本发明专利技术提供了2019新型冠状病毒N基因检测的引物组、恒温荧光检测试剂盒及方法。引物组包括两组LAMP引物组合，可分开使用也可合在一起使用。本发明专利技术提供的2019新型冠状病毒N基因检测的恒温荧光检测试剂盒，采用N蛋白基因的双重恒温荧光扩增内外环引物组进行检测，大大提高了检测灵敏度，有效避免了漏检。有效避免了漏检。
【技术实现步骤摘要】
2019新型冠状病毒N基因检测的引物组、恒温荧光检测试剂盒及方法
[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及2019新型冠状病毒N基因检测的引物组、恒温荧光检测试剂盒及方法。
技术介绍
[0002]2019新型冠状病毒属于RNA病毒，存在很不稳定，容易变异的特点。目前新型冠状病毒核酸检测试剂盒存在有反转录效率低下；扩增的循环数不够；灵敏度低，检测结果不稳定等问题。经常要做三四次核酸检测，甚至是四五次，才知道是阳性还是阴性。即便如此，可能还有很多检测出来是阴性，但已经出现白肺，或者有些核酸检测阳转阴，但其实是假阴性的检测结果。这都是由于靶基因的选择及其设计引物存在较大难度，造成的试剂灵敏度及特异性差，检测结果不稳定等问题。
技术实现思路
[0003]为了解决上述现有技术问题，本专利技术提供一组2019新型冠状病毒N基因检测的引物组。本专利技术的另一个目的是提供一种2019新型冠状病毒N基因检测的恒温荧光检测试剂盒及方法。
[0004]为实现上述目的，本专利技术采用以下的技术方案为：
[0005]一组2019新型冠状病毒N基因检测的引物组，其包括1#外引物F3、1#外引物B3、1#内引物FIP、1#内引物BIP、1#环引物LF和1#环引物LB，其中，1#所述外引物F3的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述1#外引物B3的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述1#内引物FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述1#内引物BIP的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；所述1#环引物LF的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；所述1#环引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。
[0006]一组2019新型冠状病毒N基因检测的引物组，其包括2#外引物F3、2#外引物B3、2#内引物FIP、2#内引物BIP、2#环引物LF和2#环引物LB，其中，2#所述外引物F3的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；所述2#外引物B3的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；所述2#内引物FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；所述2#内引物BIP的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示；所述2#环引物LF的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示；所述2#环引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示。
[0007]一组2019新型冠状病毒N基因检测的引物组，其包括1#外引物F3、1#外引物B3、1#内引物FIP、1#内引物BIP、1#环引物LF、1#环引物LB、2#外引物F3、2#外引物B3、2#内引物FIP、2#内引物BIP、2#环引物LF和2#环引物LB，其中，1#所述外引物F3的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述1#外引物B3的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述1#内引物FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述1#内引物BIP的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；所述1#环引物LF的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；所述1#环引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所
示；其包括2#外引物F3、2#外引物B3、2#内引物FIP、2#内引物BIP、2#环引物LF和2#环引物LB，其中，2#所述外引物F3的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；所述2#外引物B3的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；所述2#内引物FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；所述2#内引物BIP的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示；所述2#环引物LF的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示；所述2#环引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示。
[0008]如上所述的引物组在制备用于检测2019新型冠状病毒N基因的试剂盒中的应用。
