一种RHAMM拮抗多肽及其衍生物与应用制造技术

本发明专利技术涉及一种RHAMM拮抗多肽及其衍生物与应用，具体公开了RHAMM拮抗多肽：所述RHAMM拮抗多肽HL12‑RP1的氨基酸残基序列为：Leu‑Ile‑Leu‑Arg‑Cys‑Arg‑Arg‑Ser‑Phe‑Ile‑Gly‑Tyr SEQ ID NO.1。还公开了RHAMM拮抗多肽及其衍生物在抗肿瘤中的应用。本发明专利技术提供了一种RHAMM拮抗多肽HL12‑RP1及其衍生物，所述的拮抗多肽及其衍生物能够专一性与RHAMM结合，并特异性与RHAMM结合抑制RHAMM信号通路；通过阻断RHAMM的信号通路抑制结直肠癌细胞增殖，进而促进结直肠癌细胞发生凋亡。

【技术实现步骤摘要】
一种RHAMM拮抗多肽及其衍生物与应用
本专利技术涉及生物技术和生物医药领域，具体而言，本专利技术是结直肠癌靶点RHAMM受体拮抗多肽HL12-RP1及其衍生物与应用。
技术介绍
1.1结直肠癌结直肠癌(CRC)是世界上常见的恶性肿瘤之一。世界卫生组织国际癌症研究中心(InternationalAgencyforResearchonCancer，IARC)报告指出，结直肠癌发病率位于肺癌、乳腺癌之后居恶性肿瘤第3位，死亡率位于肺癌、肝癌和胃癌之后，居恶性肿瘤第4位。结直肠癌发病地域分布在世界范围内有显著差异性，欧美区域发病率较亚洲地区更高。中国的CRC发生率为29人/10万人，死亡率为14人/10万人。但随着物质生活水平的不断提高，生活方式的改变，特别是饮食习惯的改变，我国结直肠癌的发病率呈现逐渐上升的趋势。相比之下，欧美国家因较早的开展结直肠癌筛查，近20年来结直肠癌的发病率和病死率却明显下降。与欧美国家人相比较，中国人结直肠癌呈现“三高一低”的特点：1、结肠癌的发病率稍低于直肠癌，但近几年结肠癌发病率呈上升趋势；2、低位直肠癌所占比例较高；3、青年人比例很高约占10％-15％；4、早期筛查就诊率低。目前结直肠癌的病因尚未完全明确，但是伴随着医学及分子生物学的不断发展及研究的日益深入，逐渐的认识到结直肠癌的发生、发展是多基因共同作用、多个信号通路参与而引起的“炎症-增生-癌变”的演变过程。国内外研究发现，K-ras的基因突变、DNA分子的甲基化及胰岛素样生长因子是促进CRC发生发展的重要原因。随着对CRC病因的不断研究，与其发病的相关高危因素逐渐被认识，如长期高脂摄入、亚硝酸盐化合物食物摄入、维生素缺乏、长期酗酒等饮食因素；溃疡性结肠炎、结肠腺瘤、家族性腺瘤性息肉病(FAP)等被认为是癌前性病变的疾病；年龄增大(＞60岁)及家族遗传等因素都是CRC的高危因素。目前结直肠癌患者的治疗手段主要是外科手术治疗，化学药物治疗，放射线放射治疗。其中外科手术目前是结直肠癌治疗最重要、最有效的手段，放疗与化疗已成为结直肠癌辅助治疗的重要组成部分。与此同时，靶向治疗、基因治疗、新辅助化疗、免疫治疗等治疗手段也越来越多的被应用。分子靶向药物治疗在特定患者中疗效显著，患者生存获益。但靶向药物的应用存在局限性，主要因为目前靶向药物的有效的靶点还较少，同时在选择适宜的靶向治疗药物前，需要对患者进行相应的分子靶点检测。目前针对CRC患者，主要的两种靶向药物是以血管内皮生长因子(VEGF)为靶点的贝伐珠单抗和以表皮生长因子受体(EGFR)为靶点的西妥昔单抗。国内学者研究提示，进展期及晚期结直肠癌患者使用西妥昔单抗和贝伐珠单抗生存获益。1.2促癌因子RHAMM与肿瘤透明质酸介导的运动受体(Receptorforhyaluronanmediatedmotility，RHAMM)也叫CD168，最初被发现是迁移的细胞分泌的一种可溶性的蛋白质，能够通过和透明质酸(hyaluronan，HA)相互作用促进细胞运动和浸润。RHAMM是一种酸性的卷曲螺旋蛋白质，在脊椎动物中最先被发现，而在低等生物和昆虫中不表达。RHAMM没有跨膜结构域，也没有信号肽序列。在通常情况下，RHAMM主要定位于细胞内，但是在某些刺激下，能够分泌到细胞外。RHAMM全长大小约85kDa，由N端高碱性HEAD区域，C端TAIL区域和之间的长约600多个氨基酸的a-螺旋区域组成。细胞表面的RHAMM是作为跨膜膜蛋白的共同受体与HA相互作用，从而激活细胞内的信号级联系统，并参与正常细胞及肿瘤细胞的胞间黏附及细胞迁移。RHAMM被鉴定为一种新的微管结合蛋白(microtublinassociatedprotein,MAP)，它N端的1-69氨基酸的碱性序列和外显子4编码的氨基酸序列是与微管的结合位点。如果同时敲除RHAMM的N端头部结构域和与之相邻的外显子4编码的序列，则会完全破坏其与微管之间的相互作用。胞内RHAM的表达受到细胞周期的调控，其表达曲线与CyclinB十分类似。RHAMM在G2/M期和有丝分裂前期表达量较高，并随细胞周期呈周期性变化。近年来,恶性肿瘤侵袭转移分子机制已成为研究热点。由细胞表面黏附分子所介导的细胞-细胞或细胞-细胞外基质的相互作用,是癌细胞侵袭进而实现转移的生物学基础。细胞外基质是HA的重要组成部分,通过与细胞表面相应受体的结合促进正常细胞的游走和肿瘤细胞的侵袭,因而在众多影响癌细胞侵袭和转移的因素中,细胞外基质中的HA与癌细胞表面相应受体的相互作用备受关注。虽然RHAMM的mRNA在大多数稳态组织中很难检测到，但是在多种肿瘤中，RHAMM通常持续高表达。在一些恶性肿瘤包括白血病、乳腺癌、黑色素瘤、前列腺癌和卵巢癌中，细胞表面的RHAMM已经作为一种肿瘤抗原来检测。在脑部肿瘤、胃癌、结肠直肠癌、多发性骨髓瘤、口腔鳞状细胞癌、子宫内膜瘤和膀胱癌中，细胞内的RHAMM的表达水平也比正常组织提高。RHAMM通常在肿瘤晚期高度表达，其表达水平和肿瘤分期以及和某些肿瘤的不良预后呈正相关。RHAMM最初被发现是作为一种分泌的HA结合蛋白，分泌到细胞外的RHAMM能够活化细胞表面跨膜粘附分子和HA受体CD44的促细胞迁移和浸润功能。这种RHAMM调节的活化过程导致细胞表面CD44表达的上升以及CD44介导的ERK1/2的激活。在乳腺癌肿瘤发生上，细胞外HA结合介导的CD44-RHAMM的活化赋予肿瘤恶性的潜能。RHAMM-CD44和RAS/ERK1/2信号通路之间强有力的联系表明这些HA受体复合物能控制在许多肿瘤中过度活化的信号通路。细胞表面的RHAMM能够与CD44形成复合物在浸润性乳腺癌细胞系的上皮间充质转换(epithelial-mesenchymaltransition，EMT)过程中发挥运动受体的功能。另外细胞表面的RHAMM也能和RON(一种c-Met家族的酪氨酸受体激酶)相互作用。因此，细胞外的RHAMM与细胞表面一种或多种粘附/生长因子受体作用来活化关键信号通路，促进肿瘤转移。1.3噬菌体展示技术噬菌体展示技术(phagedisplaytechniques,PDT)是1985年由Smith等人提出的；1988年，噬菌体展示肽库首次构建成功；从1990年至今，噬菌体展示肽库得到快速发展和应用。噬菌体展示技术的原理是将外DNA通过基因工程技术克隆到适当的噬菌体载体上,使外源DNA片段对应的表达产物融合在噬菌体的衣壳蛋白上形成融合蛋白，呈现在噬菌体表面，被展示的多肽或蛋白可保持相对的空间结构和生物活性。然后利用靶分子，采用适当的淘洗方法洗去非特异结合的噬菌体，最终从噬菌体文库中筛选出能结合靶分子的目的噬菌体；外源多肽或蛋白质表达在噬菌体的表面，而其编码基因作为噬菌体基因组中的一部分可通过噬菌体DNA序列测序出来。该技术的显著特点是建立了基因型和表现型之间的对应关系。噬菌体展示技术适合用于全人源抗体药物的制备。治疗类风湿关节炎的抗肿瘤坏死因子α的Humira是第一个应用噬菌体抗体库技术生产的并被美国食品药品管理局批准的全人源抗体药物。到本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种RHAMM拮抗多肽，其特征在于，所述RHAMM拮抗多肽HL12-RP1的氨基酸残基序列为：/nLeu-Ile-Leu-Arg-Cys-Arg-Arg-Ser-Phe-Ile-Gly-Tyr SEQ ID NO.1。/n

