一种人源性抗乙肝表面抗原的单链抗体、制剂、编码基因、载体质粒及宿主细胞制造技术

本发明专利技术涉及一种人源性抗乙肝表面抗原的单链抗体、制剂、编码基因、载体质粒及宿主细胞。该单链抗体的氨基酸序列包括重链可变区和轻链可变区，并且两者通过链接区连接，重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID No：1，轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID No：2；编码该单链抗体的基因序列为SEQ I D No：4；本发明专利技术的单链抗体是利用基因重组技术获得的乙肝免疫球蛋白，其来源非血源性，有效避免了血液疾病带来的危险；本发明专利技术的单链抗体具有良好活性，可在保证安全性的前提下迅速起效，避免乙肝病毒定位感染。

【技术实现步骤摘要】
一种人源性抗乙肝表面抗原的单链抗体、制剂、编码基因、载体质粒及宿主细胞
本专利技术涉及基因工程领域，具体而言，涉及一种人源性抗乙肝表面抗原的单链抗体、制剂、编码基因、载体质粒及宿主细胞。
技术介绍
乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus，HBV)是引起乙型肝炎的病原体。感染HBV会导致多种肝病，包括急性肝炎(AH)、暴发性肝衰竭、慢性肝炎、肝硬化和肝细胞癌(HCC)等。乙型肝炎病毒感染呈世界性流行，全球有约2.57亿慢性HBV感染者，非洲区和西太平洋区占68％。全球每年约有88.7万人死于HBV感染。乙肝表面抗体可以与乙肝病毒表面特异性位点结合，并阻止其侵袭肝细胞。预防乙肝的生物制品有两种，乙肝疫苗和乙肝免疫球蛋白(HBIg)，乙肝疫苗是提纯乙肝表面抗原，是一种灭活疫苗，用于预防乙肝病毒感染的生物制品，乙肝疫苗接种后可刺激机体免疫系统产生乙肝表面抗体，乙肝表面抗体一旦乙肝病毒接触，就会立即与病毒结合并激活补体，清除病毒，防止机体被感染。乙肝免疫球蛋白是一种浓缩的预防乙肝病毒入侵复制的被动免疫制剂。让人体被动地接受这种高效价的外源性抗体，可使机体迅速获得被动保护免疫力，能短期内迅速起效，中和并清除血清中游离的乙肝病毒，避免乙肝病毒定位感染。HBIg在母婴垂直传播及其它应急情况的预防中起着举足轻重的作用。然而，现有技术中HBIg均为人血源抗体。由于各类肝炎和艾滋病等血源性传染病的蔓延，导致血源性乙型肝炎表面抗体(HBsAb)的安全性逐渐降低。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种人源性抗乙肝表面抗原的单链抗体、制剂、编码基因、载体质粒及宿主细胞。本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：一种人源性抗乙肝表面抗原的单链抗体，氨基酸序列包括重链可变区和轻链可变区，并且两者通过链接区连接，所述重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNo：1，所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNo：2。进一步，所述单链抗体的氨基酸序列为SEQIDNo：3。进一步，所述氨基酸序列的羧基末端连接有6His的标签。进一步，所述单链抗体用于制备预防乙肝的生物制剂。本专利技术提供一种预防乙肝的制剂，所述生物制剂中含有如上述的单链抗体。本专利技术提供一种用于编码上述的人源性抗乙肝表面抗原的单链抗体的基因，所述基因序列为SEQIDNo：4；其中，用于编码所述重链可变区的基因序列为SEQIDNo：5，用于编码所述轻链可变区的基因序列为SEQIDNo：6。本专利技术提供一种载体质粒，所述载体质粒含有上述的人源性抗乙肝表面抗原的单链抗体的基因。本专利技术提供一种宿主细胞，所述宿主细胞中含有上述的载体质粒。本专利技术的有益效果在于：1)本专利技术的人源性抗乙肝表面抗原的单链抗体，是利用基因重组技术获得的乙肝免疫球蛋白，其来源非血源性，有效避免了血液疾病带来的危险；2)经验证，本专利技术的人源性抗乙肝表面抗原的单链抗体具有良好活性，可在保证安全性的前提下迅速起效，避免乙肝病毒定位感染。3)本专利技术构建的人源性乙肝表面抗原单链抗体，为重组抗体的应用奠定基础。附图说明图1为本专利技术实施例1中，重链可变区VH和轻链可变区VL基因的PCR产物电泳图；图2为本专利技术实施例1中，单链抗体的基因片段PCR产物电泳图；图3为本专利技术实施例1中，重组质粒双酶切后的基因片段PCR产物电泳图，其中，泳道1中的特异性条带为EcoRI+AgeI消化后的pPICZαA-HBscFv质粒，泳道2中的特异性条带为pPICZαA-HBscFv质粒；图4为本专利技术实施例1中，DNA序列进行测定的序列图；图5为本专利技术实施例1中，单链抗体氨基酸序列进行测定的序列图；图6为本专利技术实施例2中，菌落PCR鉴定酵母转化子的电泳图；图7为本专利技术实施例2中，毕赤酵母培养上清的SDS-PAGE电泳图；图8为本专利技术实施例2中，毕赤酵母菌体的SDS-PAGE电泳图；图9为本专利技术实施例3中，表达上清Western-blot分析电泳图，其中，泳道1-3的条带分别为上样量10μL、20μL、30μL的特异性条带。