一种X连锁遗传性视网膜劈裂症的基因治疗方案与应用制造技术

本发明专利技术提供了一种X连锁遗传性视网膜劈裂症的基因治疗方案与应用。具体地，本发明专利技术对RS1基因编码序列进行了针对性特殊优化设计，从而获得了一种特别适合在哺乳动物(如人)细胞(如感光细胞、视神经细胞)中高效表达RS1蛋白的核苷酸序列，并构建了一种表达正常人源RS1蛋白的重组AAV病毒。相对于未优化的编码序列，经过特殊优化后的RS1编码序列(SEQ ID NO.:1)的表达量显著提高，非常适合在哺乳动物(尤其是人)细胞内表达，能有效治疗X连锁青少年视网膜劈裂症。裂症。

【技术实现步骤摘要】
一种X连锁遗传性视网膜劈裂症的基因治疗方案与应用


[0001]本专利技术属于基因治疗领域，具体地，本专利技术涉及一种X连锁遗传性视网膜劈裂症(XLRS)的基因治疗方案与应用。

技术介绍

[0002]X连锁视网膜劈裂症(X-Linked juvenile Retinoschisis，XLRS)是一种罕见的遗传性致盲性眼病,发病率约为1:5000～1:25000。XLRS主要累及双侧视网膜,在视网膜神经纤维层和神经节细胞层之间出现劈裂腔，导致严重的视力下降。此病常发于男性，是引起男性青少年黄斑变性的最主要原因,女性作为携带者无特征性临床表现。目前，临床上没有特异治疗XLRS青少年视网膜劈裂症的药物。
[0003]因此,本领域急需一种有效治疗XLRS同时安全可靠的治疗载体及组合物。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种有效治疗XLRS同时安全可靠的治疗载体及组合物。
[0005]本专利技术的第一方面，提供了一种核苷酸序列，所述核苷酸序列编码人源RS1蛋白，且所述核苷酸序列选自下组：
[0006](a)所述核苷酸序列如SEQ ID NO.:1所示；
[0007](b)所述核苷酸序列与SEQ ID NO.:1所示的核苷酸序列有≥95％相同性，优选地≥98％，更优选地≥99％；和
[0008](c)与(a)或(b)所述的核苷酸序列互补的核苷酸序列。
[0009]在另一优选例中，所述核苷酸序列包括DNA序列、cDNA序列、或mRNA序列。
[0010]在另一优选例中，所述核苷酸序列包括单链序列和双链序列。
[0011]在另一优选例中，所述核苷酸序列包括与SEQ ID NO.:1完全互补的核苷酸序列。
[0012]在另一优选例中，所述核苷酸序列编码的氨基酸序列与人源RS1蛋白的氨基酸序列一致；优选地，所述的人源RS1蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.:2所示。
[0013]本专利技术的第二方面，提供了一种融合核酸，所述融合核酸包含如本专利技术第一方面所述的编码人源RS1蛋白的核苷酸序列。
[0014]在另一优选例中，所述融合核酸还包含UTR序列。
[0015]在另一优选例中，所述UTR序列包括3
’
UTR和/或5
’
UTR。
[0016]在另一优选例中，所述融合核酸从5
’
端-3
’
端具有式I结构：
[0017]Z0-Z1-Z2
ꢀꢀꢀ
(I)
[0018]式中，
[0019]各
“-”
独立地为键或核苷酸连接序列；
[0020]Z0为无、或5
’
UTR序列；
[0021]Z1为如本专利技术第一方面所述的核苷酸序列；和
[0022]Z2为无、或3
’
UTR序列。
[0023]在另一优选例中，所述融合核酸从5
’-3’
端的结构为5
’
UTR-人源RS1蛋白-3
’
UTR。
[0024]在另一优选例中，各个核苷酸连接序列的长度为1-30nt，较佳地1-15nt，更佳地3-6nt。
[0025]在另一优选例中，所述的核苷酸连接序列来源于限制性内切酶酶切形成的核苷酸接头序列。
[0026]本专利技术的第三方面，提供了一种载体，所述载体含有如本专利技术第一方面所述的核苷酸序列或本专利技术第二方面所述的融合核酸。
[0027]在另一优选例中，所述载体包含一个或多个启动子，所述启动子可操作地与所述核酸序列、增强子、转录终止信号、多腺苷酸化序列、复制起点、选择性标记、核酸限制性位点、和/或同源重组位点连接。
[0028]在另一优选例中，所述的载体选自下组：质粒、病毒载体。
