一种犬瘟热、犬细小、犬腺病毒、犬副流感四联活疫苗耐热保护剂及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种犬瘟热、犬细小、犬腺病毒、犬副流感四联活疫苗耐热保护剂及其制备方法和应用，属于生物医药领域中活疫苗耐热保护剂技术领域。提供的耐热保护剂包含7％～10％的蔗糖、3％～4％的明胶、8％～10.0％的海藻糖、6％～8％的蛋白胨、2％～4％的甘氨酸和4％～6％的PEG，其成分简单、原料易得、制备方法简单，在配制犬瘟热、犬细小、犬腺病毒、犬副流感四联活疫苗时可以有效降低冷冻干燥过程中各病毒抗原的损失，可确保犬瘟热、犬细小、犬腺病毒、犬副流感四联活疫苗的免疫效力和长期稳定保存。保存。保存。

【技术实现步骤摘要】
一种犬瘟热、犬细小、犬腺病毒、犬副流感四联活疫苗耐热保护剂及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域中活疫苗耐热保护剂
，具体涉及一种犬瘟热、犬细小、犬腺病毒、犬副流感四联活疫苗耐热保护剂及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]犬瘟热是由犬瘟热病毒(Canine Distempervirus，CDV)引起的一种高度接触性传染病，传染性强，死亡率可高达80％以上。犬瘟热症状初期狗的体温高达39.5-41℃，食欲不振，精神沉郁，眼鼻流出水样分泌物，打喷嚏，有腹泻。在以后2-14天内达到犬瘟热中期，再次出现体温升高，咳嗽，有脓性鼻涕、脓性眼屎症状。同时继发胃肠道疾病，呕吐、拉稀，食欲废绝。精神高度沉郁，嗜睡。犬瘟热发病后期就会出现典型的神经症状，如口吐白沫，抽搐等。
[0003]犬细小病毒(Canine Parvovirus，CPV)属细小病毒科，细小病毒属。CPV对多种理化因素和常用消毒剂具有较强的抵抗力，其主要感染犬，尤其幼犬，传染性极强，死亡率也高。一年四季均可发病，以冬，春多发。饲养管理条件骤变，长途运输，寒冷，拥挤均可促使犬细小病毒病发生。病犬是主要传染源，呕吐物，唾液，粪便中均有大量病毒。康复犬仍可长期通过粪便向外排毒(最长可持续半年)。有证据表明人，虱，苍蝇和蟑螂可成为CPV的机械携带者。健康犬与病犬或带毒犬直接接触，或经污染的饲料和饮水通过消化道感染。
[0004]犬腺状病毒(Canine Adenovirus，CAV)是哺乳动物腺病毒属中致病性最强的一种病毒。有两个血清型I型和II型，其中I型既可引起犬传染性肝炎(以肝小叶中心坏死，肝实质细胞和皮质细胞核内出现包涵体和出血时间长为特征的急性败血性传染病)，还可引起狐狸脑炎，故又称狐狸脑炎与犬传染性肝炎病。II型可引起犬传染性喉气管炎和肠炎。犬腺状病毒病不仅流行于家养的犬、狐中，而且广泛地流行于野生的狐、熊、郊狼和浣熊等动物中。本病一年四季均可发生，各种性别、年龄和品种的犬、狐均易感染，但其中以离乳至一岁的动物发病率和死亡率最高。病程较犬瘟热短，大约在2周内恢复或死亡，有时在数日内死亡。如与犬瘟热混合感染，则死亡率更高。患病犬及带毒犬是本病传染来源，主要通过消化道感染，也可通过胎盘传染。
