一种丹酚酸A的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种丹酚酸A制备方法，包括以下步骤：将中低压树脂纯化并萃取的丹酚酸A通过正相硅胶纯化、结晶、萃取并冷冻干燥。该方法具有成本低、分离纯化简单，易于操作、利于工业化生产，最终得到高含量、高纯度的丹酚酸A的特点。点。

【技术实现步骤摘要】
一种丹酚酸A的制备方法


[0001]本专利技术涉及药物制备领域，具体涉及一种丹酚酸A的制备方法。

技术介绍

[0002]丹酚酸A(Salvianicacid A)是唇形科植物丹参药材中所含的一种水溶性酚酸类化合物，在药材中含量极低，最早由黎莲娘教授于1984年从丹参中分离得到(Li Lian-Niang,etal.Planta Medica,1984,50:227)。丹酚酸A是目前已知的最强的抗氧化性化合物之一，在抗氧化、心肌缺血保护、抗血栓、神经保护、抗肝纤维化、防治糖尿病等多个方面具有广泛的药理活性(杜冠华,裘月,张均田.丹酚酸A对大鼠心肌缺血再灌注性损伤的保护作用[J].1995,(10):731；任梓华.丹酚酸A的药理作用研究进展[J].医学信息,2013(1):322-322等)。其结构式如下：
[0003][0004]现有大量关于丹酚酸A制备方法的专利和文献，如：1)CN101041620A公开的丹参丹酚酸A的制备方法，其丹酚酸A为从药材中提取后直接进行纯化所得，该法由于药材中丹酚酸A含量极低，此法制备所得最终产品纯度偏低，生产成本较高，且萃取溶剂选用的多为二类溶剂，存在安全性隐患，上述因素均不利于工业化生产及制备。2)CN103570548A公开的一种丹酚酸A的制备方法，此工艺解决了丹酚酸A来源问题，但由于提取液未经醇沉纯化除杂直接进行加热反应，存在如下不利因素：提取液中含有蛋白质、胶体及多糖等物质，加热反应会与丹酚酸A结合，增加后续分离难度，减少后续色谱填料使用寿命，从而增加生产成本。3)CN103242161A公开的一种制备丹酚酸A的方法中对加热反应生产丹酚酸A的途径及条件未做深入的研究，且最终制备得到的丹酚酸A纯度仅达到90％，远远低于现在新药研究过程中对原料药的要求。4)CN103044251A，该方法转化过程中加入催化剂(如氯化锌)，丹酚酸A采取微波真空干燥，且采用了聚酰胺纯化，聚酰胺是一种高分子化合物，多为粉末状物质。颗粒大小不均一，使用前多需要滤去细粉并进行活化处理去除产品自身残留的杂质，使用过程较复杂，不利于产业化生产。
[0005]综上所述，现有技术中，虽然有的丹酚酸A的提取和收率有一定的提高，但仍存在分离纯化难度大、操作繁琐且不利于工业化/产业化生产、成本高、最终成品纯度及含量偏低的问题。

