HEG1基因突变体及其应用制造技术

本发明专利技术属于基因工程技术领域，涉及HEG1基因突变体及其应用。具体涉及分离的编码HEG1突变体核酸、分离的多肽、筛选易感扩张型心肌病的生物样品的方法以及用于筛选易感扩张型心肌病的生物样品的试剂盒。其中，该分离的编码HEG1突变体核酸，与SEQID NO：1相比，所述核酸具有选自c.78_80delGCC和c.2286_2303dupCTCTTCCTCCTCCTCCTC的至少一种突变。通过检测该突变体在生物样品中是否同时存在，可以有效地检测生物样品是否易患扩张型心肌病。病。

【技术实现步骤摘要】
HEG1基因突变体及其应用

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[0001]本专利技术属于基因工程
，涉及HEG1基因突变体及其应用。具体涉及分离的编码HEG1突变体的核酸、分离的多肽、筛选易感扩张型心肌病的生物样品的方法以及用于筛选易感扩张型心肌病的生物样品的试剂盒。

技术介绍
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[0002]扩张型心肌病(Dilated cardiomyopathy，DCM)是一种以心腔(左心室和/或右心室)扩张、心肌收缩功能受损为主要特征的原因不明的心肌疾病。目前，DCM已成为心力衰竭的最常见原因之一，并且是全世界心脏移植的最常见适应症。据报道，在18岁以下人群中,心肌病的发病率约为1.1/100,000
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1.5/100,000。其中儿童DCM发病率约为0.58/100,000，在各类型心肌病中约占66％，约70％
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90％的患儿在确诊时以心力衰竭为主要表现，且DCM患儿的5年生存率仅为40％，是导致青少年和儿童致死的主要原因之一。因此，加强临床对早期DCM的认知与管理势在必行。心肌病尚无特定病因治疗,治疗上仍以减轻患者症状和防治并发症为主。
[0003]目前基因突变诱导DCM的机制尚未完全明确,仍缺乏从分子、细胞到临床表型的精确致病机制,探索针对基因水平的治疗手段有望成为未来解决DCM的关键。在大型队列中的关联分析和全基因组关联研究(GWAS)已经成功筛选出疾病相关的基因及遗传变异。到目前为止，已经在近60个基因中鉴定了400多种致病变异，其中大多为编码心肌细胞骨架和功能以及其与肌节和细胞核的连接中起作用的蛋白质。已有报道显示接受基因筛查的DCM患者已有数千人,且有基因型
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表型关联的研究，研究基因多集中在TTN，LMNA，PLN，RBM20，MYBPC3，MYH7，TNNT2或TNNI3等。其中TTN截短突变是DCM的常见原因，发生在大约25％的特发性扩张型心肌病家族性病例和18％的散发病例中，突变携带者的临床表现与症状，发病率和死亡率与非携带者相似。LMNA突变大约能解释5
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10％不等的DCM病例，且与心脏猝死的高风险相关，约有一半的突变携带者可发生室性心律失常。然而，目前仅在不到三分之一的病例中可以发现遗传病因，且只有少量的突变可以在另外的家系或者无血缘关系的病人中重复检出。越来越多研究证实DCM的核心致病基因，但是整个的基因遗传图谱仍不够完善。
[0004]因此，有针对性的对DCM开展遗传学研究，明确致病基因及其致病机制，对DCM患者的遗传咨询和个体化防治具有潜在的临床意义，为DCM早期诊断和有效治疗提供研究方向和新的理论依据，也将在实践上为研发治疗DCM的特效药物提供新的分子靶点。

