一种鸭源CCCH型锌指抗病毒蛋白及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种鸭源CCCH型锌指抗病毒蛋白及其应用，所述所述鸭源CCCH型锌指抗病毒蛋白基因的碱基序列如SEQ ID No.1所示。所述鸭源CCCH型锌指抗病毒蛋白基因的编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。本发明专利技术提供的表达鸭源CCCH型锌指抗病毒蛋白能显著促进鸭IFN

【技术实现步骤摘要】
一种鸭源CCCH型锌指抗病毒蛋白及其应用


[0001]本专利技术属于医学或兽医学
，具体涉及一种鸭源CCCH型锌指抗病毒蛋白(duck CCCH
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type zinc finger antiviral protein,duZAP)及其应用。

技术介绍

[0002]鸭在我国广泛被养殖，是重要的经济动物。鸭因天性喜水，不适合完全集约化笼养，多采用半散养模式，其特殊的养殖模式导致长期以来，存在着老病不断，新病层出等突出问题。因此，深入挖掘、利用与鸭天然免疫调控相关的抗病毒基因不仅有助于了解水禽天然免疫分子的调控机理，也可以为鸭抗病毒药物的研发和提高鸭存活率等方面提供理论依据和应用指导。
[0003]天然免疫系统是宿主抵抗病原感染的第一道防线，病毒感染机体后通过一系列级联反应诱导I型干扰素和其他先天性免疫基因的表达。不论体外还是体内，干扰素(interferon,IFN)通路都发挥着主要的抗病毒作用，是目前免疫学的研究热点。而与人源和鼠源等脊椎动物相比，禽类含有法氏囊等特有的免疫器官，免疫系统也具有显著的差异，尤其是鸭作为一种经济动物，相关研究相对比较滞后，目前有关鸭的天然免疫应答反应、信号转导过程和干扰素下游ISG的表达及具体调节机制尚不十分清楚。
[0004]本专利技术所述的duZAP也叫PARP
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13，属于poly(ADP
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ribose)polymerases (PARPs)超家族，含4个保守的CCCH锌指模体的蛋白家族，目前已经发现了至少 17个成员，它们参与细胞增殖、凋亡等细胞进程。近年的研究表明，PARP家族成员主要通过保守的4个CCCH锌指模体直接结合RNA或DNA病毒的基因组导致病毒降解从而达到抗病毒的作用。最新的研究显示，根据C端结构域的不同，人源ZAP鉴定出四个结构和功能不同的剪切变异体，但是关于鸭源ZAP的基因结构特征和细胞功能方面的信息知之甚少。