[0009]一种2019新型冠状病毒N基因检测的恒温荧光检测试剂盒，该试剂盒包括：如上所述的引物组。
[0010]如上所述的恒温荧光筛查试剂盒，该试剂盒还包括链置换Bst DNA聚合酶、逆转录酶、dNTPs、SYTO-9、Tris-HCl、betaine、KCl和MgCl2。
[0011]如上所述的恒温荧光筛查试剂盒，该试剂盒还包括阳性对照和阴性对照，所述阳性对照为N基因体外转录RNA序列的质粒作为阳性对照，所述阴性对照为去核酸的灭菌水。
[0012]一种对2019新型冠状病毒N基因检测的方法，该方法是非诊断目的的检测方法，具体包括以下步骤：
[0013](1)从样品中提取RNA；
[0014](2)对步骤(1)提取的所述RNA进行等温扩增；其中，在反应体系中，采用如上所述2019新型冠状病毒N基因检测的引物组；
[0015](3)荧光定量PCR仪设定：63℃，15s；63℃，45s，采集信号，共45个循环；
[0016](4)结果判定：若有“S”型扩增曲线，则判断为阳性(有核酸扩增)，若无“S”型扩增曲线，则判断为阴性(无核酸扩增)。
[0017]如上所述的恒温显色方法，优选地，在步骤(2)中，所述等温扩增的反应体系，具体如下：反应总体积为25μL，其中，所述反应体系中含有N-1:反应液：8
×
105U/L Rnasin，200mM dNTPs，10mM Tris-HCl，20mM KCl，3.5mM MgCl2，0.8M betaine，3.2Μm的各内引物，0.4μM各外引物，1.6μM各环引物，SYTO-9总共22μL，Bst聚合酶0.8μL，AMV酶0.2μL，样品RNA模板2.0μL。
[0018]如上所述的恒温显色方法，优选地，同时设置无核酸酶水为阴性对照；采用含N基因体外转录RNA的序列的质粒作为阳性对照进行检测。
[0019]本专利技术的有益效果在于：
[0020]本专利技术提供的2019新型冠状病毒N基因检测的引物组，用于等温扩增进行检测新型冠状病毒N基因的核酸。引物组包括两组LAMP引物组合，可分开使用也可合在一起使用。本专利技术提供的2019新型冠状病毒N基因检测的恒温荧光检测试剂盒，采用N蛋白基因的双重恒温荧光扩增内外环引物组进行检测，大大提高了检测灵敏度，有效避免了漏检。本专利技术提供了特性、灵敏的新型冠状病毒N基因恒温显色扩增筛查检测新方法，采用双LAMP引物组的扩增组合，有效避免了漏检，大大提高了检测的灵敏度，且特异性强，与其它菌不发生交叉，在35-45min即可完成对新型冠状病毒N基因的快速筛查检测，性能指标优于国内外同类方法水平。
[0021]本专利技术提供的新型冠状病毒N基因双重恒温荧光筛查检测试剂盒，具有技术成熟稳定、测试成本低，更适合于基层推广的优势，更适合于社区化验室、企业化验室、县区卫生所等基层实验室的快速筛查检测，成果具有很好的市场竞争力，有良好的产业化前景。
附图说明
[0022]图1为引物对筛选结果；图中，NC为阴性对照，PC为阳性对照。
[0023]图2为2组引物对组合后的检测结果；图中，NC为阴性对照，PC为阳性对照。<本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一组2019新型冠状病毒N基因检测的引物组，其特征在于，其包括1#外引物F3、1#外引物B3、1#内引物FIP、1#内引物BIP、1#环引物LF和1#环引物LB，其中，1#所述外引物F3的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述1#外引物B3的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述1#内引物FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述1#内引物BIP的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；所述1#环引物LF的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；所述1#环引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。2.一组2019新型冠状病毒N基因检测的引物组，其特征在于，其包括1#外引物F3、1#外引物B3、1#内引物FIP、1#内引物BIP、1#环引物LF和1#环引物LB，其中，1#所述外引物F3的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述1#外引物B3的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述1#内引物FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述1#内引物BIP的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；所述1#环引物LF的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；所述1#环引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。3.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，其还包括权利要求2所述的引物组。4.根据权利要求1-3中任一项所述的引物组在制备用于检测2019新型冠状病毒N基因的试剂盒中的应用。5.一种2019新型冠状病毒N基因检测的恒温荧光检测试剂盒，该试剂盒包括：如权利要求1-3中任一项所述的引物组。6.根据权利要求5所述的恒温荧光检测试剂盒，其特征...
【专利技术属性】
技术研发人员：曹际娟，郑文杰，郑秋月，季超，薛淑霞，孙金生，张芹，闫春财，刘文彬，
申请(专利权)人：大连民族大学，
类型：发明
国别省市：
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