一种人呼吸道病毒核酸多重检测引物、探针及试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种人呼吸道病毒核酸多重检测引物、探针及试剂盒，引物及探针包括针对COVID‑19 ORF 1ab、COVID‑19 N、H1N1、FluA、FluB、RNase P基因的特异性引物及探针；试剂盒包括核酸扩增反应液、One step预混液、阳性对照品、空白对照品，核酸扩增反应液含有针对COVID‑19 ORF 1ab、COVID‑19 N、H1N1、FluA、FluB和RNase P基因的特异性引物及探针溶液。本发明专利技术的人呼吸道病毒核酸多重检测的引物、探针及试剂盒，可同时快速检测甲型流感病毒、乙型流感病毒、甲型H1N1病毒、新型冠状病毒，操作简单，重复性好，成本低廉，适于推广使用。

【技术实现步骤摘要】
一种人呼吸道病毒核酸多重检测引物、探针及试剂盒
本专利技术涉及生物检测
，具体来说，涉及一种多重实时荧光PCR法检测人呼吸道病毒的引物、探针及试剂盒。
技术介绍
呼吸道病原体感染人鼻腔、咽喉、气管和支气管等系统易引起炎症造成呼吸道感染(respiratorytractinfection，RTI)。呼吸道感染可由多种病原体引起，包括病毒、细菌、支原体、衣原体和霉菌等，其中约80％是由病毒感染引起，最常见的包括流感病毒(influenzavirus，Flu)、副流感病毒(humanparainfluenzaVirus，PIV)、呼吸道合胞病毒(respiratorysyncytialvirus，RSV)、腺病毒(adenovirus，ADV)等。呼吸道感染是导致全球范围内所有年龄人群门诊就诊和住院的主要原因，且是5岁以下儿童死亡的第二大原因。流感病毒可以分为甲型流感病毒、乙型流感病毒、丙型流感病毒及丁型流感病毒4类。(1)甲型流感病毒是引起流行性感冒大流行的最主要病原体。甲型流感病毒表面蛋白HA有16个亚型，NA有9个亚型，病毒可根据HA和NA的组合情况进一步分类为若干亚型。由于HA和NA抗原结构能通过基因位点的突变或基因重组使病毒变异，因此甲型流感病毒属中的禽流感病毒(avianinfluenzavirus，AIV)能够突破种属屏障感染人类，目前能够感染人类的AIV有：H5N1、H5N6、H6N1、H7N7、H7N9等亚型。AIV曾暴发式大流行，涉及多个国家和地区。(2)乙型流感病毒。该病毒多在小范围内流行传播，目前无亚型之分，引起人类感染的主要是乙型Yamagata系或乙型Victoria系。亚太地区的15个国家在每个月的流行性感冒确诊病例中，乙型流感病毒的确诊率为0～92％，与甲型流感病毒不同，儿童、老年人等特定人群易感乙型流感病毒，并易引发并发症，对社会造成的负担甚至超过甲型流感病毒。(3)丙型流感病毒。该病毒检出率较低，通常导致轻度感染，对公共卫生和健康影响较小。(4)丁型流感病毒。该病毒是最近几年才被发现的，主要感染牛、羊、猪等。冠状病毒于1937年首次从禽类分离，是一种具有包膜的单股正链RNA病毒，直径约80～200nm，包膜上有棘突，是已知最大的RNA病毒。冠状病毒分为α、β、γ、δ4组，其中β冠状病毒又分A、B、C、D4个亚组。目前发现能感染人的冠状病毒主要为α、β两大组。由于不同呼吸道病原体感染导致的临床表现相似，仅从临床表现还不足够区分感染病原体，因此灵敏、快速和准确的检测呼吸道病原体对其感染的诊断和治疗十分重要。多重实时荧光定量PCR(multiplexrealtimePCR，mRT-qPCR)通过在反应体系加入荧光染料或荧光标记的特异性探针，能够实现闭管实时反应，避免交叉污染，一个反应体系可同时检测多个感染病原体，已广泛应用于呼吸道病原体的检测。mRT-qPCR因其高特异性、高灵敏性、快速等优点具有很好的临床诊断应用价值，因此成为疾病预防控制系统和临床检验系统病原检测的重要手段及标准之一。
技术实现思路
针对相关技术中的上述技术问题，本专利技术提出一种人呼吸道病毒核酸多重检测引物、探针及试剂盒，能够克服现有技术的上述不足。为实现上述技术目的，本专利技术的技术方案是这样实现的：一种人呼吸道病毒核酸多重检测引物及探针，包括针对COVID-19ORF1ab、COVID-19N、H1N1、FluA、FluB和RNaseP基因的特异性引物及探针；COVID-19ORF1ab基因的正向引物、反向引物和探针序列分别为：ORF1ab-F：5'-CCCTGTGGGTTTTACACTTAA，如SEQIDNO.1所示，ORF1ab-R：5'-TGCATCAGCTGACTGAAGCAT，如SEQIDNO.2所示，ORF1ab-P：5'-FAM-CCGTCTGCGGTATGTGGAAAGGTTATGG-3'-BHQ1，如SEQIDNO.3所示；COVID-19N基因的正向引物、反向引物和探针序列分别为：N-F：5'-GGGGAACTTCTCCTGCTAGAAT-3'，如SEQIDNO.4所示，N-R：5'-CAGACATTTTGCTCTCAAGCTG-3'，如SEQIDNO.5所示，N-P：5'-CY5-TTGCTGCTGCTTGACAGATT-3'-BHQ3，如SEQIDNO.6所示；H1N1基因的正向引物、反向引物和探针序列分别为：H1N1-F：5'-GATGGTAGATGGATGGTACGGTTAT-3'，如SEQIDNO.7所示，H1N1-R：5'-TTGTTAGTAATCTCGTCAATGGCATT-3'，如SEQIDNO.8所示，H1N1-P：5'-NED-TATGCAGCCGACCTGAAGAGCACACA-3'-QSY，如SEQIDNO.9所示；FluA基因的正向引物、反向引物和探针序列分别为：FluA-F：5'-GACCRATCCTGTCACCTCTGAC-3'，如SEQIDNO.10所示，FluA-R：5'-AGGGCATTYTGGACAAAKCGTCTA-3'，如SEQIDNO.11所示，FluA-P：5'-ROX-TGCAGTCCTCGCTCACTGGGCACG-3'-BHQ1，如SEQIDNO.12所示；FluB基因的正向引物、反向引物和探针序列分别为：FluB-F：5'-TCCTCAACTCACTCTTCGAGCG-3'，如SEQIDNO.13所示，FluB-R：5'-CGGTGCTCTTGACCAAATTGG-3'，如SEQIDNO.14所示，FluB-P：5'-ROX-CCAATTCGAGCAGCTGAAACTGCGGTG-3'-BHQ3，如SEQIDNO.15所示；RNaseP基因的正向引物、反向引物和探针序列分别为：RNaseP-F：5'-AGATTTGGACCTGCGAGCG-3'，如SEQIDNO.16所示，RNaseP-R：5'-GAGCGGCTGTCTCCACAAGT-3'，如SEQIDNO.17所示，RNaseP-P：5'-VIC-TTCTGACCTGAAGGCTCTGCGCG-3'-BHQ1，如SEQIDNO.18所示。根据本专利技术的另一方面，提供了一种人呼吸道病毒核酸多重检测试剂盒，包括：核酸扩增反应液、Onestep预混液、阳性对照品、空白对照品；所述核酸扩增反应液含有针对COVID-19ORF1ab、COVID-19N、H1N1、FluA、FluB和RNaseP基因的特异性引物及探针溶液，COVID-19ORF1ab基因的正向引物、反向引物和探针序列分别如SEQIDNO.1、SEQIDNO.2、SEQIDNO.3所示；COVID-19N基因的正向引物、反向引物和探针序列分别如SEQIDNO.4、SEQIDNO.5、SEQ本文档来自技高网...