[0005]犬副流感是犬副流感病毒(Canine parainfluenza virus，CPIV)感染犬的主要的呼吸道传染病。临床表现发热、咳嗽、流涕等症状，病理变化以卡他性鼻炎和支气管炎为特征。犬副流感病毒在分类上属副粘病毒科中n型副流感病毒亚型，可在原代和传代犬肾、猴肾细胞培养物中良好增殖，也可在鸡胚、羊膜腔中增殖。犬副流感病毒可感染各种年龄和品种的犬，但以幼犬较重。感染途径主要是呼吸道分泌液通过空气尘埃感染其他犬，也可通过直接接触传染。感染期间犬因抵抗力降低可继发其他细菌感染。该病是犬主要的呼吸道传染病，临床症状为突然爆发、发热、大量黏液性、不透明鼻分泌物和咳嗽，病犬疲软无力。当与支原体或支气管败血波氏杆菌混合感染时，病情加重，体温升高至40℃以上。单纯的犬副流感病毒感染常可在3～7天自然康复，继发感染咳嗽可持续数周，甚至死亡。有些幼犬感染
后可表现后躯麻痹和运动失调等症状，病犬后肢可支撑躯体，但不能行走。
[0006]我国宠物疫苗接种率最高的疫苗种类为狂犬疫苗，根据2019年宠物行业白皮书显示，狂犬疫苗接种占比47.2％，并且已形成较成熟的疫苗消费习惯，85.7％的宠物主会定期为宠物接种疫苗。在预防胜过治疗的保健观念下，人们对疫苗产品的可支付意愿提升，宠物疫苗渗透率快速提升，从而进一步打开宠物疫苗市场规模。宠物市场对于宠物用品的需求日益剧增，其中健康问题尤为重要。在七八十年代，对于给宠物打疫苗的意识还比较薄弱，如今几乎大多数养宠物的人都有给宠物打疫苗的意识，在如今年轻一代消费观念的改变，也是养宠物最多的，对于如此大的宠物市场，疫苗也可谓供不应求。
[0007]目前对CDV、CPV、CAV和CPIV引起的犬传染病的处置策略主要是通过宠物疫苗预防和控制，例如现有犬用宠物疫苗包括犬五联(犬狂犬、犬瘟热、犬细小病毒、犬腺病毒2型、犬副流感)活疫苗(CN1137347A)；犬瘟热、细小病毒病二联活疫苗(CN106399260A)；犬瘟热、犬细小病毒和犬腺病毒I型三联活疫苗(CN101905021A)等。然而，目前市面上大多数犬用弱毒活疫苗产品为常规保护剂活疫苗，其保护剂的主要成分为脱脂牛奶、蔗糖、明胶等(例如CN101905021A或CN104208669A等)，或者保护剂的主要成分为蔗糖、明胶、海藻糖、甘露醇、精氨酸等(例如CN106399260A)，这些保护剂的耐热保护效果较差，导致病毒抗原对温度敏感，如果在2～8℃条件下，保存期较短(例如仅为12个月)或者37℃条件下长时间(例如7天)保存后病毒滴度下降较多(例如超过101TCID
50
/ml)，因此这类疫苗需要在低温条件下(例如-15℃以下)保存，并且疫苗稀释后，需尽快使用，否则易受热环境影响而降低疫苗效价。另外，由于此类活疫苗对环境温度比较敏感，因此对保存条件要求较高，在疫苗生产、运输以及使用过程中，如果耐热保护剂保护效果不佳，疫苗保存环境温度升高，就会导致疫苗效力下降或失效，造成免疫失败等问题。

技术实现思路

[0008]针对现有技术中存在的问题的一个或多个，本专利技术的一个方面提供一种犬瘟热、犬细小、犬腺病毒、犬副流感四联活疫苗耐热保护剂，其包含以下质量体积百分比含量的组分：
[0009][0010][0011]其余为：注射用水。
[0012]上述耐热保护剂包含以下质量体积百分比含量组分：
[0013][0014]其余为：注射用水。
[0015]本专利技术另一方面提供了上述耐热保护剂的制备方法，其包括以下步骤：
[0016]S1)第一溶液配制：按照上述的耐热保护剂的成分含量将所需量的明胶溶于注射用水中得到第一溶解液，向其中加入所需量的蔗糖和海藻糖至完全溶解，得到第二溶解液，随后向其中加入所需量的无水磷酸氢二钠、无水磷酸二氢钾、氯化钾、氯化钠至完全溶解，获得第一溶液；
