本申请公开了一种用于食管癌诊断或辅助诊断的检测试剂及试剂盒，对SEQ ID NO.22或者其互补序列的全长和部分区域进行DNA甲基化水平的检测，可以用于食管癌患者的诊断及辅助诊断，尤其适用于食管鳞状细胞癌的检测诊断/辅助诊断，可用于不同分期食管癌患者，具有良好的灵敏度和特异性，可采用组织样本、血浆样本作为监测样本，对于食管癌早期诊断及改善患者预后具有重要意义。预后具有重要意义。
【技术实现步骤摘要】
用于食管癌诊断或辅助诊断的检测试剂及试剂盒
[0001]本申请涉及生物医药
，具体涉及一种用于食管癌诊断或辅助诊断的检测试剂及试剂盒。
技术介绍
[0002]食管癌是发生在食管黏膜上皮及食管腺上皮的恶性肿瘤，属于一种十分普遍的恶性肿瘤，近年来，食管癌的发病率还在逐步提升。目前，我国的食管癌患病率位居世界第一，并且远超其他国家和地区。就所有肿瘤来看食管癌在我国是除肺癌、肝癌与胃癌之外的第四大恶性肿瘤。食管癌的早期诊断和早期治疗介入对降低食管癌的死亡率，延长患者生存期有重要意义。
[0003]食管癌目前主要有两类组织学分类：食管腺癌(Esophageal Adenocarcinoma,EAC)和食管鳞癌(Esophageal Squamous Cell Carcinoma,ESCC)。食管鳞癌大多由上皮细胞分化而成，其大多发生在食管上部，即颈部食管、胸部上段食管以及部分胸部中段食管。而食管腺癌通常由巴雷特食管发展而来，大多由食管下部接近胃的柱状腺上皮细胞异生形成，其部位主要位于部分胸部中段食管以及胸部下段食管和胃食管连接部。一些发展中国家与经济欠发达地区食管鳞癌占据着主导地位。在我国，有90％以上的食管癌患者都是食管鳞癌。相当多食管癌患者在确诊时已经是中晚期，其预后较差。食管癌的早期诊断能明显提高治疗效果并改善患者的预后，食管癌的癌前病变，包括鳞状细胞癌的癌前病变和腺癌的癌前病变，即鳞状上皮和腺上皮的上皮内瘤变/异型增生。鳞状上皮的上皮内瘤变/异型增生，是指以食管黏膜鳞状上皮内不同层次的异型鳞状细胞为特征的癌前病变，根据病变累及层次，分为低级别上皮内瘤变/异型增生和高级别上皮内瘤变/异型增生。腺上皮的上皮内瘤变/异型增生，是指以食管腺上皮不同程度的细胞异型性和结构异常为特征的癌前病变，主要见于Barrett食管，根据细胞异型性和结构异常的程度，分为低级别上皮内瘤变/异型增生和高级别上皮内瘤变/异型增生。
[0004]目前临床上对于食管癌的诊断方法主要包括肿瘤标记物检测、食管功能检查、影像学及内镜检查、细胞或组织病理学检查等。其中肿瘤标记物是指肿瘤细胞所特异性产生的物质，它们的存在及表达量的变化预示着肿瘤的存在与发生发展。目前已有多种类似的标记物能对肿瘤的诊断予以辅助，如P53抗体、癌胚抗原(CEA)、鳞癌抗原(SCC
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Ag)和细胞角蛋白21
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1，总体能获得一定的特异性和敏感性，但无法单独完成对肿瘤的诊断；内镜和细胞活检等技术相结合提高了高危人群中食管癌的检出率，但患者接受度低、且操作不够灵活；影像学检查主要有X线钡餐、CT等，这些检查对于仪器和检测技术有较高的要求，并且费用较高，不适用于大规模的筛查。由于食管癌的特性，大多数患者在出现下咽困难等症状后才会就医进行检查，而此时发现的食管癌大多已处于较晚期的状态，对于患者的预后与生存十分不利。因此，寻找简单有效可大规模筛查并具有高准确性的生物标记物对于改善食管癌高致死率的现状尤其重要。
技术实现思路
[0005]本申请提供一种用于食管癌诊断或辅助诊断的检测试剂及试剂盒，可以用于食管癌的诊断或辅助诊断，尤其是食管癌的早期筛查。
[0006]本申请提供如下技术方案：
[0007]一种用于食管癌诊断或辅助诊断的检测试剂，包括能够特异性检测生物样本中目标序列的检测试剂，其中，所述目标序列选自以下(a)
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(c)中至少任一核苷酸序列：
[0008](d)SEQ ID NO.22所示的核苷酸序列的全长或其互补序列；
[0009](e)来源于(a)的任意部分区域，其中所述部分区域包括至少一个CpG二核苷酸位点；
[0010](f)与(a)或(b)至少80％以上同一性的核苷酸序列。
[0011]在本申请的一些实施例中，所述互补序列是与SEQ ID NO.22所示的核苷酸序列的每个碱基一一对应反向互补所形成的核苷酸序列。
[0012]在本申请的一些实施例中，所述检测试剂包括核酸分子。
[0013]在本申请的一些实施例中，所述核酸分子包括可PCR扩增(a)、(b)或(c)的核苷酸序列的引物对及探针。
[0014]在本申请的一些实施例中，所述部分区域为SEQ ID NO.23
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SEQ ID NO.28任一所示的核苷酸序列或其中至少两者所示的核苷酸序列的组合。
