一种用于水产养殖水体中土臭味物质检测的前处理方法技术

一种用于水产养殖水体中土臭味物质检测的前处理方法，属于水产养殖技术领域。步骤如下：对待测水产养殖池塘进行水体的采集并避光保存；取样，加入净化萃取包，净化萃取包的原料如下：丙基乙二胺、十八烷基硅烷、石墨化碳黑；涡旋，混匀，随后离心，取上清液体；加入四氯乙烯，超声波浴，随后离心；用色谱进样针从离心管底部准确吸取，直接进样。本发明专利技术所述方法通过优化分散式固相萃取材料使用量的配比，筛选最合适的分散式液相萃取有机溶剂，能够实现水产养殖水体中土臭味物质的净化、提取和浓缩，具有环境友好、节约成本、快速简易和批量化操作等优点。

A pretreatment method for detecting soil odor substances in aquaculture water body

【技术实现步骤摘要】
一种用于水产养殖水体中土臭味物质检测的前处理方法
本专利技术涉及水产养殖
，具体涉及一种用于水产养殖水体中土臭味物质检测的前处理方法。
技术介绍
水产养殖提供的水产品极大地满足了我国人民对蛋白质的需求，是维护国家粮食安全不可动摇的根基。然而，一些残留在水产品中的异味物质极大地影响了食用口感。这些异味物质主要以土臭味物质为主，主要包括土臭素、2-甲基异莰醇、2-异丁基-甲氧基吡嗪、2-异丙基-甲氧基吡嗪和2，3，6-三氯代茴香醚，其中对水产品土臭味贡献最大的，也是目前相关研究最多的就是土臭素和二甲基异莰醇。水产品土臭味与养殖水体中的含量关系密切，可以说，水体土臭味物质是水产品残留的最重要来源。土臭素和二甲基异莰醇进入水体后，一部分经鱼鳃进入血液后，进入鱼体，并在身体脂肪含量高的组织沉积；水体的土臭味物质还能直接被鱼体表皮肤吸收，通过渗透作用进入鱼体组织；另外，鱼类吞食的水中含有分泌土臭味物质的细菌及土臭味物质，这部分物质则透过肠上皮细胞进入鱼体。由上可见，为有效防控土臭味物质从水体向水产品中残留，开发水产养殖水体中残留的土臭味物质（土臭素和2-甲基异莰醇）的检测方法具有重要意义。气相色谱-质谱联用（GC-MS）已成为检测土臭味物质最重要的方法。在采集的水产养殖水体样品进入GC-MS检测前需要进行样品中土臭味物质的提取、净化和浓缩三个前处理步骤，目的是保证仪器检测的适用、纯净，以及合适的灵敏度。固相微萃取（SPME）就是集这三个步骤和三个优点于一体的一种前处理方法，既简单、方便，又有很好的效果。因此，SPME和GC-MS联用的方法也是目前国家相关标准《生活饮用水臭味物质土臭素和2-甲基异莰醇检验方法》（GB/T32470-2016）使用的前处理和检测方法。然而，该方法有明显的缺点，导致其推广和使用难度大，那就是耗时和费钱。具体表现为，该方法使用时需要顶空萃取瓶密闭装载水体样品，电炉加热，并磁力搅拌至少30分钟以上。同时，瓶盖处插入固相微萃取的萃取纤维进行蒸发出土臭味物质的吸附。该前处理过程结束后，将萃取纤维插入GC-MS的进样口，手动进样。1个萃取纤维只能约处理30个样品。
技术实现思路
解决的技术问题：针对现有技术中存在的问题，本专利技术提出一种用于水产养殖水体中土臭味物质检测的前处理方法，通过优化分散式固相萃取材料使用量的配比，筛选最合适的分散式液相萃取有机溶剂，能够实现水产养殖水体中土臭味物质的净化、提取和浓缩，具有环境友好、节约成本、快速简易和批量化操作等优点。技术方案：一种用于水产养殖水体中土臭味物质检测的前处理方法，步骤如下：步骤一.对待测水产养殖池塘进行水体的采集，然后用水相、孔径为0.45µm滤膜过滤，置于待测样品瓶中4℃-7℃避光保存不超过一周；步骤二.从待测样品瓶中移取待测水体至锥形底的离心管中，随后加入净化萃取包，净化萃取包的原料按质量份配比如下：丙基乙二胺10-15份、十八烷基硅烷15-20份、石墨化碳黑15-20份；步骤三.涡旋，混匀，随后离心，取上清液体，并转移至锥形底的离心管中；步骤四.加入四氯乙烯，超声波浴，随后离心；步骤五.用色谱进样针从离心管底部准确吸取，直接进样。作为优选，所述步骤一中待测样品瓶为1L体积的广口玻璃瓶，取样时采用四角和中心均等取样混合的“五点法”取样原则。作为优选，所述步骤二中待测水体和净化萃取包的比值为（15-20mL）：（45-50g）。作为优选，所述步骤二中丙基乙二胺的粒径为40-70µm，十八烷基硅烷的粒径为40-70µm，石墨化碳黑的粒径为120-150目。作为优选，所述步骤三中涡旋，混匀2-4分钟，随后在10619g下离心5-8分钟，取上清液体12-18mL，并转移至锥形底的离心管中。