腐食酪螨过敏原Tyrp12编码基因、重组蛋白及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种腐食酪螨过敏原Tyr p 12编码基因、重组蛋白及其应用。本发明专利技术在对腐食酪螨基因组进行功能基因注释时发现一段基因与热带无爪螨第12组分Blo t 12具有同源性，因此本发明专利技术用RT

【技术实现步骤摘要】
腐食酪螨过敏原Tyr p 12编码基因、重组蛋白及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，尤其涉及一种腐食酪螨过敏原Tyrp 12编码基因、重组蛋白及其应用。

技术介绍

[0002]尘螨是引起过敏性疾病最重要的过敏原来源生物之一，其广泛分布在室内床垫、沙发、枕头、地毯、凉席等处，常见种类有粉尘螨、屋尘螨、热带无爪螨、腐食酪螨等。作为一种生物体，尘螨提取物中含有多种过敏原成分，按照发现顺序先后被命名为第1组分、第2组分
……
，现已发现近40组分。按照国际过敏原命名规则，过敏原的命名是以其来源物质，属名的头三个字母(如Dermatophagoides，头三个字母为Der)，空格，种名第一个字母(如pteronyssinus的首字母)，空格，最后用阿拉伯数字表示该过敏原发现的顺序或其临床意义，如屋尘螨过敏原第1组分就命名为Derp 1。
[0003]单种尘螨的提取物为多种过敏原组分的混合物，但患者病因可能只与其中的某种或某些组分有关。而且，尘螨提取物质量欠佳，如主要组分含量不足、含有的组分种类及含量不稳定、含有非过敏原性物质、某种或某些组分的免疫原性偏低。因此，尘螨提取物用于临床诊疗引发了许多严重的、甚至危及生命的副作用，以致需要针对其副作用再进行繁琐的后续治疗。因此，需要检验试剂明确引起过敏性疾病的单组分过敏原。
[0004]根据WHO/IUIS过敏原命名委员会(http://www.allergen.org/)，已经报道的粉尘螨过敏原组分有Der f 1
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8、Der f 10
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11、Der f 13
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18、Der f20
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39，屋尘螨过敏原组分有Derp 1
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11、Derp 13
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15、Derp 18、Derp 20
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21、Derp 23
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26、Derp 28
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33、Derp 36、Derp 37
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38，腐食酪螨过敏原组分有Tyrp 1
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3、7
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8、10、13、20、28、34
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36，热带无爪螨过敏原组分有Blo t 1
‑
8、Blo t 10
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13、Blo t 19、Blo t 21。随着高通量测序技术的迅猛发展，多个螨种的线粒体核基因组和全基因组测序完成，为发现新过敏原组分提供了手段。尽管粉尘螨和屋尘螨全基因学数据已经公示，但是没有发现第12组分编码基因。目前，国际过敏原命名委员会官网(www.allergen.org)中只公布了热带无爪螨过敏原第12组分编码基因。

技术实现思路

[0005]本专利技术的首要目的在于提供一种腐食酪螨过敏原Tyrp 12编码基因。
[0006]本专利技术的再一目的在于提供一种编码腐食酪螨过敏原Tyrp 12重组蛋白的人工合成基因。
[0007]本专利技术的再一目的在于提供上述人工合成基因在制备腐食酪螨过敏原Tyr p 12重组蛋白中的应用。
[0008]本专利技术的另一目的在于提供一种腐食酪螨过敏原Tyrp 12重组蛋白。
[0009]本专利技术是这样实现的，一种腐食酪螨过敏原Tyrp 12编码基因，该编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No：1所示。
[0010]本专利技术进一步公开了一种编码腐食酪螨过敏原Tyrp 12重组蛋白的人工合成基
因，该基因包含权利要求1所述的腐食酪螨过敏原Tyrp 12编码基因。
[0011]优选地，该人工合成基因的核苷酸序列如SEQ ID No：2所示。
[0012]本专利技术进一步公开了上述人工合成基因在制备腐食酪螨过敏原Tyrp 12重组蛋白中的应用。
[0013]优选地，将所述人工合成基因的核苷酸序列克隆至原核表达载体。
[0014]本专利技术进一步公开了一种腐食酪螨过敏原Tyrp 12重组蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID No：3所示。
[0015]本专利技术进一步公开了上述重组蛋白在制备精准医学检验过敏性疾病患者检验试剂中的应用。
[0016]本专利技术克服现有技术的不足，提供一种腐食酪螨过敏原Tyrp 12编码基因、重组蛋白及其应用。腐食酪螨(Tyrophagusputrescentiae)是一种仓储螨类，也常见于室内尘埃中，是一种重要的吸入性过敏原，会引起过敏性哮喘和/或鼻炎。美国国家生物信息中心(National Center forBiotechnology Information，NCBI)已经公布了腐食酪螨全基因组测序(BioProjects:PRJNA598686，Whole Genome Shotgun:INSDC:JAAALH000000000.1)，本专利技术在对该基因组进行功能基因注释时发现一段基因与热带无爪螨第12组分Blo t 12具有同源性，根据此序列，本专利技术用RT
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PCR从腐食酪螨Total RNA中扩增出这段编码，测序验证确定为Tyr p 12的编码基因，将该基因依次经过密码子优化、人工合成基因片段、克隆至pET28a(+)载体中、转化大肠杆菌、IPTG诱导表达、镍亲和柱层析纯化后，最终获得重组蛋白，将该重组蛋白应用于临床检测腐食酪螨阳性血清，其阳性率为27.27％(3/11)。
[0017]相比于现有技术的缺点和不足，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术首次获得Tyrp 12的编码基因，并以此制备获得的重组蛋白用于制备精准医学检验过敏性疾病患者检验试剂中的应用。
附图说明
[0018]图1是腐食酪螨Total RNA电泳图；其中，泳道M为DL 2,000DNA Marker，泳道1为腐食酪螨Total RNA；
[0019]图2是Tyr p 12PCR产物琼脂糖凝胶；其中，泳道M为DL 2,000DNA Marker，泳道1为Tyrp 12基因PCR产物(+)，泳道2为Tyrp 12基因PCR产物(
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)；
[0020]图3是pET28a质粒酶切产物琼脂糖凝胶电泳结果，其中，泳道M为λ
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HindⅢdigest，泳道1为pET28a质粒，泳道2为pET28a
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Nde I/EcoR I；
[0021]图4是SDS
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PAGE鉴定pET
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28a(+)
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Tyrp 12全长基因表达结果；其中，泳道M为Protein MW marker(Broad，泳道1为pET28a载体全蛋白，泳道2为pET28a载体上清，泳道3为pET28a载体沉淀，泳道4为Tyrp 12全蛋白，泳道5为Tyrp 12上清，泳道6为Tyrp 12沉淀；
[0022]图5是TyrP12 SDS
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PAGE结果；其中，泳道M为Protein MW marker(Broad)，泳道1为p本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种腐食酪螨过敏原Tyrp 12编码基因，其特征在于，该编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No：1所示。2.一种编码腐食酪螨过敏原Tyrp 12重组蛋白的人工合成基因，其特征在于，该人工合成基因包含权利要求1所述的腐食酪螨过敏原Tyrp 12编码基因。3.如权利要求2所述的人工合成基因，该人工合成基因的核苷酸序列如SEQ ID No：2所示。4....

【专利技术属性】
技术研发人员：周鹰，崔玉宝，
申请(专利权)人：无锡市儿童医院，
类型：发明
国别省市：