一种人肝素结合蛋白免疫比浊检测试剂及其用途制造技术

本申请的实施例公开了一种用于检测样品中肝素结合蛋白的试剂盒。所述试剂盒包括：用于预处理样品的预处理试剂和用于识别肝素结合蛋白的识别试剂，所述预处理试剂包括溶血剂和电解质，其中，所述溶血剂是浓度为1‑3mg/mL的TritonX‑100，所述电解质是浓度为30‑60mg/mL的氯化钠，并且所述预处理试剂的pH值为5.5‑6.5。所述试剂盒可使用全血样品检测肝素结合蛋白浓度，检测所需的采血量少，检测时间短。本申请的实施例还公开了此类试剂盒在定量检测肝素结合蛋白中的用途以及方法。

【技术实现步骤摘要】
一种人肝素结合蛋白免疫比浊检测试剂及其用途
本说明书涉及免疫测定领域，特别涉及一种人肝素结合蛋白免疫比浊检测试剂及其用途。
技术介绍
肝素结合蛋白(heparin-bindingprotein，HBP)又被称为CAP37或天青杀素,是中性粒细胞受到外界刺激释放产生的功能多样的颗粒蛋白。HBP可激活单核细胞和巨噬细胞，具有显著的抗菌活性、趋化特性、促使血管渗漏,使其成为新兴的感染性疾病相关生物标志物。一旦出现细菌性感染时，感染相关M蛋白与纤维蛋白原相结合，致使多行核白细胞被激活，引起大量HBP分泌。HBP广泛用于临床感染性疾病的诊断和鉴别诊断中在脓毒症患者的早期诊断和疗效监测中优势尤为明显,在尿路感染、细菌性脑膜炎、肺部感染等其他感染性疾病中也有一定应用。目前，国内外已有的肝素结合蛋白免疫比浊法测定试剂盒多适用于体外定量测定血清样本和血浆样本中肝素结合蛋白含量。为获得血清或血浆样本，需要采集的静脉血量较大，且采血后需要检验人员对全血样本进行预处理，不能直接进行检测，这使得分析仪器无法依托现有试剂盒进行全自动的分析测定，且整套检测流程耗时较长。
技术实现思路
根据本申请的一方面，提供一种用于检测样品中肝素结合蛋白的试剂盒，所述试剂盒包括：用于预处理样品的预处理试剂和用于识别肝素结合蛋白的识别试剂，所述预处理试剂包括溶血剂和电解质，其中，所述溶血剂是浓度为1-3mg/mL的TritonX-100，所述电解质是浓度为30-60mg/mL的氯化钠，并且所述预处理试剂的pH值为5.5-6.5。在一些实施例中，所述TritonX-100的浓度为2mg/mL。在一些实施例中，所述氯化钠的浓度为40mg/mL。在一些实施例中，所述样品为全血。在一些实施例中，所述样品为血清或血浆。在一些实施例中，所述预处理试剂还含有缓冲试剂，所述缓冲试剂选自磷酸、2-(N-吗啉代)乙磺酸、磷酸氢二钠-柠檬酸、哌嗪-1,4-二乙磺酸中的一种或几种的组合。在一些实施例中，所述缓冲试剂的浓度为5-100mmol/L。在一些实施例中，所述预处理试剂还包括加速剂聚乙二醇6000，其中聚乙二醇6000的浓度为10-50mg/mL。在一些实施例中，所述预处理试剂还包括防腐剂Proclin300，其中Proclin300的浓度为0.2-0.4mg/mL。在一些实施例中，所述用于识别肝素结合蛋白的识别试剂包括偶联有肝素结合蛋白抗体或其抗原结合片段的乳胶微球。在一些实施例中，所述人肝素结合蛋白抗体或其抗原结合片段在交联缓冲液中通过化学交联剂偶联至乳胶微球表面；其中，所述化学交联剂选自1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺、N-羟基硫代琥珀酰亚胺、碳化亚胺、酰肼、异氰酸钾中的一种或多种的组合；所述交联缓冲液为不含氨基的缓冲液。在一些实施例中，所述交联缓冲液选自2-(N-吗啉代)乙磺酸、磷酸、N-(2-羟乙基)哌嚓-N/-(2-乙磺酸)、3-(N-吗啉代)-2-羟基丙磺酸中的一种或多种的组合。在一些实施例中，所述交联缓冲液的pH值范围为6.0-8.0。在一些实施例中，所述识别试剂还包括：电解质，所述电解质选自氯化钠、氯化钾、氯化镁、硫酸镁中的一种或多种的组合，所述电解质浓度为10-40mg/mL；稳定剂，所述稳定剂选自酪蛋白、甘露醇、壳聚糖、牛血清白蛋白中的一种或多种的组合，所述稳定剂浓度为1-5mg/mL；表面活性剂，所述表面活性剂选自吐温、脂肪醇聚乙二醇醚、辛基苯基聚氧乙烯醚中的一种或多种的组合，所述表面活性剂浓度为0.5-3mg/mL；及防腐剂，所述防腐剂选自叠氮钠、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯、Proclin系列中的一种或多种的组合，所述防腐剂浓度为0.5-4mg/mL。在一些实施例中，所述试剂盒还包括浓度已知的肝素结合蛋白校准品。根据本申请的另一方面，提供如上所述用于检测样品中肝素结合蛋白的试剂盒在定量检测肝素结合蛋白中的用途或方法，所述用途(方法)包括：i)将所述预处理试剂和所述样品混合后，在预设温度下孵育第一时长，得到孵育后的第一混合液；ii)将所述孵育后的第一混合液与所述识别试剂混合，持续第二时长的反应，得到第二混合液；iii)检测所述第二混合液的吸光度；以及iiii)基于所述步骤iii)检测到的所述吸光度，确定所述样品中肝素结合蛋白的浓度。在一些实施例中，所述步骤i)中所述样品与所述预处理试剂的体积比为0.1:100-20:100。