本申请公开了一种食管癌检测试剂盒及其应用，对DIDO1基因CpG岛DNA甲基化水平的检测，可以用于食管癌患者的诊断及辅助诊断。本申请提供了DIDO1作为食管癌的分子标记物，可用于不同分期食管癌患者的检测诊断，具有良好的灵敏度和特异性，对于食管癌非介入性检测、早期筛查及改善患者预后具有重要意义。筛查及改善患者预后具有重要意义。
【技术实现步骤摘要】
食管癌检测试剂盒及其应用
[0001]本申请涉及生物医药
，具体涉及一种食管癌检测试剂盒及其应用。
技术介绍
[0002]食管癌是是消化系统最常见的恶性肿瘤之一。食管癌分为鳞状细胞癌和腺癌两种亚型，其中在中国鳞状细胞癌的发病率非常高。
[0003]相当多食管癌患者在确诊时已经是中晚期，其预后较差。食管癌的早期诊断能明显提高治疗效果并改善患者的预后，食管癌的癌前病变，包括鳞状细胞癌的癌前病变和腺癌的癌前病变，即鳞状上皮和腺上皮的上皮内瘤变/异型增生。鳞状上皮的上皮内瘤变/异型增生，是指以食管黏膜鳞状上皮内不同层次的异型鳞状细胞为特征的癌前病变，根据病变累及层次，分为低级别上皮内瘤变/异型增生和高级别上皮内瘤变/异型增生。腺上皮的上皮内瘤变/异型增生，是指以食管腺上皮不同程度的细胞异型性和结构异常为特征的癌前病变，主要见于Barrett食管，根据细胞异型性和结构异常的程度，分为低级别上皮内瘤变/异型增生和高级别上皮内瘤变/异型增生。内镜和细胞活检等技术相结合提高了高危人群中食管癌的检出率，但患者接受度低、且操作不够灵活，近年来分子生物学方面的进展为开发简便、有效的早期诊断方法提供了新的方向。
[0004]人DIDO1基因是引起细胞凋亡的蛋白，细胞凋亡是细胞死亡的主要形式，是消除有害细胞的有效机制，对于后生动物的发育和体内平衡具有至关重要的作用。但尚未见DIDO1基因与食管癌相关的报道。
技术实现思路
[0005]本申请提供一种基于DIDO1基因CpG岛甲基化水平检测的食管癌检测试剂盒及其使用方法，可以用于食管癌的检测诊断尤其是食管癌的早期筛查。
[0006]本申请提供如下技术方案：
[0007]一种基于DIDO1基因甲基化水平检测的食管癌检测试剂盒，包括能够特异性检测生物样本中靶核苷酸序列中CpG二核苷酸位点是否发生甲基化反应的检测试剂，其中，所述靶核苷酸序列源自DIDO1基因的CpG岛。
[0008]在本申请的一些实施例中，所述靶核苷酸序列是DIDO1基因的核苷酸序列全长或其部分区域，其中所述部分区域至少包括一个CpG二核苷酸位点。
[0009]在本申请的一些实施例中，所述部分区域为SEQ ID NO.28所示的核苷酸序列或与SEQ ID NO.28一一对应且反向互补的核苷酸序列。
[0010]在本申请的一些实施例中，所述部分区域为SEQ ID NO.29
‑
SEQ ID NO.36任一所示的核苷酸序列或其中至少两者所示的核苷酸序列的组合。
[0011]在本申请的一些实施例中，所述检测试剂包括可PCR扩增所述靶核苷酸序列的引物对。
[0012]在本申请的一些实施例中，所述引物对选自以下的组中的一组或多组：
[0013](1)SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的核酸分子；
[0014](2)SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的核酸分子；
[0015](3)SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示的核酸分子；
[0016](4)SEQ ID NO.10和SEQ ID NO.11所示的核酸分子；
[0017](5)SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14所示的核酸分子；
[0018](6)SEQ ID NO.16和SEQ ID NO.17所示的核酸分子；
[0019](7)SEQ ID NO.19和SEQ ID NO.20所示的核酸分子；
[0020](8)SEQ ID NO.22和SEQ ID NO.23所示的核酸分子。
[0021]在本申请的一些实施例中，所述检测试剂还包括可标记所述靶核苷酸序列的探针；在一些实施例中，所述探针选自SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.21、或SEQ ID NO.24中的至少一种。
[0022]在本申请的一些实施例中，所述试剂盒还包括能差异修饰甲基化DNA和非甲基化DNA的反应试剂。
[0023]在本申请的一些实施例中，所述反应试剂为重亚硫酸盐。
