
BIP；所述SARS
‑
CoV
‑2‑
N
‑
F3的核苷酸序列为SEQ ID No.1，SARS
‑
CoV
‑2‑
N
‑
B3的核苷酸序列为SEQ ID No.2，SARS
‑
CoV
‑2‑
N
‑
FIP的核苷酸序列为SEQ ID No.3，SARS
‑
CoV
‑2‑
N
‑
BIP的核苷酸序列为SEQ ID No.4。
[0008]优选的，在检测新冠病毒SARS
‑
CoV
‑
2的N基因的RT
‑
LAMP引物组中，SARS
‑
CoV
‑2‑
N
‑
F3、SARS
‑
CoV
‑2‑
N
‑
B3、SARS
‑
CoV
‑2‑
N
‑
FIP、SARS
‑
CoV
‑2‑
N
‑
BIP的摩尔比为1:1:4:4。
[0009]优选的，还包括2
×
Lamp PCR Master Mix和钙黄绿素
‑
Mn
2+
染料试剂。
[0010]本专利技术提供的基于RT
‑
LAMP技术检测新冠病毒用引物组，包括检测新冠病毒SARS
‑
CoV
‑
2的N基因的RT LAMP引物组。本专利技术以N基因作为检测新冠病毒的靶标片段来设计RT
‑
LAMP检测引物，经过优化筛选，得到的最优引物组在检测新冠病毒时具有特异性强的特点；
另外，与现有行业检测金标准
‑
荧光定量PCR检测方法相比，能够达到相似的检测灵敏度，检测灵敏度达到40拷贝/20μL，而检测时间缩短至40min，比荧光定量PCR检测方法(耗时90min)缩短了50min，实现快速高效准确检测。
附图说明
[0011]图1是本专利技术实施例1的SARS
‑
CoV
‑
2的RT
‑
LAMP反应检测体系扩增结果。
[0012]图2是本专利技术实施例2的一种SARS
‑
CoV
‑
2的可视化LAMP同步检测体系的实验结果。
具体实施方式
[0013]本实施例的一种SARS
‑
CoV
‑
2的可视化LAMP同步检测试剂盒，包括：SARS
‑
CoV
‑2‑
N
‑
F3引物、SARS
‑
CoV
‑2‑
N
‑
B3引物、SARS
‑
CoV
‑2‑
N
‑
FIP引物、SARS
‑
CoV
‑2‑
N
‑
BIP引物、1
×
Lamp PCR Master Mix、Bst 3.0DNA聚合酶、钙黄绿素
‑
Mn
2+
染料和ddH2O；
[0014]所述检测新冠病毒SARS
‑
CoV
‑
2的N基因的RT
‑
LAMP引物组包括2条外引物SARS
‑
CoV
‑2‑
N
‑
F3/SARS
‑
CoV
‑2‑
N
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测新型冠状病毒(简称新冠病毒)的环介导等温扩增引物组，由新冠病毒核衣壳(N)基因环介导等温扩增引物组构成，其特征在于，可用于新冠病毒检测的环介导等温扩增反应；所述新冠病毒N基因环介导等温扩增引物组，其特征在于，由一对外引物(SARS
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CoV
‑2‑
N
‑
F3、SARS
‑
CoV
‑2‑
N
‑
B3)、一对内引物(SARS
‑
CoV
‑2‑
N
‑
FIP、SARS
‑
CoV
‑2‑
N
‑
BIP)组成，其引物序列为：所述SARS
‑
CoV
‑2‑
N
‑
F3引物具有序列表SEQ.ID.No.1的核苷酸序列；所述SARS
‑
CoV
‑2‑
N
‑
B3引物具有序列表SEQ.ID.No.2的核苷酸序列；所述SARS
‑
CoV
‑2‑
N
‑
FIP引物具有序列表SEQ.ID.No.3的核苷酸序列；所述SARS
‑
CoV
‑2‑
N
‑
BIP引物具有序列表SEQ.ID.No.4的核苷酸序列。2.一种如权利要求1所述的新冠病毒N基因环介导等温扩增引物组，用于新冠病毒检测试剂盒，主要由新冠病毒N基因环介导等温扩增引物组溶液、环介导等温扩增反应混合液、Bst 3.0DNA聚合酶、钙黄绿素
‑
Mn
2+
染料混合液、新冠病毒N基因阳性质控品构成，其特征在于，可以采用可视化逆转录环介导等温扩增检测方法，进行新...

【专利技术属性】
技术研发人员：靳亮，马广强，关丽梅，黄旭春，占智高，况文东，王金昌，陈俊晖，周溪，徐新平，
申请(专利权)人：江西中医药大学南昌大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：