[0029]在另一优选例中，所述的载体选自下组：慢病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体(AAV)、或其组合。
[0030]在另一优选例中，所述载体为病毒颗粒的形式。
[0031]在另一优选例中，所述载体为腺相关病毒AAV载体。
[0032]在另一优选例中，所述AAV载体的血清型选自：AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、或其组合。较佳地，所述AAV载体的血清型为AAV2或AAV5。
[0033]在另一优选例中，所述载体为AAV2载体。
[0034]在另一优选例中，所述的载体包括DNA病毒载体、逆转录病毒载体。
[0035]在另一优选例中，所述载体为含有或插入有如本专利技术第一方面所述的核苷酸序列或本专利技术第二方面所述的融合核酸的AAV载体；较佳地为rAAV2载体。
[0036]在另一优选例中，所述载体的骨架为腺相关病毒载体质粒AAV.opti-hRS1。
[0037]在另一优选例中，所述载体用于表达人源RS1蛋白。
[0038]本专利技术的第四方面，提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞含有本专利技术第三方面所述的载体，或其染色体中整合有外源的如本专利技术第一方面所述的核苷酸序列或本专利技术第二方面所述的融合核酸。
[0039]在另一优选例中，所述宿主细胞为哺乳动物细胞，所述哺乳动物包括人和非人哺乳动物。
[0040]在另一优选例中，所述宿主细胞选自下组：HEK293细胞、感光细胞(包括锥状细胞和/或杆状细胞)、其他视觉细胞(如双节细胞)、(视)神经细胞、或其组合。
[0041]在另一优选例中，所述宿主细胞选自下组：视杆细胞、视锥细胞、给光双极细胞、撤光双极细胞、水平细胞、神经节细胞、无长突细胞、或其组合。
[0042]在另一优选例中，所述宿主细胞为(视网膜)神经节细胞。
[0043]本专利技术的第五方面，提供了如本专利技术第三方面所述的载体的用途，用于制备一制剂或组合物，所述制剂或组合物用于恢复受试者视力、和/或治疗或预防眼部疾病。
[0044]在另一优选例中，所述眼部疾病为X连锁视网膜劈裂症(XLRS)。
[0045]在另一优选例中，所述制剂或组合物用于治疗或预防X连锁视网膜劈裂症。
[0046]在另一优选例中，所述制剂或组合物用于减少患有或有风险形成X连锁视网膜劈裂症的受试者中的RS1蛋白水平下降和XLRS病情发展。
[0047]在另一优选例中，所述XLRS病情包括：视网膜结构变化和功能特征。
[0048]在另一优选例中，所述视网膜结构变化包括内层视网膜裂开和黄斑区微囊样车轮状改变。
[0049]在另一优选例中，所述功能特征是视网膜电图(ERG)b波显著减小，a波正常或轻度下降，b/a波比值下降。
[0050]本专利技术的第六方面，提供了一种药物制剂，所述的制剂含有(a)本专利技术第三方面所述的载体，以及(b)药学上可接受的载体或赋形剂。
[0051]在另一优选例中，所述药物制剂的剂型选自下组：冻干制剂、液体制剂、或其组合。
[0052本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种核苷酸序列，所述核苷酸序列编码人源RS1蛋白，且所述核苷酸序列选自下组：(a)所述核苷酸序列如SEQ ID NO.:1所示；(b)所述核苷酸序列与SEQ ID NO.:1所示的核苷酸序列有≥95％相同性，优选地≥98％，更优选地≥99％；和(c)与(a)或(b)所述的核苷酸序列互补的核苷酸序列。2.如权利要求1所述的核苷酸，所述核苷酸序列编码的氨基酸序列与人源RS1蛋白的氨基酸序列一致。3.一种融合核酸，所述融合核酸包含如权利要求1所述的编码人源RS1蛋白的核苷酸序列。4.如权利要求3所述的融合核酸，所述融合核酸从5
’
端-3
’
端具有式I结构：Z0-Z1-Z2
ꢀꢀ
(I)式中，各
“-”
独立地为键或核苷酸连接序列；Z0为无、或5
’
UTR序列；Z1为如本发明第一方面所述的核苷酸序列；...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗学廷，孙晓东，李敏，
申请(专利权)人：上海市第一人民医院，
类型：发明
国别省市：