改善睡眠的夏枯草有效成分的制备方法及药物制剂技术

本发明专利技术公开了改善睡眠的夏枯草有效成分的制备方法及药物制剂。该制备方法包括：夏枯草经溶剂提取，得夏枯草提取物；夏枯草提取物过HPD‑400大孔吸附树脂柱富集，洗脱，收集洗脱液，除去溶剂，得夏枯草洗脱物；夏枯草洗脱物上硅胶柱，将硅胶柱自柱头向底部平均切割成10～30段，采用薄层色谱法分别检识各段硅胶段，分别合并含有迷迭香酸或异迷迭香酸苷的硅胶段，甲醇洗脱，洗脱液除去溶剂，干燥，分别得迷迭香酸有效部位和异迷迭香酸苷有效部位；异迷迭香酸苷有效部位和迷迭香酸有效部位溶解，C

【技术实现步骤摘要】
改善睡眠的夏枯草有效成分的制备方法及药物制剂
本专利技术涉及一种改善睡眠的夏枯草有效成分的制备方法及药物制剂，具体涉及一种从夏枯草中提取迷迭香酸单体和异迷迭香酸苷单体的制备方法，及含有迷迭香酸单体和异迷迭香酸苷单体的药物制剂。
技术介绍
夏枯草(PrunellavulgarlsL.)为唇形科植物夏枯草的干燥成熟果穗或全草，性寒，味苦、辛，归肝、胆经，具有清火、明目、散结、消肿之功效，用于目赤肿痛、目珠夜痈、头痛眩晕、痹病、癌瘤和乳腺肿痛，甲状腺肿大，淋巴结结核、乳腺增生、高血压等症。夏枯草的化学成分复杂，主要有黄酮类、三萜皂苷类、苯丙素、甾体、有机酸、挥发油及糖等。CN101507751A公开了夏枯草的乙醇提取物具有明显的镇静、催眠活性。CN109646445A公开了夏枯草中的异迷迭香酸苷和迷迭香酸具有改善睡眠的作用。由于迷迭香酸在夏枯草中含量较大，因此目前现有技术多采用冷浸法、渗漉法、索氏提取法、超声波法、纤维素酶辅助法等方法提取迷迭香酸。如CN110540503A用纤维素酶辅助法提取夏枯草中迷迭香酸。再如CN108658769A结合响应面法和酶法提取夏枯草中迷迭香酸，提高迷迭香酸的得率，使得夏枯草中迷迭香酸的产率达到17.69mg/g以上。而现有技术对夏枯草中特征性成分异迷迭香酸苷的提取研究则较少，更未有报道以迷迭香酸和异迷迭香酸苷作为改善睡眠药效的物质基础进行提取，这阻碍了迷迭香酸和异迷迭香酸苷研发成临床新药的进度。因此，急需一种以迷迭香酸和异迷迭香酸苷作为指标成分，建立夏枯草改善睡眠作用的有效成分的制备方法。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的一个目的在于提供一种改善睡眠的夏枯草有效成分的制备方法。本专利技术以迷迭香酸和异迷迭香酸苷为指标，建立了改善睡眠作用的夏枯草有效成分的制备工艺，所得迷迭香酸单体和异迷迭香酸苷单体的产率高，纯度高，且工艺步骤少。本专利技术的另一个目的在于提供一种药物制剂。本专利技术采用如下技术方案实现上述目的。本专利技术提供一种改善睡眠的夏枯草有效成分的制备方法，包括如下步骤：1)提取步骤：取夏枯草，加溶剂提取，得夏枯草提取物；2)富集步骤：取夏枯草提取物上HPD-400大孔吸附树脂柱，先用3～5BV水除杂，再用4～7BV的20vol％～50vol％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，除去溶剂，得夏枯草洗脱物；3)纯化步骤：取夏枯草洗脱物，上硅胶柱，以1～2BV体积比为(7～8):(2～3):(0.2～0.3)的二氯甲烷-甲醇-水作为洗脱剂洗脱，挥干洗脱剂，将硅胶柱自柱头向底部平均切割成10～30段，采用薄层色谱法分别检识各段硅胶段，分别合并含有迷迭香酸或异迷迭香酸苷的硅胶段，甲醇洗脱，洗脱液除去溶剂，干燥，分别得迷迭香酸有效部位和异迷迭香酸苷有效部位；4)进一步纯化步骤：分别取异迷迭香酸苷有效部位和迷迭香酸有效部位，用20vol％～50vol％甲醇水溶液溶解，作为上样液，取C18反向硅胶柱纯化，分别得异迷迭香酸苷单体和迷迭香酸单体。根据本专利技术的制备方法，优选地，步骤1)中，所述溶剂为30vol％～70vol％的乙醇水溶液或水；所述提取的方法选自超声提取、保温提取、煎煮提取、浸泡提取或回流提取。根据本专利技术的制备方法，优选地，步骤1)中，所述提取的方法为80～100℃回流提取2～3次，每次1～2h。根据本专利技术的制备方法，优选地，步骤2)中，所述大孔吸附树脂柱是以95vol％乙醇水溶液浸泡12h后的大孔吸附树脂湿法装柱而得，并用4BV的95vol％乙醇水溶液动态清洗，再用水洗至无醇味；夏枯草提取物的上样重量与大孔吸附树脂柱的树脂体积比为(5～8)g：48mL。根据本专利技术的制备方法，优选地，步骤3)中，所述硅胶的目数为200～300目；硅胶柱的径高比为1:13。