一种靶向递送分子、粒子及其制备方法、应用技术

本发明专利技术公开了一种靶向递送分子、粒子及其制备方法、应用，包括以下步骤：步骤1：向含马来酰胺基团和疏水基团的聚乙二醇分子A溶液中滴加含巯基的多肽靶向因子B溶液，搅拌充分反应；其中A和B的物质的量比为1:1；步骤2：将步骤1反应得到的溶液透析、冷冻干燥即可得到所需靶向递送分子；本发明专利技术制备得到的靶向递送分子，一端具有软骨细胞特异性的多肽靶向因子，可以靶向软骨组织。另一端的疏水基团可以通过物理作用插入疏水的脂质双分子层。从而将多肽靶向因子装配在具有治疗骨关节炎作用的细胞，细胞外泌体、脂质体等由脂质双分子层构成的囊泡表面。可以将上述细胞和囊泡连同其内容物靶向递送到软骨，在骨关节炎治疗中具有良好的应用前景。景。景。

【技术实现步骤摘要】
一种靶向递送分子、粒子及其制备方法、应用


[0001]本专利技术涉及生物医用材料
，具体涉及一种靶向递送分子、粒子及其制备方法、应用。

技术介绍

[0002]骨关节炎是一种全关节疾病，涉及透明关节软骨、软骨下骨，韧带、滑膜和关节周围肌肉结构的改变。骨关节炎的发病机制复杂涉及机械、炎性和代谢因素，这最终导致结构破坏和滑膜关节失效。传统的非手术疗法，可以在某种程度上改善症状，但不能恢复关节软骨的再生或改变变性过程。外科关节置换术可以长期改善功能并改善生活质量，然而不稳定和感染是最常见的局限性，通常需要进行进一步的关节翻修手术。
[0003]近年来，干细胞及其外泌体用于治疗骨关节炎疾病的研究越来越多。研究表明，干细胞可以抑制免疫细胞中炎症细胞因子的迁移、活化和产生，并减弱骨关节炎关节中的炎症。而外泌体介导的骨软骨缺损修复的特征在于增加的细胞增殖和浸润，增强的基质合成和再生免疫表型。同时脂质体作为药物的运输载体，在骨关节炎疾病治疗方面也多有报道。但为了实现精准有效的药物递送，通常会对载体或药物进行物理化学改性、修饰。这些技术应该在增强其对特定组织或细胞靶向能力的基础上，尽可能减少对药物原有性质的影响。但是由于多肽具有生物活性的物质，应用多肽进行靶向修饰，通常会因反应条件会破坏多肽的活性，所以限制了多肽的应用。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供一种不破坏多肽的活性，有效实现靶向作用的靶向递送分子、粒子及其制备方法、应用。
[0005]本专利技术采用的技术方案是：
[0006]一种靶向递送分子的制备方法，包括以下步骤：
[0007]步骤1：向含马来酰胺基团和疏水基团的聚乙二醇分子A溶液中滴加含巯基的多肽靶向因子B溶液，搅拌充分反应；其中A和B的物质的量比为1:1；
[0008]步骤2：将步骤1反应得到的溶液透析、冷冻干燥即可得到所需靶向递送分子。
[0009]进一步的，所述多肽靶向因子为与关节软骨或骨关节炎疾病相关的多肽。
[0010]进一步的，所述多肽靶向因子包括软骨细胞归巢肽、Ⅱ型胶原靶向肽中的一种或两种以任意比例构成的混合物。
[0011]进一步的，所述步骤1中的反应时间为2～6小时。
[0012]进一步的，所述疏水基团为油酰基、胆固醇中的一种或两种以任意比例构成。
[0013]如权利要求1～5所述任一种方法得到的靶向递送分子。
[0014]一种靶向递送粒子，所述靶向递送粒子为权利要求1～5任一种靶向递送分子中的疏水基团插入含脂质双分子层的粒子构成。
[0015]进一步的，所述含脂质双分子层的粒子为细胞外泌体、脂质体、具有治疗骨关节炎
作用的细胞中的一种。
[0016]一种靶向递送粒子的应用，所述靶向递送粒子作为治疗骨关节炎药物的载体。
[0017]进一步的，所述靶向粒子作为靶向治疗骨关节炎基因载体。
[0018]本专利技术的有益效果：
[0019](1)本专利技术在比较温和的条件下反应不会使多肽丧失活性；并且通过巯基
‑
丙烯酰胺点击化学法合成针对骨关节炎的靶向递送分子，不使用金属催化剂，反应条件温和，能最大程度地保持多肽的生物活性；
[0020](2)本专利技术得到的靶向递送分子将疏水基团插入含脂质体膜的粒子，可以实现靶向修饰，赋予其对应粒子靶向作用；该粒子可以载药或治疗骨关节炎的基因等，对骨关节炎实现靶向治疗；
[0021](3)本专利技术得到的靶向递送粒子，可以减少药物损耗及对正常细胞的毒副作用，在骨关节炎治疗中具有良好的应用前景。
附图说明
[0022]图1为本专利技术实施例1中用到的含马来酰胺基团和疏水基团的聚乙二醇分子。
[0023]图2为本专利技术实施例1中靶向递送分子的合成路线图。
[0024]图3为本专利技术中靶向递送粒子合成过程示意图。
[0025]图4为本专利技术中实施例2和实施例3得到的靶向递送分子的核磁谱图。
