一种肿瘤检测试剂盒制造技术

本发明专利技术属于生物制药技术领域，具体涉及一种肿瘤检测试剂盒。为弥补现有肿瘤早期诊断试剂的不足，本发明专利技术基于新型肿瘤标志物HMGA2，通过杂交瘤技术筛选并获得了新型抗人HMGA2的单克隆抗体，该抗体可与目标抗原高效结合，并能够用于检测固体肿瘤和液体肿瘤，进行定量、定性和定位分析，灵敏度高，准确性好，为肿瘤的早期诊断和治疗提供了新的有力工具。

【技术实现步骤摘要】
一种肿瘤检测试剂盒
本专利技术属于生物制药领域，具体涉及一种肿瘤检测试剂盒。
技术介绍
肿瘤(tumour)，又称癌症(cancer)，是指机体在各种致癌因子作用下，局部组织异常增生而导致的疾病，可癌变组织种类非常广泛，包括脑、肝、肺、骨、乳腺、前列腺、皮肤、血液等等，由于基因遗传、环境污染、不健康生活习惯、心理压力过大等多种致癌因素影响，在世界范围内肿瘤的发病率呈现逐年攀升的趋势，据报道全球每年因恶性肿瘤死亡人数已超过9000万人，肿瘤成为仅次于心脑血管疾病的第二大死因。据统计，我国每年新发肿瘤患者近400万，在各类肿瘤中，肺癌发病率居恶性肿瘤发病率首位，其下依次为胃癌、结直肠癌、肝癌、乳腺癌、食管癌、甲状腺癌、子宫颈癌、脑癌、胰腺癌等，从发病年龄来看，40岁以下的成年人居多，但是近年来呈现了一定的年轻化趋势，年轻人的发病率也呈现了快速增长态势。在肿瘤的治疗方面，随着人民生活水平的提高和我国医疗水平的改善，我国肿瘤患者的生存率逐年上升，平均5年生存率约为40％，但是某些肿瘤的生存率现对于欧美发达国家仍有较大差距，造成这种状况的主要原因之一在于我国肿瘤诊断和治疗技术发展滞后，尤其是肿瘤的早期诊断工作需要得到进一步的重视和强化。所谓肿瘤的早期诊断，是指在恶性肿瘤发生发展的初期采用相关诊断技术予以确认，并给予患者积极治疗，据统计恶性肿瘤如果采取早期诊断和治疗后，其治愈率可提高至80％以上，因此早期诊断和早期治疗被认为是最好的肿瘤防治手段。肿瘤早期诊断技术的实施离不开肿瘤标志物的选择，肿瘤标志物是指肿瘤细胞发生、增值、转移或复发过程中因肿瘤细胞的相关基因表达或集体对肿瘤发生反应而异常变化的一类物质。医学研究人员在19世纪中期就观测到肿瘤患者体内某些蛋白表达异常，但当时并未引起足够重视，直到20世纪60年代才引起了人们的关注，1978年赫贝曼正式提出了肿瘤标志物的概念，肿瘤标志物才开始在临床上广泛应用，并得到迅速发展，截止目前已经出现了mRNA、DNA、细胞代谢物、肿瘤干细胞、蛋白等多种类型的肿瘤标志物，其中蛋白类标志物因其检测方便、成本低廉、准确性高而成为目前临床上应用的最为广泛的一类肿瘤标志物，常见的蛋白类标志物包括癌胚抗原、甲胎蛋白、致癌病毒抗原、免疫球蛋白等等。受限于检测技术的滞后，上述肿瘤标志物在临床应用过程中仍面临假阳性比例高、难以准确反映肿瘤进程等缺陷，且所用检测试剂和检测手段灵敏度不高，特异性差，制备成本高，进一步限制了其应用。因此，研究和筛选新型肿瘤标志物，开发相应的新型检测手段成为肿瘤诊断和治疗领域中的研究热点和难点。高迁移率族蛋白2(highmobilitygroupA2，HMGA2)是高迁移率族蛋白家族成员之一，该蛋白家族包括三个细分家族，即HMGA(含有AT钩)，HMGB(含有HMG盒)和HMGN(含有核小体结合域)，HMGA家族由HMGA1a、HMGA1b、HMGA1c和HMGA2四种蛋白组成，HMGA1基因编码产生HMGA1a、HMGA1b和HMGA1c三种蛋白，而HMGA2蛋白只由HMGA2编码产生，因此从检测难度上考虑HMGA2相比于HMGA1更适合作为生物标志物。HMGA2基因位于人类染色体12q13-15位点上，全长约140bp，包含5个外显子(I-V)，I/II/III外显子编码3个可以与DNA结合的区域(AT钩)，HMGA2通过AT钩改变染色质的结构，使之发生弯曲、拉伸、卷曲、成环或解链，从而调节靶基因的转录。研究表明HMGA2基因在胚胎发育过程中广泛表达，在成年组织中不表达或低表达，然而目前已经发现HMGA2基因在多种肿瘤组织中呈现高水平表达，如有研究人员发现，HMGA2在结直肠癌中的表达水平，且结直肠癌中HMGA2高表达的患者对放疗更敏感；免疫组织化学检测中发现，肝癌组织中HMGA2蛋白表达水平明显增加；肺腺癌及非小细胞肺癌组织和细胞中也观测到了HMGA2表达上调，且其表达程度与癌细胞的转移有关，上述研究成果表明HMGA2有望成为一种新型广谱肿瘤检测标志物。然而现有技术中关于HMGA2的研究主要集中于实验室阶段，目前国内外也只有WO2012006394A2、CN102375064A等少量专利文献报道了靶向HMGA2蛋白的抗体，还没有相关检测试剂或产品上市应用于临床诊断。本专利技术针对现有肿瘤诊断试剂和方法的不足，筛选并获得了靶向HMGA2单克隆抗体，并将其用于固体肿瘤和液体肿瘤的定性和定量分析，为肿瘤的诊断提供了新型检测手段。