技术实现思路

[0006]为了克服现有技术的不足，本专利技术提供一个低成本、分离纯化简单，易于操作、利于工业化生产，最终得到高含量、高纯度的丹酚酸A的制备方法。
[0007]本专利技术提供一种高纯度、高含量的丹酚酸A的制备方法，包括如下步骤：
[0008](1)中低压树脂纯化步骤：取丹酚酸A转化液，以1CV
·
h-1
～3CV
·
h-1
的流速通过已处理合格的苯乙烯型大孔吸附树脂柱，树脂用量为M
丹酚酸A
:M
大孔吸附树脂
＝1:35～1:60，径高比＝1:5～1:10。以2CV
·
h-1
～4CV
·
h-1
流速，依次用水洗脱3～5CV，15～30％酸性乙醇(pH＝2.5～3.5)洗脱8～12CV，35～55％酸性乙醇(pH＝2.5～3.5)洗脱4～8CV，分流份收集35～55％酸性乙醇洗脱液，HPLC检测各流份纯度，合并纯度≥80％流份，得大孔吸附树脂纯化液；
[0009](2)丹酚酸A萃取步骤：取步骤(1)大孔吸附树脂纯化液，减压浓缩，用叔丁基甲基醚或乙酸乙酯萃取，得萃取液；
[0010](3)正相硅胶纯化：将步骤(2)的萃取液浓缩至含丹酚酸A浓度150mg/ml～250mg/ml，与硅胶拌样后，装入硅胶柱层析，采用环己烷:叔丁基甲基醚混合溶剂梯度洗脱，得正相硅胶纯化液；
[0011](4)结晶：将步骤(3)的正相硅胶纯化液浓缩，加水溶解，浓缩至溶液中丹酚酸A浓度为100mg/ml～300mg/ml，调pH值至3.5～3.8，样品置(0～15℃)环境中，静置析晶，滤过，得一次结晶粗品；
[0012](5)重结晶：将步骤(4)的一次结晶粗品重结晶纯化：
[0013](6)萃取、浓缩、干燥：将步骤(5)所得结晶加水溶解，边搅拌边滴加10％～20％酸溶液，调pH值至1.5～3.0；用叔丁基甲基醚萃取数次(例如3次)，合并萃取液，即得结晶萃取液；减压浓缩、冷冻真空干燥。
[0014]优选的，丹酚酸A转化液经丹酚酸B提取、醇沉、丹酚酸B转化步骤制得；
[0015]更优选的，其中：
[0016](a)提取：取丹参药材，破碎，过筛，加水75～85℃温浸，提取2-4次(例如3次，加水量6-10倍)，得丹酚酸B提取液；或取丹参药材，破碎，过筛，加20-40％乙醇回流提取，得丹酚酸B提取液；
[0017]和/或，(b)醇沉：取步骤(1)中提取液，在T≤65℃下(例如50℃～60℃)减压浓缩至浸膏相对密度1.10～1.15(优选1.10～1.15)，合并浓缩液；加90～95％乙醇调溶液中乙醇浓度70％～75％，10℃～35℃下静置醇沉24h以上，过滤，滤液减压浓缩至溶液中乙醇浓度≤5％，得醇沉浓缩液；
[0018]和/或，(c)转化步骤：取步骤(2)醇沉浓缩液，加纯化水稀释至丹酚酸B浓度约5～30mg/ml(优选5～15mg/ml)，调pH至3.5～4.0，在110～130℃下反应2.5～4.5h，冷却，离心，得丹酚酸A转化液。
[0019]优选的，步骤(1)中，苯乙烯型大孔吸附树脂为HPD-100S、LX-1180、D101B、HPD-300、D101-I或HPD-600，优选填料粒径为0.30～1.25mm，耐压为2～10bar(优选2～5bar)；
[0020]优选的，步骤(1)中，丹酚酸A转化液的浓度为1.59mg/ml～6.56mg/ml；
[0021]优选的，步骤(1)中，丹酚酸A转化液的上样流速为1CV速为-1
～2CV
·
h-1
；
[0022]优选的，步骤(1)中，洗脱液流速为2CV流速-1
～3CV
·
h-1
；
[0023]优选的，步骤(2)中，取丹酚酸A大孔吸附树脂纯化液，在T≤85℃下减压浓缩至溶
液乙醇浓度≤15％，用叔丁基甲基醚萃取多次，合并萃取液，除水；
[0024]更优选的，用叔丁基甲基醚萃取三次，和/或加无水硫酸钠静置除水2h以上。
[0025]优选的，步骤(3)中，纯化时采用的硅胶为300～400目，粒径为40～150μm(优选40～60μm，更优为40～45μm)，压力500～1500bar(优选800～1200bar)；
[0026]优选的，步骤(3)中，拌样硅胶用量满足：M
丹酚酸A
:M
硅胶
为1:2.0～1:3.0(优选1:2.0～1:2.5)，柱层析硅胶用量满足：M
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高纯度、高含量的丹酚酸A的制备方法，包括如下步骤：(1)中低压树脂纯化步骤：取丹酚酸A转化液，以1CV
