一种同时检测血清和尿液中视黄醇结合蛋白的试剂盒制造技术

本申请公开了一种同时检测血清和尿液中视黄醇结合蛋白的试剂盒，医学体外诊断技术领域。所述试剂盒包括试剂R1和试剂R2；试剂R1包括以下组分：缓冲液、促凝剂、氯化钠、表面活性剂、保护剂、防腐剂、视黄醇结合蛋白生物素标记抗体；试剂R2包括以下组分：缓冲液、亲和素、胶乳微球、表面活性剂、防腐剂。本申请应用生物素与亲和素之间高亲合力的牢固结合以及多级放大效应的原理，极大地提高了检测试剂盒的灵敏度。本申请试剂盒的检测线性范围为0.5‑150mg/L，最高可检测浓度为200mg/L的血液样本，最低可检测浓度为0.02 mg/L的尿液样本。

【技术实现步骤摘要】
一种同时检测血清和尿液中视黄醇结合蛋白的试剂盒
本申请涉及医学体外诊断
，特别涉及一种同时检测血清和尿液中视黄醇结合蛋白的试剂盒。
技术介绍
视黄醇结合蛋白(Retinol-BindingProtein,RBP)是肝脏分泌的一种低分子量蛋白(21000kD)，是血液中维生素的转运蛋白，广泛分布于血液、脑脊液、尿液及其他体液中。测定视黄醇结合蛋白能早期发现肾小管的功能损害，并能灵敏反映肾近曲小管的损害程度，可作为肾功能早期损害和监护治疗的指标。正常情况下，RBP在尿中稳定性强，不易分解，不受pH和血压干扰，RBP排量甚微(100μg/d)。血浆中的RBP约有90％与甲状腺素结合前蛋白结合，形成高分子蛋白复合物，故而不被肾小球滤过膜滤过，当视黄醇被转运到靶细胞后，RBP便游离到血浆中，迅速被肾小球滤过，几乎全部被肾近曲小管重吸收而分解。但在肾近曲小管损伤时，RBP尿排量明显增加，故尿RBP排量增加可作为肾近曲小管损伤的标志物。血浆中RBP降低常见于维生素A缺乏症、低蛋白血症、吸收不良综合征、肝疾病(除外营养过剩性脂肪肝)、阻塞性黄疸、甲状腺功能亢进症、感染症、外伤等疾病。因此同时检测血、尿RBP可判断部分肾脏疾病的类型和动态监测受损程度，与其他项目联合检查更能为肾脏损伤部位及程度提供准确鉴别的诊断依据。目前临床对RBP4的检测方法主要都是基于免疫学，利用抗原抗体的特异性结合，定量检测血液中RBP4含量，比如酶联免疫吸附测定法、化学发光法、免疫比浊法。随着检测技术的进步以及临床检测需求的增大，前两种方法由于费用高或操作繁琐、周期长等劣势，逐渐淡出临床市场。而伴随着全自动生化分析仪的普及，生化比浊法凭借反应时间短，精密度好，易于自动化等优点，成为临床上主流检测方法。常规的免疫比浊法会出现假阴性、假阳性等缺点而且灵敏度较低，而采用胶乳增强免疫比浊法，虽然借助包被了特异性兔多抗的“胶乳”介质在一定程度上提高了灵敏度，但缺乏级联放大效应，在对尿液中RBP进行检测时，由于尿液中RBP含量较血清中低的多，依旧无法保证检测低值的准确度，所以，需要更高灵敏度的检测试剂。
技术实现思路
针对相关的视黄醇结合蛋白检测试剂灵敏度较低的问题，本申请提供一种同时检测血清和尿液中视黄醇结合蛋白的试剂盒。本申请提供的一种同时检测血清和尿液中视黄醇结合蛋白的试剂盒，是通过以下技术方案得以实现的。一种同时检测血清和尿液中视黄醇结合蛋白的试剂盒，包括试剂R1和试剂R2；所述试剂R1包括以下组分：视黄醇结合蛋白生物素标记抗体0.1-0.2mg/ml；所述试剂R2包括以下组分：优选的，试剂1中生物素标记抗体浓度与试剂2中亲和素的浓度比为4-6:1。通过采用上述技术方案，本申请在借助胶乳介质增强免疫比浊法灵敏度的基础上，进一步引入生物素-亲和素系统，实现反应信号的级联放大，从而提高检测试剂盒的灵敏度和准确度。具体的，本申请试剂R1中生物素与视黄醇结合蛋白抗体结合，形成生物素标记的视黄醇结合蛋白抗体，结合后的抗体不仅保持了大分子物质的原有生物活性，而且比恬度高，具多价性。同时，本申请试剂R2中偶联亲和素的胶乳微球中的每个亲和素分子有四个生物素结合部位，可同时以多价形式结合生物素化的黄醇结合蛋白抗体，当样品中视黄醇结合蛋白与黄醇结合蛋白抗体结合后，结合物体积被多级放大，光通过后，透射光和散射光的强度变化更为显著，从而极大地提高检测方法的灵敏度。另外，亲和素与生物素间的结合具有极高的亲和力，其反应呈高度专一性。因此，生物素-亲和素系统的多层次放大作用在提高灵敏度的同时，并不增加非特异性干扰。而且，生物素-亲和素系统结合特性不会因反应试剂的高度稀释而受影响，可最大限度地降低反应试剂的非特异作用。在稳定性方面，亲和素结合生物素的亲和常数可为抗原-抗体反应的百万倍，二者结合形成复合物的解离常数很小，呈不可逆反应性；而且酸、碱、变性剂、蛋白溶解酶以及有机溶剂均不影响其结合。因此，生物素-亲和素系统的产物稳定性高，从而可降低操作误差，提高测定的精确度。综上所述，本申请应用生物素与亲和素之间高亲合力的牢固结合以及多级放大效应的原理提供了一种灵敏度高、特异性强、重复性好，准确度高、操作简便快捷，成本低的胶乳增强免疫比浊法试剂盒，本申请试剂盒可同时测定血液和尿液中的视黄醇结合蛋白的含量，检测线性范围为0.5-150mg/L，最高可检测浓度为200mg/L的血液样本，最低可检测浓度为0.02mg/L的尿液样本。可选的，所述试剂盒还包括校准品和质控品，所述校准品和质控品为含有不同浓度的视黄醇结合蛋白抗原的样品。通过采用上述技术方案，本申请试剂盒中的校准品用于定标曲线的绘制，对检测样本进行检测时，采用全自动生化分析仪测定样本吸光度变化值并将其带入定标曲线便可得到待测样本的浓度，检测方法简单；本申请试剂盒中的质控品用于指示试剂盒中试剂R1和R2的有效性，从而确保检测结果具有较好的重复性，提高检测结果的准确性和可靠性。可选的，所述校准品和质控品中，视黄醇结合蛋白抗原稀释液包括以下组分：通过采用上述技术方案，本申请采用以上组分的视黄醇结合蛋白抗原稀释液，一方面，可以将视黄醇结合蛋白抗原稀释到合适的工作浓度，另一方面可以为视黄醇结合蛋白抗原提供一个稳定的贮存、工作环境，降低视黄醇结合蛋白抗原变性的发生率，从而绘制出更加准确的定标曲线，更真实的反应试剂的有效性程度。可选的，所述缓冲液选用所述缓冲液选用tris缓冲液、三乙醇胺、硼酸硼砂、HEPES缓冲液的一种或几种。优选的，试剂R1和试剂R2选用pH7.2-7.4的硼酸硼砂缓冲液；视黄醇结合蛋白抗原稀释液选用pH7.2的tris缓冲液。通过采用上述技术方案，本申请的缓冲液能够很好的维持溶液的稳定性，提高试剂盒的使用寿命，提高检测结果的准确性。可选的，所述促凝剂选用PEG6000、PEG8000、PEG10000的一种或几种。优选的，所述促凝剂选用PEG6000。通过采用上述技术方案，本申请的促凝剂可以采用以上分子量的聚乙二醇，将其加入到试剂R1中，可与表面活性剂、保护剂和防腐剂共同作用，从而提高试剂R1的稳定性和均一性。可选的，所述表面活性剂选用吐温20、吐温80、曲拉通100、BrijTML23聚氧乙烯月桂醚的一种或几种。优选的，所述表面活性剂选用吐温20。通过采用上述技术方案，本申请试剂R1和试剂R2中均加入上述表面活性剂中的一种或几种，表面活性剂的加入可以使试剂中的各组分充分分散，提高试剂的均一性，降低沉淀的形成量。可选的，所述保护剂选用蔗糖、海藻糖、PEG6000、牛血清白蛋白中的一种或几种。优选的，所述试剂R1中的保护剂选用蔗糖；所述视黄醇结合蛋白抗原稀释液中的保护剂选用牛血清白蛋白。通过采用上述技术方案，本申请在试剂R1和视黄醇结合蛋白抗原稀释液中还加入保护剂，可以有效提高视黄醇结合蛋白生物素标记抗体、视黄醇结合蛋白抗原的稳定性，防止抗原、抗本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种同时检测血清和尿液中视黄醇结合蛋白的试剂盒，其特征在于：包括试剂R1和试剂R2；/n所述试剂R1包括以下组分：/n缓冲液50-100mmol/L；/n促凝剂10-30g/L；/n氯化钠9 g/L；/n表面活性剂0.5-1 g/L；/n保护剂20-50g/L；/n防腐剂0.5-1g/L；/n视黄醇结合蛋白生物素标记抗体0.1-0.2mg/ml；/n所述试剂R2包括以下组分：/n缓冲液 50-100mmol/L；/n亲和素 20-60ug/ml；/n胶乳微球 1g/L；/n表面活性剂 0.5-1 g/L；/n防腐剂 0.5-1g/L。/n