技术实现思路

[0005]本专利技术所要解决的技术问题是提供一种鸭源CCCH型锌指抗病毒蛋白及其应用。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术提供的技术方案是：
[0007]提供一种鸭源CCCH型锌指抗病毒蛋白(duck CCCH
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type zinc finger antiviralprotein,duZAP)基因，所述鸭源CCCH型锌指抗病毒蛋白基因的碱基序列如SEQID No.1所示。所述duZAP基因的N端具有4个重复的CCCH锌指模体结构，C 端包含1个WWE和PARP功能域。
[0008]本专利技术还包括上述鸭源CCCH型锌指抗病毒蛋白基因的编码蛋白，所述鸭源 CCCH型锌指抗病毒蛋白基因的编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。
[0009]本专利技术的又一个方面是一种带有上述鸭源CCCH型锌指抗病毒蛋白基因的真核表达载体。
[0010]本专利技术的又一个方面是上述鸭源CCCH型锌指抗病毒蛋白的应用，所述鸭源 CCCH型锌指抗病毒蛋白在制备鸭抗病毒感染药物或疫苗佐剂中的应用。
[0011]本专利技术的又一个方面是上述真核表达载体的应用，所述真核表达载体在制备鸭抗病毒感染药物或疫苗佐剂中的应用。
[0012]按上述方案，所述真核表达载体及鸭源CCCH型锌指抗病毒蛋白在鸭胚成纤维细胞(Duck embryo fibroblast cells,DEFs)中过表达，通过激活转录因子NF
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κB 和IRF1诱导促进鸭I型干扰素β(interferonβ，IFN
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β)分泌。
[0013]本专利技术扩增得到duZAP基因全长，并对其进行了生物信息学分析，明确了 duZAP的结构特征及同其它物种ZAP之间的进化关系。DuZAP的N端具有4个重复的CCCH锌指模体结构，C端包含1个WWE和PARP功能域。
[0014]本专利技术分析了duZAP的鸭组织分布、细胞定位及其结构域功能。并通过双链 RNA类似物poly(I:C)和鸭坦布苏病毒(Duck tembusu virus,DTMUV)来研究duZAP 在鸭源天然免疫信号通路中的作用。本专利技术证明了在鸭胚成纤维细胞(Duck embryofibroblast cells,DEFs)中，duZAP能通过激活转录因子NF
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κB和IRF1诱导促进鸭 I型干扰素β(interferonβ，IFN
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β)分泌。通过构建duZAP不同结构域的截短突变体的真核表达质粒发现，确定其C端的WWE和PARP结构域对激活干扰素信号通路是必需的。
[0015]本专利技术所述的鸭源CCCH型锌指抗病毒蛋白为申请人首次从鸭组织中扩增解析，相关序列信息已上传至美国国家生物信息中心NCBI(http:// www.ncbi.nlm.nih.gov/)，登录号为MN736630，全长cDNA为2154bp。
[0016]专利技术效果：
[0017]本专利技术的积极效果在于细胞内证明了duZAP表达能显著促进鸭IFN
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β分泌，干扰duZAP的表达，poly(I:C)和DTMUV激活的IFN
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β分泌则会明显被抑制。duZAP 有望成为增强鸭体自身免疫的新靶点，在作为鸭抗病毒感染药物及疫苗增强剂等方面具有较大的应用潜力。
附图说明
[0018]图1A为鸭源duZAP表达载体的双酶切鉴定图，图1B为duZAP基因全长的结构域模式图；
[0019]图2为健康鸭各组织的duZAP分布图；
[0020]图3为DuZAP的细胞定位图；
[0021]图4为duZAP对于鸭源IFN
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β启动子活性的影响图；
[0022]图5为干扰DEF细胞内源性duZAP的表达与IFN
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β的启动子活性关系图；
[0023]图6为duZAP过表达对鸭坦布苏病毒(duck tembusu virus,DTMUV)复制的影响图。
具体实施方式
[0024]本专利技术更详细的实施方法可参见实施例，本实施例是用于解释、而不是以任何方式限制本专利技术。实验所涉及的药品购自上海罗氏制药有限公司、普洛麦格公司、生工生物工程(上海)股份有限公司，β
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actin鼠单克隆抗体、抗Flag标签的鼠单克隆抗体购自MBL公司；异硫氰酸荧光素(FITC)标记的羊抗鼠IgG二抗均购自上海碧云天生物技术有限公司。具体实验操作依据《分子克隆实验指南》。本专利技术实施例中％未说明的情况下指的是体积百分比。
[0025]实施例1
[0026]鸭源CCCH锌指抗病毒蛋白duZAP的分子克隆
[0027]1.1鸭源ZAP基因的克隆和真核表达质粒pZAP
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Flag的构建
[0028]1.1.1取健康鸭脾脏，利用TRIZOL法提取总RNA，方法如下：
[0029]取黄豆大小的鸭脾脏组织，用生理盐水研磨后本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鸭源CCCH型锌指抗病毒蛋白基因，其特征在于，所述鸭源CCCH型锌指抗病毒蛋白基因的碱基序列如SEQ ID No.1所示。2.根据权利要求1所述的鸭源CCCH型锌指抗病毒蛋白基因的编码蛋白，所述鸭源CCCH型锌指抗病毒蛋白基因的编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。3.一种带有权利要求1所述的鸭源CCCH型锌指抗病毒蛋白基因的真核表达载体。4.一种权利要求2所述的鸭源CCCH型锌指抗病毒蛋白的应用，其特征在于，所述鸭源CCCH型锌指抗病毒蛋白在制备鸭抗病毒感染药物或疫苗佐剂中的应用。5.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：张蓉蓉，温国元，罗青平，张腾飞，汪宏才，罗玲，商雨，卢琴，张文婷，曾哲，郭云清，邵华斌，
申请(专利权)人：湖北省农业科学院畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：