一种基于非洲猪瘟病毒p72基因的双抗体夹心ELISA及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种特异性结合非洲猪瘟病毒p72蛋白的抗原结合蛋白、抗体或活性片段，包含所述抗原结合蛋白、抗体或活性片段的非洲猪瘟病毒p72蛋白的双抗体夹心ELISA抗原检测试剂盒及其应用。本发明专利技术的试剂盒包被有单克隆抗体ASFV‑p72‑5G8的酶标板、阳性对照和阴性对照、HRP标记的检测抗体ASFV‑p72‑12F6、样品稀释液、显色液以及洗涤液。其中所述抗体ASFV‑p72‑5G8和ASFV‑p72‑12F6分别由杂交瘤细胞株ASFV‑p72‑5G8和ASFV‑p72‑12F6分泌。本发明专利技术的试剂盒以5G8为捕获抗体、以12F6偶联HRP为检测抗体建立了双抗体夹心ELISA方法，可特异性的检测ASFV，该双抗夹心ELISA方法操作简便，灵敏度高，特异性好，为ASFV感染的临床诊断和流行病学调查提供了一种新的检测手段。

【技术实现步骤摘要】
一种基于非洲猪瘟病毒p72基因的双抗体夹心ELISA及其应用
本专利技术属于生物技术检测领域，具体涉及一种基于非洲猪瘟病毒p72基因的双抗体夹心ELISA抗原检测试剂盒及其在患病动物新鲜血液检测中的应用。
技术介绍
非洲猪瘟(Africanswinefever，ASFV)是一种由非洲猪瘟病毒(Africanswinefevervirus，ASFV)引起的猪的急性、烈性、高度接触传染性疾病，期临床症状眼观病变与猪瘟(classicalswinefever，CSF)高度近似，又起源于非洲，故称之为非洲猪瘟。近几年来随着单克隆抗体技术的发展，针对非洲猪瘟单克隆抗体的研究在ASFV研究与ASFV诊断中发挥的作用也愈来愈凸显，主要表现在两个方面，一是将单克隆抗体用于免疫学相关ASFV检测方法的建立，例如用于建立检测ASFV抗原的直接免疫荧光试验(DIF)、免疫酶组化试验、夹心法酶联免疫吸附试验等；二是用于病毒和抗原结构的研究及ASFV抗原特性的研究。尽管目前还没有ASFV疫苗，ASFV抗体阳性即表明当前或曾经发生了感染，但并不代表未来没有ASFV本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.特异性结合非洲猪瘟病毒p72蛋白的抗原结合蛋白，其特征在于，所述抗原结合蛋白具有SEQ ID NO:19所示的重链互补决定区CDR1、SEQ ID NO:20所示的重链互补决定区CDR2、SEQ ID NO:21所示的重链互补决定区CDR3，以及SEQ ID NO:22所示的轻链互补决定区CDR1、SEQ ID NO:23所示的轻链互补决定区CDR2、SEQ ID NO:24所示的轻链互补决定区CDR3。/n

【技术特征摘要】
1.特异性结合非洲猪瘟病毒p72蛋白的抗原结合蛋白，其特征在于，所述抗原结合蛋白具有SEQIDNO:19所示的重链互补决定区CDR1、SEQIDNO:20所示的重链互补决定区CDR2、SEQIDNO:21所示的重链互补决定区CDR3，以及SEQIDNO:22所示的轻链互补决定区CDR1、SEQIDNO:23所示的轻链互补决定区CDR2、SEQIDNO:24所示的轻链互补决定区CDR3。


2.根据权利要求1所述的抗原结合蛋白，其特征在于，所述抗原结合蛋白包含至少一个重链可变区和至少一个轻链可变区，所述重链可变区具有SEQIDNO:1所示的氨基酸序列，或SEQIDNO:1所示的氨基酸序列经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰获得的保守性变异体；所述轻链可变区具有SEQIDNO:2所示的氨基酸序列，或SEQIDNO:2所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰获得的保守性变异体。


3.特异性结合非洲猪瘟病毒p72蛋白的抗原结合蛋白，其特征在于，所述抗原结合蛋白具有SEQIDNO:25所示的重链互补决定区CDR1、SEQIDNO:26所示的重链互补决定区CDR2、SEQIDNO:27所示的重链互补决定区CDR3，以及SEQIDNO:28所示的轻链互补决定区CDR1、SEQIDNO:29所示的轻链互补决定区CDR2、SEQIDNO:30所示的轻链互补决定区CDR3。


4.根据权利要求3所述的抗原结合蛋白，其特征在于，所述抗原结合蛋白包含至少一个重链可变区和至少一个轻链可变区，所述重链可变区具有SEQIDNO:3所示的氨基酸序列，或SEQIDNO:3所示的氨基酸序列经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰获得的保守性变异体；所述轻链可变区具有SEQIDNO:4所示的氨基酸序列，或SEQIDNO:4所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰获得的保守性变异体。


5.特异性结合非洲猪瘟病毒p72蛋白的抗体或活性片段，其特征在于，所述抗体或活性片段具有SEQIDNO:19所示的重链互补决定区CDR1、SEQIDNO:20所示的重链互补决定区CDR2、SEQIDNO:21所示的重链互补决定区CDR3，以及SEQIDNO:22所示的轻链互补决定区CDR1、SEQIDNO:23所示的轻链互补决定区CDR2、SEQIDNO:24所示的轻链互补决定区CDR3；
优选地，所述抗体或活性片段包含至少一个重链可变区和至少一个轻链可变区，所述重链可变区具有SEQIDNO:1所示的氨基酸序列，或SEQIDNO:1所示的氨基酸序列经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰获得的保守性变异体；所述轻链可变区具有SE...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯春燕，林祥梅，王彩霞，吴绍强，刘晓飞，仇松寅，
申请(专利权)人：中国检验检疫科学研究院，
类型：发明
国别省市：北京;11