一种检测肿瘤抗原OVA12血清抗体的方法技术

一种检测肿瘤抗原OVA12血清抗体的方法，包括如下步骤：一：收集大量不同类型的肿瘤患者血清样本，并通过体外原核表达方法，纯化获得大量OVA12完整蛋白抗原；二：通过OVA12抗体阳性肿瘤患者血清及两株OVA12单克隆抗体，利用生物信息学方法分析获得的表位肽段，分析筛选OVA12抗原B细胞表位肽段序列；三：应用步骤二候选OVA12的B细胞表位肽段，结合OVA12完整蛋白抗原，采用ELISA技术大样本检测肿瘤患者血清OVA12抗体和OVA12单克隆抗体与上述肽段及完整抗原的免疫反应强度，筛选出OVA12的优势B细胞表位肽段；四：建立基于优势B细胞表位肽段的OVA12血清抗体标准化定量ELISA检测方法。本检测方法可对恶性肿瘤进行早期筛查。

【技术实现步骤摘要】
一种检测肿瘤抗原OVA12血清抗体的方法
本专利技术涉及医疗检测
，具体涉及一种检测肿瘤抗原OVA12血清抗体的方法。
技术介绍
肿瘤抗原OVA12是通过重组cDNA表达文库血清学分析技术(SEREX)构建卵巢癌cDNA文库筛选得到的一个新的基因；由于该基因发现于卵巢癌，其分子量为12KD，故将其命名为肿瘤抗原OVA12。该基因定位于人染色体9q34.3，mRNA全长939bp，含有345bp的开放读码框，编码114个氨基酸，等电点为8.95。该抗原主要定位于细胞浆；在多种肿瘤细胞中高表达，而在正常细胞株中不表达或低表达。收集临床不同来源肿瘤组织和相应癌旁组织，应用免疫组化技术检测OVA12抗原表达水平，结果显示，与癌旁组织相比，OVA12在肿瘤组织中呈特征性高表达，而且与肿瘤的分期呈正相关。收集23例正常人和121例肿瘤患者血清，采用ELISA技术检测上述血清中OVA12抗体水平，结果显示肿瘤患者血清OVA12抗体水平明显高于正常人，具有显著的统计学意义。近年来我国恶性肿瘤发病率与死亡率持续上升。由于早期多无特异性症状，多数患者本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测肿瘤抗原OVA12血清抗体的方法，其特征在于，包括如下步骤：/n步骤一：收集大量不同类型的肿瘤患者血清样本，并通过体外原核表达方法，纯化获得大量OVA12完整蛋白抗原；/n步骤二：通过OVA12抗体阳性肿瘤患者血清及两株OVA12单克隆抗体，利用生物信息学方法分析获得的表位肽段，分析筛选OVA12抗原B细胞表位肽段序列；/n步骤三：应用步骤二候选OVA12的B细胞表位肽段，结合OVA12完整蛋白抗原，采用ELISA技术大样本检测肿瘤患者血清OVA12抗体和OVA12单克隆抗体与上述肽段及完整抗原的免疫反应强度，筛选出OVA12的优势B细胞表位肽段；/n步骤四：根据步骤三实验结果，建...

【技术特征摘要】
1.一种检测肿瘤抗原OVA12血清抗体的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一：收集大量不同类型的肿瘤患者血清样本，并通过体外原核表达方法，纯化获得大量OVA12完整蛋白抗原；
步骤二：通过OVA12抗体阳性肿瘤患者血清及两株OVA12单克隆抗体，利用生物信息学方法分析获得的表位肽段，分析筛选OVA12抗原B细胞表位肽段序列；
步骤三：应用步骤二候选OVA12的B细胞表位肽段，结合OVA12完整蛋白抗原，采用ELISA技术大样本检测肿瘤患者血清OVA12抗体和OVA12单克隆抗体与上述肽段及完整抗原的免疫反应强度，筛选出OVA12的优势B细胞表位肽段；
步骤四：根据步骤三实验结果，建立基于优势B细胞表位肽段的OVA12血清抗体标准化定量ELISA检测方法，通过完善相关实验操作，不断提高该方法的特异性、敏感性和准确性。


2.根据权利要求1所述的一种检测肿瘤抗原OVA12血清抗体的方法，其特征在于，包括如下具体步骤：
步骤一：收集大量乳腺癌、宫颈癌、肠癌、胃癌及肝癌组织不同类型和分期患者和正常人血清标本；
步骤二：将pET32a-OVA12质粒转化至感受态细胞BL21中制备重组菌，在含氨苄青霉素的LB培养基中37℃孵育过夜；随即接种菌液至新鲜的LB培养基中，37℃摇床培养至A600为0.6-0.8时加入IPTG在30℃诱导5h；然后收集菌体，超声裂解，并按照原核表达蛋白纯化试剂盒技术步骤进行纯化；
步骤三：利用噬菌体展示技术，通过OVA12阳性肿瘤病人血清和已制备OVA12单克隆抗体，经过三轮淘选、克隆测序，获取几段候选OVA12抗原B细胞表位肽序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：张仁峰，
申请(专利权)人：山东第一医科大学附属省立医院山东省立医院，
类型：发明
国别省市：山东;37