用于判断HIV-1感染者抗病毒治疗效果的lncRNA标志物及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种用于判断HIV‑1感染者抗病毒治疗效果的lncRNA标志物及其应用，所述lncRNA标志物为lncRNANRAV，所述特异性引物包括序列表SEQ.ID.NO.1和SEQ.ID.NO.2的碱基序列，和/或包括序列表SEQ.ID.NO.3和SEQ.ID.NO.4的碱基序列。本发明专利技术通过检测lncRNANRAV的表达水平来实现抗病毒治疗的效果评估，从而指导临床用药，有助于降低患者机会性感染和肿瘤发生的风险，提高患者生存率。该方法性比价高，易于推广应用。

【技术实现步骤摘要】
用于判断HIV-1感染者抗病毒治疗效果的lncRNA标志物及其应用
本专利技术属于有关艾滋病抗病毒治疗的生物医学
，本专利技术涉及一种用于判断HIV-1感染者抗病毒治疗效果的lncRNA标志物及其应用。
技术介绍
自1981年美国报道全球首例艾滋病患者后，艾滋病开始在全球迅速蔓延。截止2019年底，全球现存活HIV/AIDS感染者3800万，其中2540万人接受了抗病毒治疗。而接受抗病毒治疗的病人中出现了抗病毒治疗失败的情况，其首先表现为病毒载量的升高，接着出现CD4+T淋巴计数下降，最后出现机会性感染或肿瘤或发生耐药或原有感染的复发，导致临床治疗失败。因而，在抗病毒治疗早期定期进行病毒载量检测和CD4+T淋巴计数有助于判断疾病进程，指导临床用药，评估治疗效果和预后等。2008年后多数艾滋病治疗指南抗病毒治疗病毒抑制阈值的标准为持续病毒载量低于50拷贝/ml，指南建议每6个月检测一次。现阶段，我国对接受抗病毒治疗的病人实行每人每年免费检测一次病毒载量的策略，其余情况需病人自费。据了解，不同地区病毒载量检测的费用从几百元至上千元不等，经济问题成为了导致抗病毒治疗失败和耐药问题发生的原因之一。再者，由于HIV病毒载量检测仪的价格较为昂贵，并非每所医院都配备有该仪器设备，这将进一步降低患者检测病毒载量的几率，不利于及时评估抗病毒治疗的疗效及治疗方案的调整。长链非编码RNA(longnoncodingRNA,lncRNA)是一类转录本长度超过200nt的非编码RNA分子，多由RNA聚合酶Ⅱ转录，它本身不编码或是只编码很短的多肽链。近年来研究发现，lncRNAs可以特异性地通过多种途径或机制参与艾滋病的发生和发展。已有报道表明lncRNANRAV在甲型流感病毒感染中负向调节多个干扰素刺激基因的转录显著促进流感病毒的复制；lncRNANRAV在呼吸合胞病毒感染时也促进了病毒的复制。鉴于目前尚无可治愈艾滋病的药物，早期诊断及治疗成为艾滋病防控领域的主要手段，伴随抗病毒治疗广泛开展，抗病毒治疗失败甚至耐药问题的日益加剧，定期及时进行病毒载量检测成为临床用药的关键参考依据。为了更简便地评价lncRNANRA标志物在HIV-1感染者抗病毒治疗效果，本专利技术通过检测艾滋病患者中lncRNANRAV的异常表达情况，发现其与艾滋病临床指标存在相关性，进一步建立了抗病毒治疗效果评价模型，用于艾滋病治疗的效果评估及预后预测，有助于尽早实现艾滋病的“90-90-90”目标。
技术实现思路
本专利技术的目的主要在于提供一种诊断和判别HIV-1感染者抗病毒治疗效果的lncRNA标志物。具体地，本专利技术提供一种用于判断HIV-1感染者抗病毒治疗效果的lncRNA标志物，所述lncRNA标志物为lncRNANRAV。一种用于判断HIV-1感染者抗病毒治疗效果的lncRNA标志物的特异性引物，所述特异性引物包括序列表SEQ.ID.NO.1和SEQ.ID.NO.2的碱基序列。一种用于判断HIV-1感染者抗病毒治疗效果的lncRNA标志物的特异性引物，所述特异性引物包括序列表SEQ.ID.NO.3和SEQ.ID.NO.4的碱基序列。一种用于判断HIV-1感染者抗病毒治疗效果的lncRNA标志物的特异性引物，所述特异性引物包括引物对一和引物对二；其中，引物对一和引物对二均由上游特异序列和下游特异序列组成；所述引物对一的上游特异序列和下游特异序列分别具有序列表SEQ.ID.NO.1和SEQ.ID.NO.2的碱基序列；所述引物对二的上游特异序列和下游序列分别具有序列表SEQ.ID.NO.3和SEQ.ID.NO.4的碱基序列。一种检测HIV-1感染者抗病毒治疗效果的的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包含权利要求2-4任一项所述的用于判断HIV-1感染者抗病毒治疗效果的lncRNA标志物的特异性引物。