用于检测SARS-CoV-2冠状病毒的试剂盒及其专用引物和探针制造技术

本发明专利技术公开一种用于检测SARS-CoV-2冠状病毒的试剂盒及其专用引物和探针，属于生物技术领域。提供的试剂盒及其专用引物和探针可用于快速检测SARS-COV-2冠状病毒，实现待测样品的快速定性和定量检测，可以在SARS-COV-2冠状病毒的检测以及疫苗生产过程中发挥重要作用。病毒的检测以及疫苗生产过程中发挥重要作用。病毒的检测以及疫苗生产过程中发挥重要作用。

【技术实现步骤摘要】
用于检测SARS-CoV-2冠状病毒的试剂盒及其专用引物和探针


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种用于检测SARS-CoV-2冠状病毒的试剂盒及其 专用引物和探针。

技术介绍

[0002]研究表明SARS-COV-2与2003年“非典”SARS冠状病毒(SARS-CoV)和“中东呼吸综合 征”MERS冠状病毒(MERS-CoV)一样，同属于β属冠状病毒。通过基因序列比对， SARS-COV-2与SARS-CoV有约80％相似性，与MERS-CoV有40％的相似性。
[0003]SARS-COV-2冠状病毒目前在全球多个国家的感染人群已经超过了数十万人，并且还处 于爆发的趋势，虽然各个国家都在积极控制，但由于其传染性强，对人类健康仍然是一个重 大的潜在威胁，因此建立一种快速、准确、特异性检测该病毒的方法和工具，对疫情的传播 控制具有重大意义。