[0015]在本申请的一些实施例中，所述引物对选自以下的组中的一组或多组：
[0016](7)SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的核酸分子；
[0017](8)SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的核酸分子；
[0018](9)SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示的核酸分子；
[0019](10)SEQ ID NO.10和SEQ ID NO.11所示的核酸分子；
[0020](11)SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14所示的核酸分子；
[0021](12)SEQ ID NO.16和SEQ ID NO.17所示的核酸分子；
[0022]在本申请的一些实施例中，所述探针选自SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.18中的一种或多种。
[0023]在本申请的一些实施例中，所述试剂还包括能差异修饰甲基化DNA和非甲基化DNA的反应试剂。
[0024]在本申请的一些实施例中，所述反应试剂为重亚硫酸盐。
[0025]在本申请的一些实施例中，所述生物样本为血液样本、唾液样本、组织样本或食管来源的细胞样本；所述生物样本为来源于哺乳动物的离体生物样本。
[0026]相应地，本申请还提供一种用于食管癌诊断或辅助诊断的检测试剂盒，其包括如上所述的用于食管癌诊断或辅助诊断的检测试剂。
[0027]在本申请的一些实施例中，所述检测试剂盒还包括内参基因、对照物和缓冲液。
[0028]在本申请的一些实施例中，所述食管癌包括食管鳞状细胞癌和食管腺癌。
[0029]有益效果：
[0030]本申请提供的用于食管癌诊断或辅助诊断的检测试剂及试剂盒，对来源于ZNF582基因的DNA甲基化水平的检测，可有效筛查食管癌，尤其适用于食管鳞状细胞癌的检测诊断/辅助诊断，可用于不同分期食管癌患者，包括高级别瘤变、早期食管癌、进展期食管癌，
因而本申请的检测试剂盒可用于食管癌的早期筛查，具有良好的灵敏度和特异性，检测样本取样方便，对于早日治疗介入及改善患者预后具有重要意义。
具体实施方式
[0031]下面将结合本申请实施例，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种用于食管癌诊断或辅助诊断的检测试剂，其特征在于，包括能够特异性检测生物样本中目标序列甲基化水平的检测试剂，其中，所述目标序列选自以下(a)
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(c)中至少任一核苷酸序列：(a)SEQ ID NO.22所示的核苷酸序列的全长或其互补序列；(b)来源于(a)的任意部分区域，其中所述部分区域包括至少一个CpG二核苷酸位点；(c)与(a)或(b)至少80％以上同一性的核苷酸序列。2.根据权利要求1所述的用于食管癌诊断或辅助诊断的检测试剂，其特征在于，所述互补序列是与SEQ ID NO.22所示的核苷酸序列的每个碱基一一对应反向互补所形成的核苷酸序列。3.根据权利要求1所述的用于食管癌诊断或辅助诊断的检测试剂，其特征在于，所述检测试剂包括核酸分子。4.根据权利要求3所述的用于食管癌诊断或辅助诊断的检测试剂，其特征在于，所述核酸分子包括可PCR扩增(a)、(b)或(c)的核苷酸序列的引物对。5.根据权利要求1所述的用于食管癌诊断或辅助诊断的检测试剂，其特征在于，所述部分区域为SEQ ID NO.23
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SEQ ID NO.28任一所示的核苷酸序列或其中至少两者所示的核苷酸序列的组合。6.根据权利要求4所述的用于食管癌诊断或辅助诊断的检测试剂，其特征在于，所述引物对选自以下的组中的一组或多组：(1)SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的核酸分子；(2)SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的核酸分子；(3)SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示的核酸分子；(4)SEQ ID NO.10和SEQ ID NO.11...
【专利技术属性】
技术研发人员：张良禄，周俊，董兰兰，熊杨辉，李婷婷，
申请(专利权)人：武汉艾米森生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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