[0026]图5为本专利技术实施例4中得到的靶向递送粒子的应用过程。
[0027]图6为本专利技术实施例4中得到的靶向递送粒子与软骨细胞共培养后，荧光显微图。
[0028]图中：1
‑
脂质双分子层，2
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靶向递送分子，3
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软骨细胞归巢肽CAP修饰的外泌体，4
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软骨细胞，5
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软骨细胞膜上的CAP多肽结合位点。
具体实施方式
[0029]下面结合附图和具体实施例对本专利技术做进一步说明。
[0030]一种靶向递送分子的制备方法，包括以下步骤：
[0031]步骤1：向含马来酰胺基团和疏水基团的聚乙二醇分子A溶液中滴加含巯基的多肽靶向因子B溶液，搅拌充分反应；其中A和B的物质的量比为1:1；
[0032]多肽靶向因子为与关节软骨或骨关节炎疾病相关的多肽；包括软骨细胞归巢肽(CAP
‑
C，序列：DWRVIIPRPSA
‑
C)、Ⅱ型胶原靶向肽(序列：WYRGRL
‑
C)中的一种或两种以任意比例构成的混合物。多肽靶向因子也可以选择其他类型的多肽。
[0033]含马来酰胺基团和疏水基团的聚乙二醇的分子量为500～5000，疏水基团可以是油酰基，胆固醇等。
[0034]A溶液中含马来酰胺基团和疏水基团的聚乙二醇分子和溶剂的比例为1～2mg：0.4～0.6mL。将聚乙二醇分子加入溶剂，室温下振荡溶解，得到含马来酰胺基团和疏水基团的聚乙二醇分子溶液。B溶液中含巯基的多肽靶向因子和溶剂的比例为1～2mg：0.1～0.2mL。向靶向多肽因子中加入溶剂，轻微振荡即可溶解，得到含巯基的多肽溶液。
[0035]滴加完成后，室温搅拌反应2～6小时。溶剂为二甲基亚砜、三氯甲烷、N,N
‑
二甲基甲酰胺和磷酸缓冲盐溶液中的一种。
[0036]步骤2：将步骤1反应得到的溶液透析、冷冻干燥即可得到所需靶向递送分子。
[0037]含马来酰胺基团和疏水基团的聚乙二醇分子和含巯基的多肽靶向因子采用的是现有的制备方法得到，也可以直接买现成的产品。
[0038]含巯基的多肽靶向因子基团的取代度为50％～99％，含马来酰胺基团和疏水基团的聚乙二醇分子中疏水基团的取代度为99％。
[0039]含巯基的多肽靶向因子基团的制备方法可以按照以下方法制备，当然不限于下述方法，可以采用其他现有的方法制备。
[0040]1)根据多肽序列选择树脂，确定树脂用量(树脂以5g为例进行说明)；称取5g树脂放到反应柱中，先用约50mL二氯甲烷浸泡1分钟，抽干。加20％六氢吡啶DMF溶液约50mL，室温下氮气鼓动15分钟。然后抽干，用DMF洗树脂9次，抽干。
[0041]2)根据多肽序列加Fmoc
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Ala
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OH及缩合剂TBTU。根据树脂的重量及取代度计算出K值。
[0042]K本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向递送分子的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：向含马来酰胺基团和疏水基团的聚乙二醇分子A溶液中滴加含巯基的多肽靶向因子B溶液，搅拌充分反应；其中A和B的物质的量比为1:1；步骤2：将步骤1反应得到的溶液透析、冷冻干燥即可得到所需靶向递送分子。2.根据权利要求1所述的一种靶向递送分子的制备方法，其特征在于，所述多肽靶向因子为与关节软骨或骨关节炎疾病相关的多肽。3.根据权利要求2所述的一种靶向递送分子的制备方法，其特征在于，所述多肽靶向因子包括软骨细胞归巢肽、Ⅱ型胶原靶向肽中的一种或两种以任意比例构成的混合物。4.根据权利要求1所述的一种靶向递送分子的制备方法，其特征在于，所述步骤1中的反应时间为2～6小时。5.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：樊渝江，曹洪芙，王启光，陈曼雨，刘宇涵，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：