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h-1
～3CV
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的流速通过已处理合格的苯乙烯型大孔吸附树脂柱，树脂用量为M
丹酚酸A
:M
大孔吸附树脂
＝1:35～1:60，径高比＝1:5～1:10，以2CV
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h-1
～4CV
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流速，依次用水洗脱3～5CV，15～30％酸性乙醇(pH＝2.5～3.5)洗脱8～12CV，35～55％酸性乙醇(pH＝2.5～3.5)洗脱4～8CV，分流份收集35～55％酸性乙醇洗脱液，HPLC检测各流份纯度，合并纯度≥80％流份，得大孔吸附树脂纯化液；(2)丹酚酸A萃取步骤：取步骤(1)大孔吸附树脂纯化液，减压浓缩，用叔丁基甲基醚或乙酸乙酯萃取，得萃取液；(3)正相硅胶纯化：将步骤(2)的萃取液浓缩至含丹酚酸A浓度150mg/ml～250mg/ml，与硅胶拌样后，装入硅胶柱层析，采用环己烷:叔丁基甲基醚混合溶剂梯度洗脱，得正相硅胶纯化液；(4)结晶：将步骤(3)的正相硅胶纯化液浓缩，加水溶解，浓缩至溶液中丹酚酸A浓度为100mg/ml～300mg/ml，调pH值至3.5～3.8，样品置(0～15℃)环境中，静置析晶，滤过，得一次结晶粗品；(5)重结晶：将步骤(4)的一次结晶粗品重结晶纯化：(6)萃取、浓缩、干燥：将步骤(5)所得结晶加水溶解，边搅拌边滴加10％～20％酸溶液，调pH值至1.5～3.0；用叔丁基甲基醚萃取数次(例如3次)，合并萃取液，即得结晶萃取液；减压浓缩、冷冻真空干燥。2.一种权利要求1所述的制备方法，其中丹酚酸A转化液经丹酚酸B提取、醇沉、丹酚酸B转化步骤制得；优选地，其中：提取：取丹参药材，破碎，过筛，加水75～85℃温浸，提取2-4次(例如3次，加水量6-10倍)，得丹酚酸B提取液；或取丹参药材，破碎，过筛，加20-40％乙醇回流提取，得丹酚酸B提取液；和/或，醇沉：取步骤(1)中提取液，在T≤65℃下(例如50℃～60℃)减压浓缩至浸膏相对密度1.05～1.15(优选1.10～1.15)，合并浓缩液；加90％～95％乙醇调溶液中乙醇浓度70％～75％，10℃～35℃下静置醇沉24h以上，滤过，滤液在T≤65℃下减压浓缩至溶液中乙醇浓度≤5％，得醇沉浓缩液；和/或，转化步骤：取步骤(2)醇沉浓缩液，加纯化水稀释至丹酚酸B浓度约5～30mg/ml(优选5～15mg/ml)，调pH至3.5～4.0，在110～130℃下反应2.5～4.5h，冷却，离心，得丹酚酸A转化液。3.一种权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，丹酚酸A转化液中丹酚酸A浓度为1.59mg/ml～6.56mg/ml，和/或，苯乙烯型大孔吸附树脂为HPD-100S、LX-1180、D101B、HPD-300、D101-I或HPD-600，优选填料粒径为0.30～1.25mm，耐压为2～10bar(优选2～5bar)。4.一种权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，取丹酚酸A大孔吸附树脂纯化液，在T≤85℃下减压浓缩至溶液乙醇浓度≤15％，用叔丁基甲基醚萃取多次，合并萃取液，除水；优选地，用叔丁基甲基醚萃取三次，和/或加无水硫酸钠静置除水2h以上。5.一种权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，
纯化采用的硅胶为300～400目，粒径为40～150μm(优选40～60μm)，压力为500～1500bar(优选800～1200bar)；和/或，拌样硅胶用...

【专利技术属性】
技术研发人员：王章伟，郭正友，王振，周鹏，刘尧奇，张毅，刘艳红，刘明颖，黄冰峰，蔡群芳，
申请(专利权)人：江西青峰药业有限公司，
类型：发明
国别省市：