含整合素配体的细胞抑制性缀合物制造技术

本发明专利技术涉及新型药物化合物，其包含：α

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】含整合素配体的细胞抑制性缀合物本专利技术涉及新型药物化合物，其包含：αvβ3整合素拮抗剂、包含可被弹性蛋白酶切割的L-Val-L-Pro-L-Asp的连接单元、聚乙二醇(PEG)间隔物和细胞毒性元件，涉及其制备方法，涉及其在治疗、预防或管理人和其他哺乳动物中的疾病和病症(包括过度增殖性障碍，例如癌症)中的用途。癌症化疗通常伴随着严重的副作用，这是由于化疗药物对肿瘤组织以外的其他组织的增殖细胞的毒性作用所致。多年来，科学家们一直致力于提高所用活性化合物的选择性。经常采用的方法是合成前药，所述前药在靶组织中或多或少选择性地释放，例如通过改变pH(DE-A4229903)、通过酶(例如葡萄糖醛酸酶；EP-A511917和595133)或通过抗体-酶缀合物(WO88/07378；US4975278；EP-A595133)。这些方法中的显著问题是缀合物在其他组织和器官中缺乏稳定性，特别是活性化合物在肿瘤组织中的胞外释放之后的普遍活性化合物分布。20(S)-喜树碱是五环生物碱，由Wall等人于1966年分离得到(J.Am.Chem.Soc.88,3888(1966))。在众多的体内外试验中，它具有高活性的抗肿瘤潜力。然而不幸的是，由于毒性和溶解度问题，在临床研究阶段未能实现该有希望的潜力。通过E环内酯的打开和钠盐的形成，得到了水溶性化合物，所述化合物与闭环形式处于pH依赖性的平衡状态。在这方面，临床研究也尚未取得成功。约20年后，人们发现该生物活性是由拓扑异构酶I的酶抑制作用引起的。此后，为了寻找一种更易溶、更易耐受、在体内有活性的喜树碱衍生物，研究活动又一次增加。为了提高水溶性，已经描述了A-环和B-环修饰的喜树碱衍生物的盐和具有可电离基团的20-O-酰基衍生物的盐(US4943579)。后一种前药概念后来也被转移到经修饰的喜树碱衍生物中(WO96/02546)。然而，所述的20-O-酰基前药在体内具有非常短的半衰期，并且非常迅速地裂解得到母体结构。整合素是存在于细胞表面的异二聚体跨膜蛋白，在细胞与细胞外基质的粘附中起重要作用。它们通过RGD序列(RGD是氨基酸序列精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸的单字母编码)识别细胞外糖蛋白，例如细胞外基质上的纤连蛋白或玻连蛋白。一般而言，整合素，例如，玻连蛋白受体，也称为αvβ3受体，或者可替代地αvβ5受体或GpIIb/IIIa受体，在细胞迁移、血管生成、细胞与基质粘附等生物学过程中起着重要作用，从而在这些过程起着至关重要的疾病中有重要作用。癌症、骨质疏松症、动脉硬化、再狭窄和眼炎可作为示例提及。αvβ3受体大量存在于例如生长中的内皮细胞上，使其与细胞外基质的粘附成为可能。因此，αvβ3受体在血管生成即新生血管形成中起着重要的作用，而这是肿瘤生长和转移的重要前提。有可能表明上述受体的阻断是治疗这类障碍的一个重要起点。如果生长中的内皮细胞与细胞外基质的粘附通过阻断其相应的整合素受体而被抑制，例如通过环肽或单克隆抗体，则不会发生血管生成，这导致肿瘤生长的停止或消退(参见，例如，Brooks等人，Cell79,1157-1164(1994))。WO98/10795描述了其中靶向肿瘤的分子与功能单元连接的缀合物，所述功能单元例如是细胞抑制剂或可检测标记物例如放射性核素。除其他外，整合素拮抗剂，例如具有上述RGD序列的肽，被描述为靶向肿瘤或肿瘤基质的分子。阿霉素被描述为与针对肿瘤的这种类型的分子连接的细胞抑制剂的一个示例。在WO98/10795的化合物的情况下，进行连接，使得针对肿瘤的分子和功能单元直接彼此键合，并保持它们各自的性质(例如，参见第56页，l.17至第58页，l.10和实施例6)。其结果是，这些化合物确实通过结合针对肿瘤的实体而选择性地聚集在紧邻肿瘤细胞处(在通过与特别在通过血管生成作用新形成的内皮细胞上表达的αvβ3整合素受体结合而具有αvβ3整合素拮抗作用的自由基的情况下)，但是由于直接组合，功能单元例如细胞抑制剂不能释放到肿瘤组织的细胞内空间中。从根本上说，对于在一方面通过缀合物中拥有的对αvβ3或αvβ5整合素受体寻址的部分的作用而选择性地聚集在肿瘤组织中，在另一方面包含可从缀合物释放的细胞抑制剂的缀合物，由于与WO98/10795中描述的缀合物相比，细胞抑制剂可能对肿瘤细胞更直接作用，因此应该对肿瘤组织具有增加的毒性作用。特别地，如果细胞抑制剂的释放发生在紧邻肿瘤组织处或甚至在肿瘤细胞中，这种毒性作用和肿瘤选择性甚至应该更高。在WO00/69472中公开了酶激活的抗肿瘤前药化合物，其可被胶原酶(IV)和弹性蛋白酶特异性切割。关于可被弹性蛋白酶切割的连接单元，该申请描述了特异性四肽序列Ala-Ala-Pro-Val和Ala-Ala-Pro-Nva因此是合适的。此外，在该参考文献中，没有提及包含针对αvβ3整合素受体寻址的部分与细胞抑制剂的缀合物。Y.Liu等人(Mol.Pharmaceutics2012,9,168)描述了瑞奥西汀通过豆荚蛋白可切割接头连接到αvβ3整合素靶向部分的缀合物。在EP1238678中公开了与细胞毒性试剂的缀合物，其靶向αvβ3整合素并且具有可以被弹性蛋白酶特异性切割的肽接头。关于可被弹性蛋白酶切割的连接单元，该申请描述了包含因此合适的Pro-Val和Pro-Leu的肽序列。作为毒性基团部分，列举了喜树碱和喹诺酮羧酸。这些缀合物的特殊挑战包括·充分的溶解度，使其能够在适当的媒介物中静脉内施用,·完整缀合物的高肿瘤渗透率，·在血浆中的高稳定性以避免全身性解离，·有效结合肿瘤微环境中的靶向受体，·被肿瘤微环境中存在的酶高效切割，·切割的毒性基团部分的高稳定性和细胞透性，以相对于再分布增强肿瘤细胞摄取。因此，本专利技术的一个目的是开发缀合物，所述缀合物包含针对αvβ3整合素受体寻址的部分和可优先在肿瘤微环境中从缀合物释放的细胞抑制剂，在肿瘤微环境中缀合物中的针对αvβ3整合素受体寻址的部分保持与αvβ3整合素受体结合的能力，因此向这类化合物提供组织选择性。此外，缀合物的可切割性和药物释放应由肿瘤环境中存在切有活性的酶如中性粒细胞弹性蛋白酶介导。最后，毒性基团的谱应与细胞外切割和释放机制以一种方式相匹配，即它应高度可透入肿瘤细胞和组织，而不是药物转运体的底物。本专利技术涉及药物化合物，所述药物化合物为缀合物，所述缀合物包含αvβ3整合素拮抗剂，可被弹性蛋白酶选择性切割的连接单元、聚乙二醇(PEG)间隔物和细胞毒性元件(毒性基团)。所述缀合物具有肿瘤特异性作用，这是与αvβ3整合素拮抗剂通过优选的连接单元连接的结果，这些连接单元可以被弹性蛋白酶选择性地切割，即被特别可以在肿瘤间质中找到的酶切割。优选的连接单元在生物介质例如培养基或血清中提供细胞抑制剂与αvβ3整合素拮抗剂的缀合物的足够稳定性，同时，提供肿瘤组织内所需的细胞内作用，这是由于其特异性的酶促或水解可切割性以及释放细胞抑制剂的结果。特别地，本专利技术的化合物显示出有利的特征：...

