一种C端修饰肿瘤穿透肽RGERPPR的铁蛋白纳米粒子、其制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种C端修饰肿瘤穿透肽RGERPPR的铁蛋白纳米粒子、其制备方法及应用。C端修饰肿瘤穿透肽RGERPPR的铁蛋白纳米粒子，通过连接序列将肿瘤穿透肽RGERPPR与铁蛋白C末端连接，肿瘤穿透肽RGERPPR暴露于铁蛋白的外部。本发明专利技术C端修饰肿瘤穿透肽RGERPPR的铁蛋白纳米粒子，具有较强的靶向能力和细胞穿透力，能够与肿瘤细胞有很强的结合，所制得的抗肿瘤药物有着很强的细胞毒性，为后续药物靶向肿瘤细胞治疗提供了非常好的载体模型，具有很好的应用前景。好的应用前景。好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种C端修饰肿瘤穿透肽RGERPPR的铁蛋白纳米粒子、其制备方法及应用


[0001]本专利技术涉及一种C端修饰肿瘤穿透肽RGERPPR的铁蛋白纳米粒子、其制备方法及应用，属于抗肿瘤


技术介绍

[0002]蛋白质笼具有良好的稳定性、生物相容性和生物降解性，已广泛应用于药物传递和疫苗开发。其中，铁蛋白是由24个蛋白亚基自组装形成纳米中空笼状结构，该纳米笼水溶性好、生物相容性强，体内稳定性佳，尺寸均一，且该铁蛋白本身具有靶向性，可与肿瘤细胞中过量表达的转铁蛋白受体1(TfR1)特异性结合。虽然铁蛋白固有的肿瘤靶向能力使其成为一种简单的药物传递载体，但它并不局限于仅靶向于天然受体TfR1，而且可以随时修改附加的靶向基元，用于多种用途。
[0003]有大量研究表明，肿瘤细胞和肿瘤血管内皮细胞表面的神经纤毛蛋白1(Neuropilin-1， NRP-1)表达量过高，利用NRP-1作为靶标介导纳米递药系统对肿瘤进行靶向治疗已经被开展。表面修饰肿瘤穿透肽RGERPPR的纳米粒子，能够与肿瘤细胞过量表达的NRP-1 特异性结合，还可与其肿瘤新生本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种C端修饰肿瘤穿透肽RGERPPR的铁蛋白纳米粒子，其特征在于：通过连接序列将肿瘤穿透肽RGERPPR与铁蛋白C末端连接，肿瘤穿透肽RGERPPR暴露于铁蛋白的外部。2.如权利要求1所述的C端修饰肿瘤穿透肽RGERPPR的铁蛋白纳米粒子，其特征在于：在连接序列中加入MMP-2酶切位点或突变MMP-2酶切位点序列，分别得到HFtn-MMP2-RGE和HFtn-mMMP2-RGE，其中，MMP2表示能够被MMP-2酶切的位点，序列为PLGLAG；mMMP2表示被突变的MMP-2酶切位点，突变后序列为ALGAAG；HFtn为由24个铁蛋白亚基组成的纳米蛋白笼。3.如权利要求2所述的C端修饰肿瘤穿透肽RGERPPR的铁蛋白纳米粒子，其特征在于：C端修饰肿瘤穿透肽RGERPPR的含MMP-2酶切位点的铁蛋白编码基因为SEQ ID No.1；C端修饰肿瘤穿透肽RGERPPR的含突变MMP-2酶切位点的铁蛋白编码基因为SEQ ID No.2；C端修饰肿瘤穿透肽RGERPPR的编码蛋白为SEQ ID No.3。4.如权利要求1-3任意一项所述的C端修饰肿瘤穿透肽RGERPPR的铁蛋白纳米粒子，其特征在于：铁蛋白为人重链铁蛋白。5.权利要求1-4任意一项所述的C端修饰肿瘤穿透肽RGERPPR的铁蛋白纳米粒子的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)重组铁蛋白表达工程菌的构建：以HFtn编码基因为基础，在其3'端通过连接序列将肿瘤穿透肽RGERPPR与铁蛋白C末端连接，在连接序列中插入MMP-2酶切位点并克隆至质粒载体中，得到HFtn-MMP2-RGE质粒；将连接序列中插入突变MMP-2酶切位点并克隆至质粒载体中，得到HFtn-mMMP2-RGE质粒；将两种质粒分别转化至大肠杆菌感受态细胞，通过氨苄青霉素抗性筛选阳性单克隆转化子，以获得目的重组铁蛋白表达工程菌；(2)重组铁蛋白的表达纯化：将表达目的重组铁蛋白表达工程菌以1
±
0.02％的接种比例接种于含有氨苄青霉素的培养基中，待菌液OD600值达到0.6-0.8时，加入IPTG诱导表达，离心收集沉淀，然后超声破碎沉淀，离心收集上清，再将上清水浴加热，再次离心，通过体积排阻色谱对目的重组铁蛋白进行多次纯化，得到目的重组铁蛋白HFtn-MMP2-RGE和HFtn-mMMP2-RGE。6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，在连接序列中插入MMP-2酶切位点的编码基因为SEQ ID No.4：GGTGGTGGTGGTA...

【专利技术属性】
技术研发人员：张瑜，马原蒙，王飞，李迅，董亦馨，
申请(专利权)人：南京林业大学，
类型：发明
国别省市：