根据本专利技术的制备方法，优选地，步骤4)中，所述C18反向硅胶柱是以甲醇浸泡24h后的C18反向硅胶装入直径为2.70cm的色谱柱内，所得径高比为1:5的硅胶柱。根据本专利技术的制备方法，优选地，包括如下步骤：1)提取步骤：取夏枯草，向其加入16倍量的30vol％乙醇水溶液，100℃回流提取3次，每次1.5h，滤过，合并滤液，减压回收溶剂，蒸干，真空干燥，得夏枯草提取物；2)富集步骤：取夏枯草提取物，用水分散使溶液浓度为0.05g/mL，4000r/min离心15min，取上清液作为上样液，上样液过HPD-400大孔吸附树脂柱，夏枯草提取物的上样量与HPD-400大孔吸附树脂柱的树脂体积比为1:6g/mL，HPD-400大孔吸附树脂柱的径高比为1:10，先用3BV水除杂，再用5BV的30vol％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，蒸干，真空干燥，得夏枯草洗脱物；3)纯化步骤：取夏枯草洗脱物，加70vol％乙醇水溶液溶解，与200～300目的硅胶按质量比1:2拌样，干法装柱，所得硅胶柱的径高比为1:13，以1.6BV体积比为7:3:0.3的二氯甲烷-甲醇-水洗脱剂洗脱后，置阴凉避光处挥干洗脱剂，将硅胶柱自柱头向底部平均切割成20段，分别取各段硅胶适量，甲醇洗脱，洗脱液采用薄层色谱法检识，分别合并含有指标成分迷迭香酸或异迷迭香酸苷且杂质少的硅胶段，甲醇洗脱，减压回收溶剂，干燥，分别得迷迭香酸有效部位和异迷迭香酸苷有效部位；4)进一步纯化步骤：分别取异迷迭香酸苷有效部位和迷迭香酸有效部位100～200mg，用30vol％甲醇水溶液超声溶解，作为上样液；取甲醇浸泡24h后的C18反向硅胶，装入直径为2.70cm的色谱柱内，得径高比为1:5的硅胶柱；硅胶柱先用甲醇冲洗，再用体积比为40:60的甲醇-水洗脱剂冲洗，待液面降至柱料的上缘，将上样液沿着柱内缓缓加入，待液面降至柱料的上缘，用体积比为40:60的甲醇-水洗脱剂洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，蒸干，真空干燥，分别得异迷迭香酸苷单体和迷迭香酸单体。本专利技术还提供一种药物制剂，包括上述方法制备得到的改善睡眠的夏枯草有效成分，所述改善睡眠的夏枯草有效成分为异迷迭香酸苷单体和迷迭香酸单体，以及药学上可接受的载体。根据本专利技术的药物制剂，优选地，所述异迷迭香酸苷单体和迷迭香酸单体占药物制剂总重量的0.1％～99.9％，其余为药学上可接受的载体。根据本专利技术的制备方法，优选地，所述药物制剂的剂型为颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、喷剂、膜剂、膏剂、栓剂、凝胶剂、冻干剂或注射剂。本专利技术通过对工艺过程中的提取溶剂、提取溶剂量、提取温度、提取次数、提取时间、提取温度、大孔吸附树脂类型、上样量、除杂体积、洗脱溶剂、洗脱体积等参数进行合理的确定和选择，使制备得到的迷迭香酸单体的产率达到3mg/g以上，异迷迭香酸苷单体的产率达到1mg/g以上。且迷迭香酸单体和异迷迭香酸苷单体的纯度均达到90％以上。可见，本专利技术方法兼顾了迷迭香酸单体和异迷迭香酸苷单体的品质和产率。附图说明图1为实验例4制备的含有异迷迭香酸苷的流分与对本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种改善睡眠的夏枯草有效成分的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：/n1)提取步骤：/n取夏枯草，加溶剂提取，得夏枯草提取物；/n2)富集步骤：/n取夏枯草提取物上HPD-400大孔吸附树脂柱，先用3～5BV水除杂，再用4～7BV的20vol％～50vol％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，除去溶剂，得夏枯草洗脱物；/n3)纯化步骤：/n取夏枯草洗脱物，上硅胶柱，以1～2BV体积比为(7～8):(2～3):(0.2～0.3)的二氯甲烷-甲醇-水作为洗脱剂洗脱，挥干洗脱剂，将硅胶柱自柱头向底部平均切割成10～30段，采用薄层色谱法分别检识各段硅胶段，分别合并含有迷迭香酸或异迷迭香酸苷的硅胶段，甲醇洗脱，洗脱液除去溶剂，干燥，分别得迷迭香酸有效部位和异迷迭香酸苷有效部位；/n4)进一步纯化步骤：/n分别取异迷迭香酸苷有效部位和迷迭香酸有效部位，用20vol％～50vol％甲醇水溶液溶解，作为上样液，取C