在一些实施例中，所述步骤i)中的所述预处理试剂和所述步骤ii)中所述识别试剂的体积比为1:10-100:10。在一些实施例中，所述步骤iii)中预设测试主波长为500-700nm。优选的，预设测试主波长为650nm。在一些实施例中，所述第一时长为3-8分钟。在一些实施例中，所述第二时长为2-6分钟。附图说明本说明书将以示例性实施例的方式进一步说明，这些示例性实施例将通过附图进行详细描述。这些实施例并非限制性的，在这些实施例中，相同的编号表示相同的结构，其中：图1是根据本说明书一些实施例所示的试剂盒在在定量检测肝素结合蛋白中的用途或方法示意图；图2是根据本说明书实施例2所示的HBP反应标准曲线图；图3是根据本说明书实施例5所示的HBP全血/血浆同源样品HBP测定浓度回归分析散点图；图4是根据本说明书实施例5所示的HBP全血/血清同源样品HBP测定浓度回归分析散点图。具体实施方式为了更清楚地说明本说明书实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单的介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本说明书的一些示例或实施例，对于本领域的普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图将本说明书应用于其它类似情景。除非从语言环境中显而易见或另做说明，图中相同标号代表相同结构或操作。应当理解，本文使用的“系统”、“装置”、“单元”和/或“模块”是用于区分不同级别的不同组件、元件、部件、部分或装配的一种方法。然而，如果其他词语可实现相同的目的，则可通过其他表达来替换所述词语。如本说明书和权利要求书中所示，除非上下文明确提示例外情形，“一”、“一个”、“一种”和/或“该”等词并非特指单数，也可包括复数。一般说来，术语“包括”与“包含”仅提示包括已明确标识的步骤和元素，而这些步骤和元素不构成一个排它性的罗列，方法或者设备也可能包含其它的步骤或元素。本说明书中使用了流程图用来说明根据本说明书的实施例的系统所执行的操作。应当理解的是，前面或后面操作不一定按照顺序来精确地执行。相反，可以按照倒序或同时处理各个步骤。同时，也可以将其他操作添加到这些过程中，或从这些过程移除某一步或数步操作。本文使用下述缩写：TritonX-100，聚乙二醇辛基苯基醚；PB，磷酸缓冲液本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测样品中肝素结合蛋白的试剂盒，其特征在于，包括用于预处理样品的预处理试剂和用于识别肝素结合蛋白的识别试剂，所述预处理试剂包括溶血剂和电解质，其中：/n所述溶血剂是浓度为1-3mg/mL的TritonX-100，所述电解质是浓度为30-60mg/mL的氯化钠，并且所述预处理试剂的pH值为5.5-6.5。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于检测样品中肝素结合蛋白的试剂盒，其特征在于，包括用于预处理样品的预处理试剂和用于识别肝素结合蛋白的识别试剂，所述预处理试剂包括溶血剂和电解质，其中：
所述溶血剂是浓度为1-3mg/mL的TritonX-100，所述电解质是浓度为30-60mg/mL的氯化钠，并且所述预处理试剂的pH值为5.5-6.5。


2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述TritonX-100的浓度为2mg/mL。


3.如权利要求要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述氯化钠的浓度为40mg/mL。


4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述样品为全血。


5.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述样品为血清或血浆。


6.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述预处理试剂还含有缓冲试剂，所述缓冲试剂选自磷酸、2-(N-吗啉代)乙磺酸、磷酸氢二钠-柠檬酸、哌嗪-1,4-二乙磺酸中的一种或几种的组合。


7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述缓冲试剂的浓度为5-100mmol/L。


8.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述预处理试剂还包括加速剂聚乙二醇6000，其中聚乙二醇6000的浓度为10-50mg/mL。


9.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述预处理试剂还包括防腐剂Proclin300，其中Proclin...

【专利技术属性】
技术研发人员：顾金华，梁佳然，
申请(专利权)人：苏州优诺康生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32