[0024]在本申请的一些实施例中，所述生物样本为血液样本、唾液样本、组织样本或食管来源的细胞样本；所述生物样本为来源于哺乳动物的离体生物样本。
[0025]在本申请的一些实施例中，所述检测试剂盒还包括内参基因、对照物和缓冲液。
[0026]本申请还提供上述食管癌检测试剂盒的应用，所述检测试剂盒用于制备食管鳞状细胞癌或食管腺癌的诊断或辅助诊断试剂盒。
[0027]相应地，本申请还提供上述食管癌检测试剂盒的使用方法，
[0028]提供离体生物样本，提取样本DNA；
[0029]加入所述检测试剂，进行PCR扩增反应，检测所述样本DNA中靶核苷酸序列中CpG二核苷酸位点是否发生甲基化反应，其中，所述靶核苷酸序列源自DIDO1基因的CpG岛；以及
[0030]分析所述样本中被扩增区域的DNA的甲基化水平；
[0031]其中，加入所述检测试剂之前，任选地，还包括加入反应试剂差异化修饰甲基化DNA和非甲基化DNA的步骤。
[0032]有益效果：
[0033]本申请提供的基于DIDO1基因甲基化水平检测的食管癌检测试剂盒及其使用方法，以对DIDO1基因作为目标基因，通过检测DIDO1基因中CpG二核苷酸位点是否发生甲基化，为食管癌患者的诊断及辅助诊断提供参考。本申请提供了一种基于新的食管癌检测生物标志物，可用于不同分期食管癌患者的检测诊断，具有良好的灵敏度和特异性，对于食管癌非介入性检测、早期筛查及改善患者预后具有重要意义。
具体实施方式
[0034]下面将结合本申请实施例，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。
[0035]本申请实施例提供一种基于DIDO1基因甲基化水平检测的食管癌检测试剂盒及其
使用方法。以下分别进行详细说明。需说明的是，以下实施例的描述顺序不作为对实施例优选顺序的限定。另外，在本申请的描述中，术语“包括”是指“包括但不限于”。
[0036]本申请实施例首先提供一种基于DIDO1基因甲基化水平检测的食管癌检测试剂盒，包括能够特异性检测生物样本中靶核苷酸序列中CpG二核苷酸位点是否发生甲基化反应的检测试剂，其中，所述靶核苷酸序列源自DIDO1基因的CpG岛。
[0037]CpG岛是指DNA上的一个区域，此区域富含大量的用磷酸酯键相连的胞嘧啶和鸟嘌呤。一般的定义为一段至少含有200bp碱基的区域，其中GC所占的比例超过50％，且CpG的观察值/预测值高于0.6。
[0038]在本申本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种食管癌检测试剂盒，其特征在于，包括能够特异性检测生物样本中靶核苷酸序列中CpG二核苷酸位点甲基化水平的检测试剂，其中，所述靶核苷酸序列源自DIDO1基因的CpG岛。2.根据权利要求1所述的食管癌检测试剂盒，其特征在于，所述靶核苷酸序列是DIDO1基因的核苷酸序列全长或其部分区域，其中所述部分区域至少包括一个CpG二核苷酸位点。3.根据权利要求2所述的食管癌检测试剂盒，其特征在于，所述部分区域为SEQ ID NO.28所示的核苷酸序列或与SEQ ID NO.28一一对应反向互补的核苷酸序列。4.根据权利要求2所述的食管癌检测试剂盒，其特征在于，所述部分区域为SEQ ID NO.29
‑
SEQ ID NO.36任一所示的核苷酸序列或其中至少两者所示的核苷酸序列的组合。5.根据权利要求1
‑
4任一项所述的食管癌检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂包括可PCR扩增所述靶核苷酸序列的引物对。6.根据权利要求5所述的食管癌检测试剂盒，其特征在于，所述引物对选自以下的组中的一组或多组：(1)SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的核酸分子；(2)SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的核酸分子；(3)SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示的核酸分子；(4)SEQ ID NO.10和SEQ ID NO.11所示的核酸分子；(5)SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14所示的核酸分子；(6)SEQ ID NO.16和SEQ ID NO.17所示的核酸分子；(7)SEQ ID NO.19和SEQ ID NO.2...
【专利技术属性】
技术研发人员：张良禄，周俊，董兰兰，熊杨辉，李婷婷，
申请(专利权)人：武汉艾米森生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。