[0017]S2)第二溶液配制：按照上述的耐热保护剂的成分含量将所需量的甘氨酸溶于注射用水中得到第三溶解液，向其中加入所需量的PEG至完全溶解得到第四溶解液，随后向其中加入所需量的蛋白胨至完全溶解，得到第二溶液；
[0018]S3)将第一溶液和第二溶液混合后定容，灭菌，获得所述耐热保护剂。
[0019]本专利技术又一方面提供一种犬瘟热、犬细小、犬腺病毒、犬副流感四联活疫苗，其由犬瘟热、犬细小、犬腺病毒、犬副流感病毒毒液和上述的耐热保护剂配制而成。
[0020]每头份上述四联活疫苗中犬瘟热病毒含量≥10
4.0
TCID
50
/ml，犬细小病毒含量≥10
4.0
FAID
50
/ml，犬腺病毒病毒含量≥10
5.5
TCID
50本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种犬瘟热、犬细小、犬腺病毒、犬副流感四联活疫苗耐热保护剂，其特征在于，所述耐热保护剂包含以下质量体积百分比含量的组分：2.根据权利要求1所述的耐热保护剂，其特征在于，所述耐热保护剂包含以下质量体积百分比含量组分：3.权利要求1或2所述的耐热保护剂的制备方法，其包括以下步骤：S1)第一溶液配制：按照权利要求1或2所述的耐热保护剂的成分含量将所需量的明胶溶于注射用水中得到第一溶解液，向其中加入所需量的蔗糖和海藻糖至完全溶解，得到第二溶解液，随后向其中加入所需量的无水磷酸氢二钠、无水磷酸二氢钾、氯化钾、氯化钠至完全溶解，获得第一溶液；S2)第二溶液配制：按照权利要求1或2所述的耐热保护剂的成分含量将所需量的甘氨酸溶于注射用水中得到第三溶解液，向其中加入所需量的PEG至完全溶解得到第四溶解液，
随后向其中加入所需量的蛋白胨至完全溶解，得到第二溶液；S3)将第一溶液和第二溶液混合后定容，灭菌，获得所述耐热保护剂。4.一种犬瘟热、犬细小、犬腺病毒、犬副流感四联活疫苗，其由犬瘟热、犬细小、犬腺病毒、犬副流感病毒毒液和权利要求1或2所述的耐热保护剂配制而成。5.根据权利要求4所述的犬瘟热、犬细小、犬腺病毒、犬副流感四联活疫苗，其特征在于，每头份所述四联活疫苗中犬瘟热病毒含量≥10
4.0
TCID
50
/ml，犬细小病毒含量≥10
4.0
FAID
50
/ml，犬腺病毒病毒含量≥10
5.5
TCID
50
/ml，犬副流感病毒含量≥10
5.5
FAID
50
/ml。6.权利要求4或5所述的犬瘟热、犬细小、犬腺病毒、犬副流感四联活疫苗的配制方法，其包括以下步骤：T1)将混合的犬瘟热、犬细小、犬腺病毒、犬副流感病毒毒液与权利要求1或2所述的耐热保护剂混匀，得到疫苗原液；T2)将步骤T1)的疫苗原液冷冻干燥，获得所述犬瘟热、犬细小、犬腺病毒、犬副流感四联活疫苗。7.根据权利要求6所述的配制方法，其特征在于，步骤T1)中所述混合的犬瘟热、犬细小、犬腺病毒、犬副流感病毒毒液通过以下方式获得：按冻干后四联活疫苗的每头份中犬瘟热病毒...

【专利技术属性】
技术研发人员：李超，宋庆庆，赵丽霞，陈坚，郝鹏，王岩，张燕红，孔彩平，朱旭，王艳杰，王玉雯，田志辉，杨青春，贺瑶，俎红丽，李晓艳，李志朋，宋志刚，吉格木德，王秉昆，胡莉红，赵冰婕，
申请(专利权)人：金宇保灵生物药品有限公司，
类型：发明
国别省市：