本发明专利技术涉及生物技术领域，尤其涉及SUCLG1基因作为肿瘤标志物的应用、检测试剂。本发明专利技术提供了SUCLG1基因作为标志物在制备肾癌检测试剂中的应用。本发明专利技术经研究发现，过表达SUCLG1基因可有效地抑制肾癌细胞的增殖、肾癌细胞的迁移、侵袭，通过检测样本中SUCLG1基因的表达水平，可以准确的判断个体是否患有肾癌或评估肾癌患病风险，首次发现并验证了SUCLG1基因表达水平与肾癌发病之间的联系。基因表达水平与肾癌发病之间的联系。
【技术实现步骤摘要】
SUCLG1基因或其表达产物的应用、检测试剂盒
[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及SUCLG1基因或其表达产物的应用检测试剂盒。
技术介绍
[0002]肾癌是世界上最常见的泌尿系统肿瘤之一。肾癌在世界范围内呈逐年上升趋势，年发病率为2％。统计结果表明，发达国家肾癌的发病率高于落后国家。男性肾癌的发病率约为女性的1.58倍。我国肾癌的发病率相对较低，但近年来肾癌发病率呈快速上升趋势。2019年，美国估计有73820个新病例，其中14770人死于肾癌。我国肾癌的发病率和死亡率也呈上升趋势。2015年，估计新病例为66800，死亡人数为23,400。根据世界卫生组织的预测，肾细胞癌预后不良，全世界每年的死亡人数约为9万人。
[0003]早期肾癌往往不会引起明显的临床症状，一旦出现症状，往往已处于晚期。然而，由于缺乏针对肾癌的特异性肿瘤标志物，其早期诊断仍依赖于诸如b超、CT和MRI等成像方法。肾癌的治疗仍以手术为主，虽然切除肿瘤的恶性增殖是一个很好的选择，但目前的结果仍不令人满意。目前，肾细胞癌发生、发展和转移的具体机制尚不清楚。肿瘤标志物与肿瘤的发生发展密切相关。寻找肿瘤恶性增殖的关键、有效和广谱的靶点仍是临床急需解决的难题。肿瘤的侵袭和转移是一个复杂的过程，通常需要缺氧、能量代谢、血管生成、免疫逃逸等环节，以及细胞微环境重塑、细胞骨架重建、细胞粘附变化、细胞外基质降解等变化。因此，肿瘤细胞侵袭和转移相关标志物的研究有助于肿瘤相关基因的功能鉴定。
[0004]随着分子生物学技术的发展，探寻与疾病相关的基因已成为当前抗肿瘤靶点研究的有效途径。相关基因标志物的发现不仅有助于肾癌患者的预后评估，同时也有助于临床上对肾癌的诊断、术后局部复发或远处转移的预测、也有望成为分子靶向药物研发的靶点，也为肾细胞癌的靶向治疗提供新思路。
技术实现思路
[0005]有鉴于此，本专利技术提供了SUCLG1基因或其表达产物在肿瘤检测中的应用。
[0006]本专利技术通过实时荧光定量PCR比较了SUCLG1基因在不同肾癌细胞系中的表达，结果显示，与正常的肾癌细胞系293T相比，SUCLG1在OSRC
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2、A498、786
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O、Caki
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1、ACHN、769
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P细胞系中的表达显著降低。通过蛋白印迹试验，比较了SUCLG1在癌旁组织和肾癌组织样本中的表达情况，结果显示，与癌旁组织相比，肾癌组织中SUCLG1的基因表达水平显著降低。
[0007]基于以上结果，本专利技术提供了SUCLG1基因或其表达产物作为标志物在制备肿瘤检测试剂盒中的应用；本专利技术还提供SUCLG1基因或其表达产物在制备肿瘤标志物中的应用；本专利技术还提供了检测SUCLG1基因的引物或检测SUCLG1基因表达产物的抗体在制备肿瘤检测试剂盒中的应用。
[0008]本专利技术中，所述SUCLG1基因可以是编码SUCLG1的DNA，也可以是编码SUCLG1的RNA。
[0009]一些实施方案中，SUCLG1基因的序列号为NM_003849.4。SUCLG1基因表达产物为
SUCLG1蛋白，其NCBI ID号为NP_003840.2。
[0010]一些实施方案中，所述肿瘤为肾癌。
[0011]本专利技术还提供一种肿瘤检测试剂盒，该试剂盒以SUCLG1基因或其表达产物为靶点，包括DNA提取试剂盒、检测SUCLG1基因的试剂、检测SUCLG1基因表达产物的试剂。
[0012]一些实施方案中，所述检测SUCLG1基因的试剂包括SUCLG1基因检测引物；所述检测SUCLG1基因表达产物的试剂包括SUCLG1基因表达产物的抗体。
[0013]一些具体实施例中，所述SUCLG1基因检测引物包括SEQ ID NO:1所示的上游引物和SEQ ID NO:2所示的下游引物。
[0014]forward 5'
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GAGCAACGGCTTCTGTCATTT