技术实现思路
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[0005]本专利技术的目的是为了克服现有技术存在的缺点，提供一种扩张型心肌病的致病基因的突变体。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术提出一种分离的编码HEG1突变体的核酸，与SEQ ID NO：1相比，该核酸具有选自c.78_80delGCC和c.2286_2303dupCTCTTCCTCCTCCTCCTC的至少一种突变。本专利技术确定了该HEG1突变体与扩张型心肌病的发病密切相关，从而通过检测该
新突变在生物样品中是否存在，能够有效地检测生物样品是否易感扩张型心肌病。
[0007]本专利技术还提供一种分离的编码HEG1突变体多肽，该多肽与SEQ ID NO：2相比，具有选自p.ala27del和p.Ser763_Ser768dup的至少一种突变。通过检测生物样品中是否表达该多肽，能够有效地检测生物样品是否易感扩张型心肌病。
[0008]本专利技术还提供一种筛选易感扩张型心肌病的生物样品的方法。该方法包括以下几个步骤：从所述生物样品提取核酸样本；确定所述核酸样本的核酸序列；所述核酸样本的核酸序列与SEQ ID NO：1相比，具有c.78_80delGCC和c.2286_2303dupCTCTTCCTCCTCCTCCTC复合杂合突变是所述生物样品易感扩张型心肌病的指示。通过根据本专利技术的筛选易感扩张型心肌病的生物样品的方法，能够有效地筛选易感扩张型心肌病的生物样品。
[0009]本专利技术还提供一种用于筛选扩张型心肌病的生物样品的试剂盒，该试剂盒含有：适于检测HEG1基因突变体的试剂，其中所述HEG1基因突变体与SEQ ID NO：1相比，具有c.78_80delGCC和c.2286_2303dupCTCTTCCTCCTCCTCCTC复合杂合突变。利用根据本专利技术的试剂盒，能够有效地筛选易感扩张型心肌病的生物样品。
[0010]本专利技术与现有技术相比，专利技术人首次确定了HEG1基因为扩张型心肌病的致病相关基因，并通过全基因组测序联合候选基因突变验证的方法确定了致病基因的两个突变位点，为扩张型心肌病的检测提供了新的方向。
附图说明：
[0011]图1为本专利技术涉及的实施例1的扩张型心肌病患者家系图谱示意图。
[0012]图2为本专利技术涉及的实施例1扩张型心肌病先证者及其父母HEG1基因c.78_80delGCC突变位点的Sanger测序验证峰图，其中A为先证者；B为先证者父亲；C为先证者母亲。
[0013]图3为本专利技术涉及的实施例1扩张型心肌病先证者及其父母HEG1基c.2286_2303dupCTCTTCCTCCTCCTCCTC突变位点的Sanger测序验证峰图，其中A为先证者；B为先证者母亲；C为先证者父亲。
[0014]图4为本专利技术涉及的实施例1的慢病毒敲低小鼠心肌细胞中HEG1的表达，HEG1及其扩张型心肌病标记分子Anp、Bnp在mRNA水平的表达。
具体实施方式：
[0015]下面通过具体实施例并结合附图对本专利技术作进一步说明。
[0016]实施例1：
[0017]本实施例涉及一种分离的编码HEG1基因突变体的核酸，与SEQ ID NO.1相比，该核酸具有选自c.78_80delGCC和c.2286_2303dupCTCTTCCTCCTCCTCCTC中的至少一种突变。所述编码HEG1基因突变体的核酸是指与编码HEG1基因突变体的基因相对应的核酸物质，即核酸的类型不受限制，可以是任何包含与HEG1基因突变体的编码基因相对应的脱氧核糖核苷酸和/或核糖核苷酸的聚合物，包括但不限于DNA、RNA或cDNA。
[0018]所述核酸，实际包括互补双链的任意一条，或者两条。为了方便，在本技术方案中，虽然只给出了一条链，但实际上也公开了与之互补的另一条链。例如，提及SEQ ID NO：1，实际包括其互补序列。本领域技术人员还可以理解，利用一条链可以检测另一条链，反之亦
然。
[0019]该编码HEG1突变体的核酸，是专利技术人通过全基因组测序联合突变验证的方法确定的扩张型心肌病的致病基因上的突变。虽然有关于扩张型心肌病的基因的报道，但本专利技术人首次证实了HEG1基因与扩张型心肌病有关的的突变位点，在现有技术中并未被提到。野生型的HEG1基因的cDNA序列如SEQ ID NO：1所示本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分离的核酸，其特征在于，与SEQ ID NO：1相比，所述核酸具有选自c.78_80delGCC和c.2286_2303dupCTCTTCCTCCTCCTCCTC的至少一种突变。2.一种分离的多肽，其特征在于，与SEQ ID NO：2相比，所述分离的多肽具有选自p.ala27del和p.Ser763_Ser768dup的至少一种突变；所述多肽是由权利要求1所述的核酸编码的。3.一种筛选易感扩张型心肌病的生物样品的方法，其特征在于，该方法包括以下几个步骤：从所述生物样品提取核酸样本；确定所述核酸样本的核酸序列；所述核酸样本的核酸序列与SEQ ID NO：1相比，具有c.78_80delGCC和c.2286_2303dupCTCTTCCTCCTCCTCCTC复合杂合突变是所述生物样品易感扩张型心肌病的指示，所述生物样品为选自人体血液、皮肤、皮下组织的至少一种。4.根据权利要求3所述的筛选易感扩张型心肌病的生物样品的方法，其特征在于，确定所述核酸样本的核酸序列进一步包括：针对所述核酸样本，构建核酸测序文库；以及对...

【专利技术属性】
技术研发人员：泮思林，周颖超，杜占慧，
申请(专利权)人：青岛市妇女儿童医院，
类型：发明
国别省市：