一种MAP3K10基因片段及引物在制备颅内动脉瘤检测试剂盒中的用途制造技术

本发明专利技术公开了一种MAP3K10基因片段在颅内动脉瘤的临床诊断检测试剂盒的开发及其应用，所述的检测试剂盒内包括一对MAP3K10基因甲基化特异性扩增引物及一个甲基化特异性测序引物：其中上游引物具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，下游引物具有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，甲基化特异性测序引物如SEQ ID NO.3所示，优点是该诊断试剂盒可以方便快捷地在分子水平上实现对颅内动脉瘤的检测，检测效率高，针对性强，同时，以MAP3K10基因甲基化为靶点的药物有望成为颅内动脉瘤辅助诊断、检测和筛选的一种新手段。和筛选的一种新手段。和筛选的一种新手段。

【技术实现步骤摘要】
一种MAP3K10基因片段及引物在制备颅内动脉瘤检测试剂盒中的用途


[0001]本专利技术涉及颅内动脉瘤的辅助诊断
，具体涉及MAP3K10基因片段在颅内动脉瘤的临床诊断检测试剂盒的开发及疗效监测和预后判断领域的应用。

技术介绍

[0002]颅内动脉瘤(Intracranial aneurysms，IA)是一种死亡率极高的脑血管病，其主要是指颅内动脉血管壁脆弱等原因导致内腔局限性异常膨胀形成一种突出的瘤状。大多数IA破裂前没有任何症状，一旦破裂出血患者死亡率高达40％，并且半数在48小时内死亡。患者即使幸存下来，也有1/3可发生再次出血，发生再次出血者的死亡率高达70
‑
80％。IA发病年龄一般在40
‑
50岁之间，发病凶而急，手术抢救后患者也可能留下不同程度的残疾和后遗症，给患者家庭和社会带来沉重的负担。IA的发病原因尚不十分清楚。目前，研究认为IA的发生、形成是一个复杂的多基因，多生物因子共同作用的过程。吸烟饮酒等不良生活习惯等多种因素通过表观遗传影响相关基因DNA甲基化进而改变基因表达参与到IA的病理过程中。因此，表观遗传学变化在IA致病机理研究中越来越受到重视。
[0003]丝裂原活化蛋白3激酶10(Mitogen
‑
activated protein kinase kinase kinase 10，MAP3K10)是MAPK信号通路中的一个激酶，通过多种途径作用于JNK信号通路，在血管炎症，细胞凋亡，神经元分化等方面发挥着重要作用。MAP3K10在人体大脑皮层，海马区，杏仁体，小脑，下丘脑以及肌肉组织中均有着丰富的表达量。人体中MAP3K10含量的平衡有着重要的作用，其基因持续高表达将导致MAPK信号通路中JN和P38的激活，进而促进脑血管病变后神经细胞凋亡以及神经炎症的发生。DNA甲基化是影响基因表达的一个重要因素，高度甲基化能有效降低基因的表达。目前，国内外没有公开任何关于MAP3K10基因甲基化与颅内动脉瘤相关的研究报道。

