一种利用工业色谱技术制备丹酚酸类化合物的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用工业色谱技术制备丹酚酸类化合物的方法，所述方法包括：丹参药材经提取、转化、大孔吸附树脂层析和工业色谱纯化步骤，得到高纯度丹酚酸类化合物。本发明专利技术所采用的工业色谱纯化工艺避免了大量有机萃取试剂的使用和繁杂的梯度洗脱工序，该方法可大量制备得到高纯度丹酚酸类化合物，适合工业化生产。

【技术实现步骤摘要】
一种利用工业色谱技术制备丹酚酸类化合物的方法
本专利技术涉及一种分离纯化技术，特别涉及一种利用工业色谱技术制备丹酚酸类化合物的方法。
技术介绍
丹参为唇形科鼠尾草属植物丹参SalviamiltiorrhizaBunge的干燥根及根茎，目前临床上其制剂广泛应用于缺血性心脑血管疾病的治疗。丹酚酸A是从丹参中提取的一种水溶性成分，近十多年的研究表明丹酚酸A对缺血心肌、游离脂肪酸导致的内皮细胞损伤、脑缺血再灌注损伤保护等方面有显著活性。丹酚酸A在大鼠体内外表现出抗血小板聚集作用，丹酚酸A能够剂量依赖性的抑制二磷酸腺苷(ADP)、花生四稀酸(AA)和凝血酶(THR)诱导的血小板聚集。丹酚酸A不仅对血小板聚集具有全面温和的抑制作用，而且对血栓引起的脑缺血具有显著的保护作用(王海港,孔令雷,王睿等.丹酚酸A与阿司匹林抗血栓作用的比较研究[J].药学学报,2019,54(2):301-307.)。丹酚酸A对心肌缺血再灌注损伤大鼠心率变异性(HRV)和心肌损伤的影响，发现丹酚酸A可增加HRV，减少心肌梗死面积，发挥心肌保护作用(赵国胜,杨会杰,左保华等.川穹嗪和丹参对大鼠心脏氧反常保护作用的比较[J].天津医药,1996,24(5):289-292.)。丹酚酸A可显著降低实验性高脂血症大鼠血中总胆固醇、低密度脂蛋白水平，并对游离脂肪酸导致的内皮细胞损伤具有明显的保护作用(杨秀颖,强桂芬,宫丽丽等.丹酚酸A调节高脂血症大鼠血脂水平并保护游离脂肪酸导致的内皮细胞损伤[J].中国新药杂志,2013,22(24):2869-2873.)。丹酚酸A尾静脉注射可以显著降低可溶性环氧化物水解酶(sEH)在MCAO大鼠海马CA1区的表达，同时降低sEH活性从而上调MCAO大鼠血液和脑组织中环氧十二碳三稀酸(ETT)的水平，减少MCAO大鼠脑梗死体积，提示丹酚酸A通过抑制sEH对缺血性损伤发挥保护作用(WangSB,PangXB,ZhaoY,etal.ProtectionofsalvianolicacidAonratbrainfromischemicdamageviasolubleepoxidehydrolaseinhibition[J].JournalofAsianNaturalProductsResearch,2012,14(11):1084-1092.)。丹酚酸A对缺血心肌、游离脂肪酸导致的内皮细胞损伤、脑缺血再灌注损伤有显著保护作用。研究表明，SAA在体内主要经肝脏的儿茶酚氧位甲基转移酶(Catechol-O-methyl-transferase，COMT)和尿苷二磷酸葡醛酸转移酶(Uridine-diphosphateglucuronosyltransferases，UGTs)代谢，生成包括葡醛酸和甲基结合在内的多种Ⅱ相结合代谢产物，成为其发挥体内药效作用的直接物质基础。许卉等利用具有高儿茶酚氧位甲基转移酶(COMT)活力的大鼠肝细胞液体外温孵代谢反应，首次制备了4种丹酚酸A(SAA)的甲基结合代谢物，其中就包括3-甲氧基丹酚酸A(许卉，李艳丽，田翠红等.丹酚酸A甲基结合代谢物的制备与结构鉴定[J].分析学研究报告，2014,42(1)：65-70.)。因此制备丹酚酸A的大鼠体内代谢产物3-甲氧基丹酚酸A用于心脑血管疾病治疗相关活性筛选和药物研发具有重要的意义。目前报道的只有许卉等利用具有高儿茶酚氧位甲基转移酶(COMT)活力的大鼠肝细胞液体外温孵代谢反应的方法制备得到少量纯度大于95％的3-甲氧基丹酚酸A用于结构鉴定，该方法不适合工业化生产。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足，本专利技术提供了一种利用工业色谱技术制备丹酚酸类化合物3-甲氧基丹酚酸A的制备方法，该方法可大量制备得到纯度大于98％的3-甲氧基丹酚酸A，适合工业化生产，可以满足用于药理研究以及药物制剂生产的需求。本专利技术提供一种利用工业色谱技术制备丹酚酸类化合物3-甲氧基丹酚酸A的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：(1)提取：取丹参药材，粉碎，加入药材重量的6～12倍的水，加热提取，提取液浓缩，醇沉，过滤；(2)转化：步骤(1)所述的滤液浓缩至溶液中乙醇浓度≤5％，调pH至3.0～4.5，100～120℃反应3.0～4.5h，冷却，得转化液；(3)纯化：步骤(2)所述的转化液经过大孔吸附树脂柱层析和工业色谱纯化。优选的，步骤(1)中，水为纯化水或饮用水；和/或，提取温度为70～85℃；和/或，提取时间为不小于1h；和/或，提取次数不少于3次；和/或，提取液浓缩温度为60～65℃；和/或，提取液浓缩至相对密度1.05～1.15，优选为1.07～1.08；和/或，所述醇沉使用溶剂为乙醇；调至乙醇浓度65％-75％(V/V)，常温静置24小时以上；其中优选为调至乙醇浓度70％-72％(V/V)。更优选的，步骤(1)为：取丹参药材，粉碎，加入药材重量的6-12倍的纯化水或饮用水，提取温度为70～85℃，提取数次(如3次)，每次不小于1h。优选的，步骤(2)为，将步骤(1)滤液在60～65℃浓缩至无醇味，用盐酸调pH至3.0～4.5，100～120℃反应3.0～4.5h。优选的，步骤(3)中，大孔吸附树脂柱层析步骤为：转化液浓缩至相对密度1.02-1.05，采用乙醇-水混合溶剂体系进行大孔吸附树脂柱层析，合并洗脱液，浓缩，得3-甲氧基丹酚酸A粗品。更优选的，大孔吸附树脂为苯乙烯型大孔吸附树脂；和/或，乙醇-水混合溶剂体系为30％～60％(V/V)乙醇水溶液。优选的，步骤(3)中，工业色谱柱纯化步骤为：将3-甲氧基丹酚酸A粗品用20％～30％(V/V)甲醇水溶液溶解，上样于工业色谱柱，用甲醇-水混合溶剂体系或甲醇-水-甲酸混合溶剂体系进行洗脱，合并洗脱液，浓缩。更优选的，工业色谱的填料为ODS-AQC18、XAquaC18等反向C18填料；和/或，工业色谱柱为动态轴向压缩工业色谱柱系统；和/或，甲醇-水-甲酸混合溶剂体系为体积比为(20～60)：(40～80)：(0.01～0.1)的甲醇-水-甲酸混合溶液。优选的，步骤(3)为a.大孔吸附树脂柱层析：转化液浓缩至相对密度1.02-1.05，进行大孔吸附树脂柱层析用30％-60％(V/V)乙醇-水溶液洗脱，合并洗脱液，浓缩，得3-甲氧基丹酚酸A粗品；b.工业色谱柱纯化：将3-甲氧基丹酚酸A粗品用20％～30％(V/V)甲醇-水溶液溶解，上样于工业色谱柱，用体积比为(20～60)：(40～80)：(0.01～0.1)的甲醇-水-甲酸混合溶液进行洗脱，合并洗脱液，浓缩。更优选的，步骤(3)为：a.大孔吸附树脂柱层析：转化液浓缩至相对密度1.02-1.03，进行大孔吸附树脂柱层析用35％-55％(V/V)乙醇:水溶液洗脱，合并洗脱液，浓缩，得3-甲氧基丹酚酸A粗品；b.工业色谱柱纯化：将3-甲氧基丹酚酸A粗品用适量20％～30％(V/V)甲醇水溶液溶解，将粗本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用工业色谱技术制备丹酚酸类化合物3-甲氧基丹酚酸A的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：/n(1)提取：取丹参药材，粉碎，加入药材重量的6～12倍的水，加热提取，提取液浓缩，醇沉，过滤；/n(2)转化：步骤(1)所述的滤液浓缩至溶液中乙醇浓度≤5％，调pH至3.0～4.5，100～120℃反应3.0～4.5h，冷却，得转化液；/n(3)纯化：步骤(2)所述的转化液经过大孔吸附树脂柱层析和工业色谱纯化。/n