【技术特征摘要】
1.一种同时检测血清和尿液中视黄醇结合蛋白的试剂盒，其特征在于：包括试剂R1和试剂R2；
所述试剂R1包括以下组分：
缓冲液50-100mmol/L；
促凝剂10-30g/L；
氯化钠9g/L；
表面活性剂0.5-1g/L；
保护剂20-50g/L；
防腐剂0.5-1g/L；
视黄醇结合蛋白生物素标记抗体0.1-0.2mg/ml；
所述试剂R2包括以下组分：
缓冲液50-100mmol/L；
亲和素20-60ug/ml；
胶乳微球1g/L；
表面活性剂0.5-1g/L；
防腐剂0.5-1g/L。


2.根据权利要求1所述的一种同时检测血清和尿液中视黄醇结合蛋白的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括校准品和质控品，所述校准品和质控品为含有不同浓度的视黄醇结合蛋白抗原的样品。


3.根据权利要求2所述的一种同时检测血清和尿液中视黄醇结合蛋白的试剂盒，其特征在于：所述校准品和质控品中，视黄醇结合蛋白抗原稀释液包括以下组分：
缓冲液50-100mmol/L；
氯化钠9g/L；
保护剂5-10g/L；
防腐剂0.5-1g/L。


4.根据权利要求1-3任一所述的一种同时检测血清和尿液中视黄醇结合蛋白的试剂盒，其特征在于：所述缓冲液选用tris缓冲液、三乙醇胺、硼酸硼砂...

【专利技术属性】
技术研发人员：王艳新，吴鸣月，张望，常缘荣，
申请(专利权)人：北京丹大生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11