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3'(SEQ ID NO:1)；
[0015]reverse 5'
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TGCTTGACTCGTACCATGTCC
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3'(SEQ ID NO:2)。
[0016]本专利技术通过细胞增殖试验、划痕实验和transwell实验证明，在OSRC和A498细胞系中过表达SUCLG1之后，细胞的增殖、迁移和侵袭明显受到抑制。基于该结果，本专利技术还提供了SUCLG1激动剂在制备预防或治疗肾癌的药物中的应用。
[0017]其中，所述SUCLG1激动剂为上调SUCLG1基因转录水平或表达水平的DNA、RNA或蛋白。
[0018]具体地，所述治疗为抑制肾癌细胞增殖和/或抑制肾癌细胞迁、侵袭。
[0019]一些实施方案中，所述肾癌细胞为OSRC
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2、A498、786
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D、Caki
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1、ACHN、769
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P中的至少一种细胞系。
[0020]由以上方案可知，本专利技术提供了SUCLG1的新应用，具体为SUCLG1基因或其表达产物、激动剂的应用。本专利技术通过实时荧光定量PCR和蛋白印迹试验证实，与正常的肾癌细胞系293T相比，SUCLG1在肾癌细胞系OSRC
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2、A498、786
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O、Caki
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1、ACHN、769
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P中的表达显著降低。与癌旁组织相比，肾癌组织中SUCLG1的基因表达水平显著降低。进一步通过细胞增殖试验、划痕实验和transwell实验发现，过表达SUCLG1基因可有效地抑制肾癌细胞的增殖、肾癌细胞的迁移、侵袭。本专利技术首次发现并验证了SUCLG1基因表达水平与肾癌发病之间的联系，SUCLG1基因或其表达产物可作为标志物准确的判断个体是否患有肾癌或评估肾癌患病风险。
附图说明
[0021]图1示SUCLG1在不同肾癌细胞系中的表达；
[0022]图2示SUCLG1 mRNA在肾癌组织中的表达；
[0023]图3示免疫蛋白印迹法检测SUCLG1蛋白在肾癌组织中的表达；
[0024]图4示过表达SUCLG1对肾癌细胞增殖的曲线图；
[0025]图5示edu增殖试验检测过表达SUCLG1对肾癌细胞细胞增殖的影响
[0026]图6示transwell实验检测过表达SUCLG1对肾癌细胞迁移的影响；
[0027]图7示transwell实验检测过表达SUCLG1对肾癌细胞侵袭的影响；
[0028]图8示划痕实验检测过表达SUCLG1对肾癌细胞迁移的影响。
具体实施方式
[0029]本专利技术提供了SUCLG1基因或其表达产物的应用检测试剂盒。本领域技术人员可以
借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.SUCLG1基因或其表达产物作为标志物在制备肿瘤检测试剂盒中的应用。2.SUCLG1基因或其表达产物在制备肿瘤标志物中的应用。3.检测SUCLG1基因的引物或检测SUCLG1基因表达产物的抗体在制备肿瘤检测试剂盒中的应用。4.根据权利要求1～3任一项所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为肾癌。5.肿瘤检测试剂盒，其特征在于，包括DNA提取试剂盒、检测SUCLG1基因的试剂、检测SUCLG1基因表达产物的试剂；所述检测SUCLG1基因的试剂包括SUCLG1基因检测引物；所述检测SUCLG1基因表达产物的试剂包括SUCLG1基因表达产物的抗体。6.根据权利要求5所述的肿瘤检测试剂盒，其特征在于，所述SUCLG1基因检测引物包括...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈业达，陈应坚，梁碧玉，何伟明，王杰燕，
申请(专利权)人：深圳市龙华区人民医院，
类型：发明
国别省市：
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