【技术特征摘要】
1.一种RHAMM拮抗多肽，其特征在于，所述RHAMM拮抗多肽HL12-RP1的氨基酸残基序列为：
Leu-Ile-Leu-Arg-Cys-Arg-Arg-Ser-Phe-Ile-Gly-TyrSEQIDNO.1。


2.一种权利要求1所述的RHAMM拮抗多肽的衍生物，其特征在于：
所述的RHAMM拮抗多肽的衍生物为权利要求1所述的RHAMM拮抗多肽氨基酸侧链基团上、权利要求1所述的RHAMM拮抗多肽片段的氨基端或羧基端进行常规修饰得到的产物，或者为权利要求1所述的RHAMM拮抗多肽上连接用于多肽或蛋白检测或纯化的标签所得到的产物；
所述的常规修饰为氨基化、酰胺化、羟基化、羧基化、羰基化、烷基化、乙酰化、磷酸化、酯化、糖基化、环化、生物素化、荧光基团修饰、聚乙二醇PEG修饰或固定化修饰；
所述的标签为His6、GST、EGFP、MBP、Nus、HA、IgG、FLAG、c-Myc或ProfinityeXact。


3.一种多聚核苷酸，其特征在于，其编码权利要求1所述的RHAMM拮抗多肽或权利要求2所述的衍生物。


4.一种载体，其特征在于，其包含了权利要求3所述的多聚核苷酸。


5.一种宿主细胞，其特征在于，其转染了权利要求4所述的载体。


6.一种药物，其特征在于，所述药物包含权利要求1所述的RHAMM拮抗多肽或权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄来强，代小勇，陈华清，林高扬，卢淑芬，王丽君，
申请(专利权)人：清华大学深圳国际研究生院，
类型：发明
国别省市：广东;44