【技术保护点】
1.式(I)的化合物/nCT-LI-SP-IA (I)/n其中/nCT是来自下组的一价自由基：各自可另外携带羟基、羧基或氨基基团的细胞毒性自由基、细胞抑制剂自由基和细胞抑制剂衍生物自由基/nLI是下式的二价肽自由基：-L-Val-L-Pro-L-Asp-/nSP是下式的基团：/n-C＝O-(CH

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20181105 EP 18204423.01.式(I)的化合物
CT-LI-SP-IA(I)
其中
CT是来自下组的一价自由基：各自可另外携带羟基、羧基或氨基基团的细胞毒性自由基、细胞抑制剂自由基和细胞抑制剂衍生物自由基
LI是下式的二价肽自由基：-L-Val-L-Pro-L-Asp-
SP是下式的基团：
-C＝O-(CH2)x-O-(CH2-CH2-O)y-CH2-CH2-(NH)z-C＝O-，
其中x＝1-5，y＝0-15并且z＝0-1
IA是一价自由基，用于针对αvβ3整合素受体寻址
及其盐、溶剂化物和盐的溶剂化物。


2.通式(Ia)的化合物



其中x是1-5，并且y是0-15，
及其盐、溶剂化物和盐的溶剂化物。


3.如权利要求1至2中任一项所述的化合物，其中x＝1-4，并且y＝0-10。


4.如权利要求1至2中任一项所述的化合物，...

【专利技术属性】
技术研发人员：HG·勒珍，B·斯特尔特路德维格，C·C·科皮茨，约尔格·克尔德尼希，
申请(专利权)人：拜耳医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：德国;DE