【技术特征摘要】
1.一种改善睡眠的夏枯草有效成分的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)提取步骤：
取夏枯草，加溶剂提取，得夏枯草提取物；
2)富集步骤：
取夏枯草提取物上HPD-400大孔吸附树脂柱，先用3～5BV水除杂，再用4～7BV的20vol％～50vol％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，除去溶剂，得夏枯草洗脱物；
3)纯化步骤：
取夏枯草洗脱物，上硅胶柱，以1～2BV体积比为(7～8):(2～3):(0.2～0.3)的二氯甲烷-甲醇-水作为洗脱剂洗脱，挥干洗脱剂，将硅胶柱自柱头向底部平均切割成10～30段，采用薄层色谱法分别检识各段硅胶段，分别合并含有迷迭香酸或异迷迭香酸苷的硅胶段，甲醇洗脱，洗脱液除去溶剂，干燥，分别得迷迭香酸有效部位和异迷迭香酸苷有效部位；
4)进一步纯化步骤：
分别取异迷迭香酸苷有效部位和迷迭香酸有效部位，用20vol％～50vol％甲醇水溶液溶解，作为上样液，取C18反向硅胶柱纯化，分别得异迷迭香酸苷单体和迷迭香酸单体。


2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中，所述溶剂为30vol％～70vol％的乙醇水溶液或水；所述提取的方法选自超声提取、保温提取、煎煮提取、浸泡提取或回流提取。


3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述提取的方法为80～100℃回流提取2～3次，每次1～2h。


4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中，所述大孔吸附树脂柱是以95vol％乙醇水溶液浸泡12h后的大孔吸附树脂湿法装柱而得，并用4BV的95vol％乙醇水溶液动态清洗，再用水洗至无醇味；夏枯草提取物的上样重量与大孔吸附树脂柱的树脂体积比为(5～8)g：48mL。


5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3)中，所述硅胶的目数为200～300目；硅胶柱的径高比为1:13。


6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤4)中，所述C18反向硅胶柱是以甲醇浸泡24h后的C18反向硅胶装入直径为2.70cm的色谱柱内，所得径高比为1:5的硅胶柱。


7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)提取步骤：
取夏枯草，向其加入16倍量的30vol％乙醇水...

【专利技术属性】
技术研发人员：程发峰，姜艳艳，王雪茜，
申请(专利权)人：北京中医药大学，
类型：发明
国别省市：北京;11