技术实现思路

[0004]本专利技术所要解决的技术问题是针对现有技术的现状，提供检测效率高，针对性强的一种辅助诊断颅内动脉瘤的检测试剂盒的开发及其应用，其中MAP3K10基因甲基化水平与颅内动脉瘤的患病率呈负相关。
[0005]本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案为：
[0006]一组MAP3K10甲基化扩增引物在制备颅内动脉瘤检测试剂盒中的用途，所述的检测试剂盒内包括一对MAP3K10基因甲基化特异性扩增引物及一个甲基化特异性测序引物：
[0007]甲基化特异性上游引物的核苷酸序列：
[0008]5’‑
ATTTGGAGTTGGAGAGTTTTAAG
‑3’
；
[0009]甲基化特异性下游引物的核苷酸序列：
[0010]5’‑
Biotin
‑
CTAAATACAAAACCCCTCACTCACCAAAAC
‑3’
；
[0011]甲基化特异性测序引物的核苷酸序列：
[0012]5’‑
GAGAGTTTTAAGAAGGATTT
‑3’
。
[0013]一种辅助诊断颅内动脉瘤的检测试剂盒的应用，所述的检测试剂盒能用于颅内动脉瘤辅助诊断、疗效预后或筛查药物。
[0014]与现有技术相比，本专利技术的优点在于：本专利技术首次公开了用于检测与颅内动脉瘤相关的MAP3K10基因甲基化程度的检测试剂盒及其应用，MAP3K10基因的低甲基化水平导致MAP3K10基因的高表达，引起相关信号通路变化，从而引起脑部动脉血管的紊乱引发疾病，因此，MAP3K10基因内甲基化水平与颅内动脉瘤的患病率呈负相关。以检测MAP3K10基因内甲基化水平为基础的检测试剂盒可以方便快捷地在分子水平上实现对颅内动脉瘤的检测，检测效率高，针对性强，同时，以MAP3K10基因甲基化为靶点的药物有望成为颅内动脉瘤辅助诊断、检测和筛选的一种新手段。
附图说明
[0015]图1为MAP3K10基因被检测序列所在区域具体位置为hg38，Chr19：40，214，098
‑
40，214，178，该区域所检测的14个CpG位点分布位置；
[0016]图2为MAP3K10基因甲基化水平检测结果示例(图中所示百分数为对应CpG位点的甲基化程度，如图示有CpG1到CpG14的甲基化程度分别为93％，90％，86％。70％，73％，79％，98％，68％，91％，68％，83％，95％，16％，81％)；
[0017]图3为颅内动脉瘤与对照组间MAP3K10基因甲基化差异图表(表1)；
[0018]图4为不同性别颅内动脉瘤与对照组之间MAP3K10基因甲基化差异(颅内动脉瘤患者MAP3K10基因甲基化程度显著低于对照组)；
[0019]图5为MAP3K10基因甲基化与颅内动脉瘤的敏感性和特异性(AUC
CpG1
＝0.811，最佳临界点时的敏感度为97.9％，特异性为54.2％)；
具体实施方式
[0020]以下结合附图实施例对本专利技术作进一步详细描述。
[0021]一组MAP3K10甲基化扩增引物在制备颅内动脉瘤检测试剂盒中的用途，所述的检测试剂盒内包括一对MAP3K10基因甲基化特异性扩增引物及一个甲基化特异性测序引物：
[0022]甲基化特异性上游引物的核苷酸序列：
[0023]5’‑
ATTTGGAGTTGGAGAGTTTTAAG
‑3’
；
[0024]甲基化特异性下游引物的核苷酸序列：
[0025]5’‑
Biotin
‑
CTAAATACAAAACCCCTCACTCACCAAAAC
‑3’
；
[0026]甲基化特异性测序引物的核苷酸序列：
[0027]5’‑
GAGAGTTTTAAGAAGGATTT
‑3’
。
[0028]一种辅助诊断颅内动脉瘤的检测试剂盒的应用，所述的检测试剂盒能用于颅内动脉瘤辅助诊断、疗效预后或筛查药物。
[0029]1、研究对象的收集
[0030]募集愿意参加研究的志愿者，根据颅内动脉瘤的国际诊断标准收集病例组，健康志愿者作为对照组，并采用调查表的形式调查志愿者的一般情况，同时采取静脉血，进行一般血生化检测，具体如下：
[0031]从某医院神经外科住院部收集经磁共振成像和血管造影术证实的颅内动脉瘤患者48例(24男；24女)，同时收集性别匹配、年龄相仿的48名正常人作为对照组(24男；24女)。所有参与研究的对象均排除心源性休克、重度心力衰竭、严重室性心律失常、伴有其他严重疾病如恶性肿瘤、严重肝肾疾病等。记录所有研究对象空腹抽血检测血脂、血糖等一般生化指标，同时抽取静脉血3ml入EDTA抗凝管中，
‑
80℃低温储存，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一对MAP3K10基因启动子区甲基化特异性扩增引物及一个甲基化特异性测序引物在制备颅内动脉瘤检测试剂盒在的用途，其特征是：：甲基化特异性上游引物的核苷酸序列：5
’‑
ATTTGGAGTTGGAGAGTTTTAAG
‑3’
；甲基化特异性下游引物的核苷酸序列：5
’‑
Biotin
‑
CTAAATACAAAACCCCTCACTCACCAAAAC
‑3’

【专利技术属性】
技术研发人员：黄毅，孙杰，高翔，聂晟，
申请(专利权)人：宁波市第一医院，
类型：发明
国别省市：