具体实施方式以下结合附图对本专利技术的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。本专利技术的人源性抗乙肝表面抗原的单链抗体，由重链可变区(VH)、轻链可变区(VL)以及用于连接所述重链可变区和所述轻链可变区的链接区组成；单链抗体由255个氨基酸组成，其氨基酸序列为SEQIDNo：3(GluPheGlnValGlnLeuLeuGluSerGlyGlyGlyValValArgProGlyGlySerLeuArgLeuSerCysAlaAlaSerGlyPheIlePheAspAspPheGlyMetThrTrpValArgGlnValProGlyLysGlyLeuGluTrpValSerGlyIleAsnTrpAsnGlyGlyArgThrGlyTyrAlaAspSerValLysGlyArgPheThrIleSerArgAspAspAlaLysAsnSerLeuTyrLeuGlnMetAsnSerLeuArgAlaGluAspThrAlaLeuTyrTyrCysAlaLysPheAlaArgAlaTrpSerGlyProGlnPheThrAspTyrTyrTyrTyrMetAspValTrpGlyLysGlyThrThrValThrValSerSerGlyGlyGlyGlySerGlyGlyGlyGlySerGlyGlyGlyGlySerAspIleGluLeuThrGlnSerProGlyThrLeuSerLeuSerProGlyGluArgAlaThrLeuSerCysArgAlaSerGlnSerValSerSerSerGlnPheAlaTrpTyrGlnGlnLysProGlyGlnAlaProArgLeuLeuIleCysGlyAlaSerSerArgAlaThrGlyIleProAspArgPheSerGlySerGlySerGlyThrAspPheThrLeuThrIleSerArgLeuGluProGluAspPheAlaValTyrHisCysGlnHisTyrGlySerLeuGlyThrPheGlyGlnGlyThrLysValGluIleAsnArgValAsp)。优选的，氨基酸序列的羧基末端连接有6His的标签，便于乙肝表面抗原单链抗体的纯化。重链可变区的氨基酸序列为自N末端第1-130位，其氨基酸序列为SEQIDNo：1(GluPheGlnValGlnLeuLeuGluSerGlyGlyGlyValValArgProGlyGlySerLeuArgLeuSerCysAlaAlaSerGlyPheIlePheAspAspPheGlyMetThrTrpValArgGlnValProGlyLysGlyLeuGluTrpValSerGlyIleAsnTrpAsnGlyGlyA本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人源性抗乙肝表面抗原的单链抗体，所述单链抗体的氨基酸序列包括重链可变区和轻链可变区，并且两者通过链接区连接，其特征在于，所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID No：1，所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID No：2。/n

【技术特征摘要】
1.一种人源性抗乙肝表面抗原的单链抗体，所述单链抗体的氨基酸序列包括重链可变区和轻链可变区，并且两者通过链接区连接，其特征在于，所述重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNo：1，所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNo：2。


2.根据权利要求1所述一种人源性抗乙肝表面抗原的单链抗体，其特征在于，所述单链抗体的氨基酸序列为SEQIDNo：3。


3.根据权利要求2所述一种人源性抗乙肝表面抗原的单链抗体，其特征在于，所述氨基酸序列的羧基末端连接有6His的标签。


4.根据权利要求1～3任意一项所述一种人源性抗乙肝表面抗原的单链抗体，其特征在于，所述单链抗...

【专利技术属性】
技术研发人员：张佑红，李思雨，
申请(专利权)人：武汉工程大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42