【技术保护点】
1. 一种人呼吸道病毒核酸多重检测引物及探针，其特征在于，包括针对COVID-19 ORF1ab、COVID-19 N、H1N1、FluA、FluB和RNase P基因的特异性引物及探针；/nCOVID-19 ORF 1ab基因的正向引物、反向引物和探针序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ IDNO.2、SEQ ID NO.3所示；/nCOVID-19 N基因的正向引物、反向引物和探针序列分别如SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6所示；/nH1N1基因的正向引物、反向引物和探针序列分别如SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ IDNO.9所示；/nFluA基因的正向引物、反向引物和探针序列分别如SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQID NO.12所示；/nFluB基因的正向引物、反向引物和探针序列分别如SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.14、SEQID NO.15所示；/nRNase P基因的正向引物、反向引物和探针序列分别如SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.17、SEQ ID NO.18所示。/n...

【技术特征摘要】
1.一种人呼吸道病毒核酸多重检测引物及探针，其特征在于，包括针对COVID-19ORF1ab、COVID-19N、H1N1、FluA、FluB和RNaseP基因的特异性引物及探针；
COVID-19ORF1ab基因的正向引物、反向引物和探针序列分别如SEQIDNO.1、SEQIDNO.2、SEQIDNO.3所示；
COVID-19N基因的正向引物、反向引物和探针序列分别如SEQIDNO.4、SEQIDNO.5、SEQIDNO.6所示；
H1N1基因的正向引物、反向引物和探针序列分别如SEQIDNO.7、SEQIDNO.8、SEQIDNO.9所示；
FluA基因的正向引物、反向引物和探针序列分别如SEQIDNO.10、SEQIDNO.11、SEQIDNO.12所示；
FluB基因的正向引物、反向引物和探针序列分别如SEQIDNO.13、SEQIDNO.14、SEQIDNO.15所示；
RNaseP基因的正向引物、反向引物和探针序列分别如SEQIDNO.16、SEQIDNO.17、SEQIDNO.18所示。


2.一种人呼吸道病毒核酸多重检测试剂盒，其特征在于，包括：核酸扩增反应液、Onestep预混液、阳性对照品、空白对照品；
所述核酸扩增反应液含有针对COVID-19ORF1ab、COVID-19N、H1N1、FluA、FluB和RNaseP基因的特异性引物及探针溶液，
COVID-19ORF1...

【专利技术属性】
技术研发人员：范欣，王倩玉，于超计，吴文立，魏星，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京朝阳医院，北京华诺奥美基因生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11