一种蜂花粉致敏蛋白的鉴定方法及应用技术

本发明专利技术涉及分析检测技术领域，具体涉及一种蜂花粉致敏蛋白的鉴定方法及应用。本发明专利技术所提供的蜂花粉中致敏蛋白的鉴定方法包括：以蜂花粉冻干粉作为鉴定样品，对样品进行蛋白抽提、蛋白酶切、肽段除盐及质谱检测鉴定；在所述蛋白抽提中，对样品与蛋白抽提剂的混合物采取间歇式超声破碎的处理手段。本发明专利技术提供的鉴定方法解决了目前蜂花粉致敏原鉴定不完善的现状；同时，本发明专利技术所述鉴定方法获得蜂花粉潜在致敏原的氨基酸序列，并分析其被T细胞和B细胞识别的抗原表位，明确致敏属性。本发明专利技术提供的鉴定方法适用于不同植物来源的蜂花粉，特别是通过该鉴定方法还进一步明确了油菜蜂花粉中5种潜在的致敏蛋白，为后续质量安全控制提供了依据。

【技术实现步骤摘要】
一种蜂花粉致敏蛋白的鉴定方法及应用
本专利技术涉及分析检测
，具体涉及一种蜂花粉致敏蛋白的鉴定方法及应用。
技术介绍
蜂花粉因其丰富的营养价值、极高的食用和药用功效，目前已在食品、保健品、药品行业，以及畜牧养殖方面有所应用。随着蜂花粉适用范围的扩大，食用蜂花粉随即带来的安全问题也逐渐引起人们的关注。蜂花粉来源于植物花粉，虽然经过工蜂的处理，一部分致敏物质发生改变或降解，致敏性较其植物源花粉有所改善，但数据显示，仍有一部分易感人群食用蜂花粉后产生临床过敏症状。目前食品过敏原分析方法主要有酶联免疫法、聚合酶链法和质谱法；其中质谱法应用最为普及。如CN107064390A所述，检测方法主要分为两类：一是利用高分辨率质谱和解卷积等数据处理技术在蛋白水平进行研究；二是将蛋白酶解为肽段后进行定性和定量研究，在肽水平实现蛋白的定性和定量。第二种方法已经可以实现一次分析中同时检测多个同类型的过敏原，是当前致敏蛋白检测的主流技术。然而，由于蜂花粉成分的特殊性，现有常规的食品致敏蛋白分析鉴定方法难以准确鉴定出蜂花粉中致敏蛋白种类，严重本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种蜂花粉中致敏蛋白的鉴定方法，包括：以蜂花粉冻干粉作为鉴定样品，对样品进行蛋白抽提、蛋白酶切、肽段除盐及质谱检测鉴定；其特征在于，在所述蛋白抽提中，对样品与蛋白抽提剂的混合物采取间歇式超声破碎的处理手段。/n

【技术特征摘要】
1.一种蜂花粉中致敏蛋白的鉴定方法，包括：以蜂花粉冻干粉作为鉴定样品，对样品进行蛋白抽提、蛋白酶切、肽段除盐及质谱检测鉴定；其特征在于，在所述蛋白抽提中，对样品与蛋白抽提剂的混合物采取间歇式超声破碎的处理手段。


2.根据权利要求1所述的蜂花粉中致敏蛋白的鉴定方法，其特征在于，所述间歇式超声破碎的条件：超声3-4s，间隔3-4s，重复30-32次。


3.根据权利要求1或2所述的蜂花粉中致敏蛋白的鉴定方法，其特征在于，所述蜂花粉冻干粉的含水率控制在7%以下；
蜂花粉冻干粉的粒径尺寸为100~300目。


4.根据权利要求3所述的蜂花粉中致敏蛋白的鉴定方法，其特征在于，所述蛋白酶切包括沉淀蛋白的复溶；
所述复溶为将蛋白抽提得到的沉淀蛋白经尿素溶液复溶，得到复溶蛋白溶液；其中，所述尿素溶液的浓度为5-6mol/L。


5.根据权利要求4所述的蜂花粉中致敏蛋白的鉴定方法，其特征在于，所述蛋白酶切包括乙酰化反应；
所述乙酰化反应为，向所得复溶蛋白溶液中依次加入碳酸氢铵溶液、二硫苏糖醇溶液，室温反应1~2h，再加入碘乙酰胺溶液，室温避光反应1~2h；
其中，所述乙酰化反应的体系中，所述碳酸氢铵、二硫苏糖醇与碘乙酰胺的摩尔比为：（4~5）：1：5。


6.根据权利要求5所述的蜂花粉中致敏蛋白的鉴定方法，其特征在于，所述蛋白酶切包括酶解；
所述酶解采用质谱级胰酶，其用量为乙酰化反应所得蛋白溶液中蛋白质量的1/100~1/30。


7.根据权利要求1、2或4任一项所述的蜂花粉中致敏蛋白的鉴定方法，其特征在于，所述肽段除盐为对所述蛋白酶切得到的肽段进行除盐；
所述除盐采用洗脱柱Ziptips；
所述除盐的操作步骤如下：
首先，利用Ziptip活化液和平衡液分别...

【专利技术属性】
技术研发人员：李强强，吴黎明，薛晓锋，陶宇逍，尹舒婷，
申请(专利权)人：中国农业科学院蜜蜂研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11