优选地，所述的检测lncRNANRAV表达量的试剂为实时荧光定量PCR检测试剂。所述的实时荧光定量PCR检测试剂包括根据lncRNANRAV的核苷酸序列设计并合成出特异性用于实时荧光定量PCR的检测引物。所述的lncRNANRAV的检测方法包括样本RNA的提取、cDNA的制备和lncRNANRAV的扩增。上述lncRNANRAV在未治疗的HIV-1感染者中表达下调，而在其对照组健康人中表达上调。上述lncRNANRAV在抗病毒治疗失败的病人中下调，而在接受抗病毒治疗有效的病人中上调。本专利技术具有以下有益的的技术效果：(1)相较于健康人群，lncRNANRAV在未治疗的艾滋病感染患者中低表达；相较于接受抗病毒治疗有效的病人，在抗病毒治疗失败的病人中低表达。因此通过检测lncRNANRAV的表达水平，经对数转换后带入评估抗病毒治疗效果的模型公式，可以评价疗效、指导临床用药。(2)根据ROC曲线结果显示，AUC＝0.852，说明lncRNANRAV作为判断HIV-1感染者抗病毒治疗效果的准确性达85.2％。本专利技术只涉及real-timePCR检测这一常用方法，易于掌握，操作快速。(3)本专利技术的检测试剂盒可以检测接受抗病毒治疗的艾滋病患者的lncRNANRAV表达水平。同时，本专利技术建立了评估抗病毒治疗效果的Logistic回归拟合数据模型和计算公式，模型的评估效能采用ROC曲线及曲线下面积AUC分析，该模型对抗病毒治疗效果有较高的灵敏度和诊断效能，具有重要的临床意义。(4)本专利技术通过检测lncRNANRAV的表达水平来实现抗病毒治疗的效果评估，从而指导临床用药，有助于降低患者机会性感染和肿瘤发生的风险，提高患者生存率。该方法性比价高，易于推广应用。附图说明图1显示利用qPCR检测lncRNANRAV在健康人群与未治疗的艾滋病感染者之间的表达情况；图2显示利用qPCR检测lncRNANRAV在具有不同抗病毒治疗效果的病人中的表达情况；图3显示接受抗病毒治疗的艾滋病病人中lncRNANRAV在评估治疗效果上的ROC曲线。具体实施方式以下结合附图和具体实施例对上述方案做进一步说明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用到的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置两次重复实验，结果取平均值。试验材料如下：血细胞：从健康人、未治疗艾滋病患者、接受抗病毒治疗的艾滋病患者的外周血中分离出。引物合成：生工生物工程(上海)股份有限公司合成。逆转录试剂：大连宝生物工程有限公司(PrimeScriptTMRTreagentKitwithgDNAEraser(PerfectRealTime))，CatNo：RR047A定量PCR试剂：大连宝生物工程有限公司(TBPremixExTaqTMⅡ(TliRNaseHPlus))，CatNo：RR820A荧光定量PCR仪:购自美国应用生物系统公司(Appli本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种lncRNA标志物在用于判断HIV-1感染者抗病毒治疗效果的应用，其特征在于：所述lncRNA标志物为lncRNANRAV。/n

【技术特征摘要】
1.一种lncRNA标志物在用于判断HIV-1感染者抗病毒治疗效果的应用，其特征在于：所述lncRNA标志物为lncRNANRAV。


2.一种用于判断HIV-1感染者抗病毒治疗效果的lncRNA标志物的特异性引物，其特征在于：所述特异性引物包括序列表SEQ.ID.NO.1和SEQ.ID.NO.2的碱基序列。


3.一种用于判断HIV-1感染者抗病毒治疗效果的lncRNA标志物的特异性引物，其特征在于：所述特异性引物包括序列表SEQ.ID.NO.3和SEQ.ID.NO.4的碱基序列。


4.一种用于判断HIV-1感染者抗病毒治疗效果的lncRNA标志物的特异性引物，其特征在于：所述特异性引物包括引物对一...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋俊俊，梁浩，叶力，陈荣凤，陈秀，韦吴迪，袁宗祥，唐俏，文刘方，王心维，石敏娟，
申请(专利权)人：广西医科大学，
类型：发明
国别省市：广西;45