技术实现思路

[0004]针对现有技术中存在的问题的一个或多个，本专利技术一个方面提供一种用于对 SARS-COV-2冠状病毒进行实时荧光定量PCR检测的引物和探针，其中所述引物包括上游引 物SA-F1和下游引物SA-R1，其中所述SA-F1的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述SA-R1 的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；所述探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。
[0005]上述探针的5
’
端标记有荧光报告基团，3
’
端标记有荧光淬灭基团。
[0006]上述荧光报告基团为选自FAM、ROX、CY5、HEX中的任一种，所述荧光淬灭基团为 选自TAMRA、BHQ、Eclipse中的任一种。
[0007]本专利技术另一方面提供一种用于对SARS-COV-2冠状病毒进行实时荧光定量PCR检测的 试剂盒，其包括上述的引物和探针；使用该试剂盒时的20μL实时荧光定量PCR检测体系中 所述引物和探针的用量为：每条引物的最终使用浓度各为0.1～1.0μM，探针的最终使用浓度 为0.1～0.5μM。
[0008]上述试剂盒中还包括阳性对照品和阴性对照品，阳性对照品为SARS-COV-2冠状病毒阳 性质控品，阴性对照品为不含SARS-COV-2冠状病毒的反应体系。
[0009]上述的试剂盒在对SARS-COV-2冠状病毒进行非疾病诊断目的的检测中的应用也属于本 专利技术的内容。
[0010]上述的应用为一种用实时荧光定量PCR技术对SARS-COV-2冠状病毒进行非疾病诊断 目的的定性和定量检测方法，包括以下步骤：
[0011]1)建立标准曲线：将SARS-COV-2冠状病毒阳性质控品按照10倍梯度稀释至1
×
10
7 copies/μL、1
×
106copies/μL、1
×
105copies/μL、1
×
104copies/μL、1
×
103copies/μL、1
×
102copies/μL、 1
×
101copies/μL作为标准品；以不同浓度的标准品作为模板，在上述的引物和探针的引导下进 行实时荧光定量PCR检测，检测结束后，以各标准品的浓度Log值(X轴)对其相应Ct值 (Y轴)作图，绘制标准曲线；
[0012]2)提取待测样品的基因组RNA，以提取的基因组RNA为模板，在上述的引物和探针的 引导下进行实时荧光定量PCR检测，同步进行检测阳性对照品和阴性对照品；
[0013]3)用得到的Ct值和荧光信号的变化实现对SARS-COV-2冠状病毒的定性检测，再根据 Ct值和步骤1)中的标准曲线，得出待测样品中所含SARS-COV-2冠状病毒的拷贝数，实现 定量检测。
[0014]上述步骤2)中的待测样品包括用于疫苗生产的原料、疫苗半成品及成品。
[0015]上述步骤1)和步骤2)中的20μL实时荧光定量PCR检测体系包括：模板2μL、实时荧 光定量一步法PCR反应液2
×
One Step RT-PCR Buffer III 10μL、PrimeScript RT Enzyme Mix
ꢀⅡ
0.4μL、5U/μL TaKaRa Ex Taq HS 0.4μL、上游引物0.4μL、下游引物0.4μL、探针0.8μL、 RNase Free ddH2O 5.6μL。
[0016]上述步骤1)和步骤2)中的实时荧光定量PCR检测条件为：反转录反应程序：42℃5min； 95℃10sec；1个循环；PCR反应程序：95℃5sec；60℃20sec；40个循环。
[0017]上述步骤3)中的判定方法为：
[0018]若阳性对照品在荧光报告基团(例如FAM荧光报告基团)所对应的通道有S型扩增曲 线，而阴性对照品在荧光报告基团所对应的通道无扩增曲线，则判断实验成立；否则实验结 果无效；
[0019]当实验成立时进行以下判断：
[0020]若待测样品在荧光报告基团所对应的通道有S型扩增曲线，且Ct值≤38，则判定待测样 品含有SARS-COV-2冠状病毒；
[0021]若待测样品在荧光报告基团所对应的通道有S型扩增曲线，且Ct值>38，则判定待测样 品为未确定样品，需重新提取RNA后进行检测；如果复检结果相同，则判定为弱阳性样品；
[0022]若待测样品在荧光报告基团所对应的通道无明显S型扩增曲线，则判定为阴性样品，即 不含有SARS-COV-2冠状病毒。
[0023]基于以上技术方案提供的用于对SARS-COV-2冠状病毒进行实时荧光定量PCR检测的 引物和探针可用于快速检测SARS-COV-2冠状病毒，实现待测样品的快速定性和定量检测， 可以在SARS-COV-2冠状病毒疫苗生产过程中的质量监控和合理化配苗提供有利依据，确保 疫苗接种的安全性和合理性。本专利技术提供的试剂盒和检测方法操作简便，检测灵敏度高，可 以实现对SARS-COV-2冠状病毒的准确定性和定量检测，将在SARS-COV-2冠状病毒的检测 (包括临床诊断中的临床病料或培养物中的SARS-COV-2冠状病毒的准确检测)以及疫苗生 产过程中发挥重要作用，应用前景广阔。
附图说明
[0024]图1为实施例1中组1和组2的引物和探针对梯度浓度的SARS-COV-2冠状病毒阳性质 控品的PCR扩增曲线；
[0025]图2为实施例1中组1的引物和探针对梯度浓度的SARS-COV-2冠状病毒标准品的PCR 扩增曲线；
[0026]图3为根据图2的PCR扩增曲线的Log
Copy-Ct标准曲线。
具体实施方式
[0027]本专利技术旨在提供一种用于检测新型冠状病毒SARS-COV-2的专用引物和探针，并根据该 引物和探针提供一种用于检测该SARS-COV-2冠状病毒的试剂盒，同时建立一种基于荧光定 量聚合酶扩增技术的快速检本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于对SARS-COV-2冠状病毒进行实时荧光定量PCR检测的引物和探针，其特征在于，所述引物包括上游引物SA-F1和下游引物SA-R1，其中所述SA-F1的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述SA-R1的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；所述探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。2.根据权利要求1所述的引物和探针，其特征在于，所述探针的5
’
端标记有荧光报告基团，3
’
端标记有荧光淬灭基团。3.根据权利要求2所述的引物和探针，其特征在于，所述荧光报告基团为选自FAM、ROX、CY5、HEX中的任一种，所述荧光淬灭基团为选自TAMRA、BHQ、Eclipse中的任一种。4.用于对SARS-COV-2冠状病毒进行实时荧光定量PCR检测的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-3中任一项所述的引物和探针；使用所述试剂盒时的20μL实时荧光定量PCR检测体系中所述引物和探针的用量为：每条引物的最终使用浓度各为0.1～1.0μM，探针的最终使用浓度为0.1～0.5μM。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括阳性对照品和阴性对照品，阳性对照品为SARS-COV-2冠状病毒阳性质控品，阴性对照品为不含SARS-COV-2冠状病毒的反应体系。6.权利要求4或5所述的试剂盒在对SARS-COV-2冠状病毒进行非疾病诊断目的的检测中的应用。7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：为一种用实时荧光定量PCR技术对SARS-COV-2冠状病毒进行非疾病诊断目的的定性和定量检测方法，包括以下步骤：1)建立标准曲线：将SARS-COV-2冠状病毒阳性质控品按照10倍梯度稀释至1
×
107copies/μL、1
×
106copies/μL、1
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105copies/μL、1
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104copies/μL、1
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103copies/μL、1
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102copies/μL、1
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101copies/μL作为标准品；以不同浓度的标准品作为模板，在权利要求1-...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡晨，王文超，孙永，俞俊岭，何军，刘青松，任涛，陈程，王黎，陈先涛，
申请(专利权)人：安徽省疾病预防控制中心合肥中科普瑞昇生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：