【技术特征摘要】
1.一种利用工业色谱技术制备丹酚酸类化合物3-甲氧基丹酚酸A的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：
(1)提取：取丹参药材，粉碎，加入药材重量的6～12倍的水，加热提取，提取液浓缩，醇沉，过滤；
(2)转化：步骤(1)所述的滤液浓缩至溶液中乙醇浓度≤5％，调pH至3.0～4.5，100～120℃反应3.0～4.5h，冷却，得转化液；
(3)纯化：步骤(2)所述的转化液经过大孔吸附树脂柱层析和工业色谱纯化。


2.根据权利要求1所述的制备方法，步骤(1)中，
水为纯化水或饮用水；
和/或，提取温度为70～85℃；
和/或，提取时间为不小于1h；
和/或，提取次数不少于3次；
和/或，提取液浓缩温度为60～65℃；
和/或，提取液浓缩至相对密度1.05～1.15；
和/或，所述醇沉使用溶剂为乙醇；调至乙醇浓度65％～75％(V/V)，常温静置24小时以上。


3.根据权利要求1所述的制备方法，步骤(1)为：取丹参药材，粉碎，加入药材重量的6～12倍的纯化水或饮用水，提取温度为70～85℃，提取数次(如3次)，每次不小于1h。


4.根据权利要求1所述的制备方法，步骤(2)为，将步骤(1)滤液在60～65℃浓缩至无醇味，用盐酸调pH至3.0～4.5，100～120℃反应3.0～4.5h。


5.根据权利要求1所述的制备方法，步骤(3)中，大孔吸附树脂柱层析步骤为：转化液浓缩至相对密度1....

【专利技术属性】
技术研发人员：张毅，刘艳红，黄冰峰，王章伟，谢标鹏，古丽萍，张九月，魏勇翔，周舟，余水平，
申请(专利权)人：江西青峰药业有限公司，
类型：发明
国别省市：江西;36