技术实现思路
为了能够有效进行肿瘤诊断和检测，本专利技术提供了一种靶向HMGA2的单克隆抗体，该抗体具有全新的结构域，所述抗体含有SEQIDNO.1所示的重链可变区CDRH1；SEQIDNO.2所示的重链可变区CDRH2SEQIDNO.3所示的重链可变区CDRH3；SEQIDNO.4所示的轻链可变区CDRL1；SEQIDNO.5所示的轻链可变区CDRL5；SEQIDNO.6所示的轻链可变区CDRL6。进一步的，所述抗体包含有如SEQIDNO.7所示的重链可变区氨基酸序列。进一步的，所述抗体包含有如SEQIDNO.8所示的轻链可变区氨基酸序列。正常情况下，HMGA2基因主要在胚胎发育过程中广泛表达，被认为是促进机体早期发育的关键基因之一，HMGA2可以促进脂肪形成、干细胞自我更新、骨骼肌发育、调控正常细胞周期，而在发育成熟后的正常组织中基本不表达或有少量表达，但是在多种肿瘤细胞中却呈现了高表达，据研究证实，HMGA2可通过多种途径调节肿瘤细胞的生长过程，如HMGA2参与肿瘤细胞的细胞周期调控，促进肿瘤细胞增殖，加速肿瘤细胞分化，此外HMGA2基因中包括AT钩结构，可与通过与DNA中丰富的特异AT序列结合并改变染色质的构象来调节多种转录因子表达，促进肿瘤细胞侵袭和转移。本专利技术中所提供的靶向HMGA2的单克隆抗体，能够高效特异性结合目标HMGA2蛋白，从而在多种肿瘤的诊断和检查中发挥作用。本专利技术提供了一种肿瘤诊断试剂盒，包括本专利技术中所提供的靶向HMGA2的单克隆抗体。进一步的，所述肿瘤包括肝癌，肺癌，结直肠癌，白血病。进一步的，所述试剂盒中还包括有标记物的二抗、封闭缓冲液和/或清洗缓冲液。本专利技术中基于该靶向HMGA2的单克隆抗体，提供了检测试剂盒，该试剂盒可用于免疫组织化学检测、酶联免疫吸附测定(enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA)、Western-blot检测等多种检测方式，即可用于临床肿瘤检测，又可以和其他检测手段配合，判断肿瘤的发生发展状态，还可以用于实验室研究，揭示肿瘤致病机理和验证治疗手段是否有效。本专利技术提供了一种靶向HMGA2单克隆抗体在制备肿瘤检测试剂中的应用。进一步的，所述肿瘤包括肝癌，肺癌，结直肠癌，白血病。本专利技术所提供的新型靶向HMGA2的单克隆抗体，具有全新的抗原结合域，其中重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.1-3所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.4-6所示本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种靶向HMGA2的单克隆抗体，其特征在于，所述抗体包含SEQ ID NO.1所示的重链可变区CDRH1；/nSEQ ID NO.2所示的重链可变区CDRH2；/nSEQ ID NO.3所示的重链可变区CDRH3；/nSEQ ID NO.4所示的轻链可变区CDRL1；/nSEQ ID NO.5所示的轻链可变区CDRL5；/nSEQ ID NO.6所示的轻链可变区CDRL6。/n

【技术特征摘要】
1.一种靶向HMGA2的单克隆抗体，其特征在于，所述抗体包含SEQIDNO.1所示的重链可变区CDRH1；
SEQIDNO.2所示的重链可变区CDRH2；
SEQIDNO.3所示的重链可变区CDRH3；
SEQIDNO.4所示的轻链可变区CDRL1；
SEQIDNO.5所示的轻链可变区CDRL5；
SEQIDNO.6所示的轻链可变区CDRL6。


2.如权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述抗体包含如SEQIDNO.7所示的重链可变区氨基酸序列。


3.如权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述抗体包含如SEQ...

【专利技术属性】
技术研发人员：马红妙，雷洁，
申请(专利权)人：北京保图生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11