作为优选，所述步骤四中加入四氯乙烯，超声波浴3-5分钟，随后10619g下离心3-5分钟，四氯乙烯与待测水体的比值为(8-10µL)：(15-20mL)。作为优选，所述步骤五中用色谱进样针从离心管底部准确吸取2µL，直接进样。有益效果：本专利技术不再使用固相微萃取的原有前处理思路，而是基于水产养殖水体本身的基质属性，利用分散式固相萃取与分散式液相萃取相结合方法，通过优化分散式固相萃取材料使用量的配比，筛选最合适的分散式液相萃取有机溶剂，实现水产养殖水体中土臭味物质的净化、提取和浓缩。本专利技术与已有前处理方法相比，优点是节约成本、快速简易和批量化操作。另外，本专利技术也同样具有环境友好的优点，即仅使用少量有机溶剂。附图说明图1为本专利技术所述用于水产养殖水体中土臭味物质检测的前处理方法工艺流程图；图2为实施例1处理后水体提取物的图谱特征图；图3为对比例1处理后水体提取物的图谱特征图。具体实施方式下面结合附图和具体实施例对本专利技术作进一步描述。实施例1一种用于水产养殖水体中土臭味物质检测的前处理方法，参见图1，步骤如下：（1）利用1L体积的广口玻璃瓶盛放待测水产养殖池塘无锡宜兴淡水中心罗非鱼养殖基地采集的水体，为无偏差和遵守均匀分布取样的原则，采用四角和中心均等取样混合的“五点法”取样原则。用水相、孔径为0.45µm滤膜过滤，4℃避光保存不超过一周，最好采集样品后立即进行前处理。（2）从待测样品瓶中准确移取15mL待测水体至锥形底的50mL离心管中，随后加入净化萃取包。该净化萃取包的材料和用量配方如下：丙基乙二胺（粒径为40-70µm）15g、十八烷基硅烷（粒径为40-70µm）15g、石墨化碳黑（粒径为120-150目）15g。使用净化萃取包的用途是吸附待测样品中溶解性的蛋白、油脂，以及其它碳水化合物类生物大分子等，使样品纯净，保证后续GC-MS谱图无过多杂峰干扰目标物质。（3）涡旋，混匀2分钟，随后在10619g下离心5分钟。取上清液体12mL，并转移至锥形底的15mL离心管中。（4）加入8µL四氯乙烯，超声波浴3分钟。随后10619g下离心3分钟。可见四氯乙烯沉降至离心管锥形底的底部，形成沉积相。使用四氯乙烯的用途是提取和浓缩水相中的土臭味物质，超声波浴的用途是分散四氯乙烯，保证提取剂与水相有足够大的接触面积，以此保证提取充分。（5）用色谱进样针从离心管底部准确吸取2µL，直接进样。通过上述前处理步骤进行验证检测，土臭素和2-甲基异莰醇的方法定量限分别为2和9ng/L，其变异系数分别为10.1%和10.4%。在添加有0.25µg/L土臭素和2-甲基异莰醇的空白水产养殖水体中，实际检出值分别为0.23±0.03和0.20±0.04µg/L，回收率分别为92.03±2.11%和80.34±7.21%。现有技术中土臭素和2-甲基异莰醇的回收率分别是90.03±1.21%和81.42±3.25%，与本方法类似，表明本方法能够给出与现有技术同等的质量水准。图谱特征参见图2，从图中的质量控制数据可以看出，本方法满足土臭素和2-甲基异莰醇的有效检测。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于水产养殖水体中土臭味物质检测的前处理方法，其特征在于，步骤如下：/n步骤一.对待测水产养殖池塘进行水体的采集，然后用水相、孔径为0.45 µm滤膜过滤，置于待测样品瓶中4℃ - 7℃避光保存不超过一周；/n步骤二.从待测样品瓶中移取待测水体至锥形底的离心管中，随后加入净化萃取包，净化萃取包的原料按质量份配比如下：丙基乙二胺10 -15 份、十八烷基硅烷15 - 20 份、石墨化碳黑15 - 20 份；/n步骤三. 涡旋，混匀，随后离心，取上清液体，并转移至锥形底的离心管中；/n步骤四. 加入四氯乙烯，超声波浴，随后离心；/n步骤五. 用色谱进样针从离心管底部准确吸取，直接进样。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于水产养殖水体中土臭味物质检测的前处理方法，其特征在于，步骤如下：
步骤一.对待测水产养殖池塘进行水体的采集，然后用水相、孔径为0.45µm滤膜过滤，置于待测样品瓶中4℃-7℃避光保存不超过一周；
步骤二.从待测样品瓶中移取待测水体至锥形底的离心管中，随后加入净化萃取包，净化萃取包的原料按质量份配比如下：丙基乙二胺10-15份、十八烷基硅烷15-20份、石墨化碳黑15-20份；
步骤三.涡旋，混匀，随后离心，取上清液体，并转移至锥形底的离心管中；
步骤四.加入四氯乙烯，超声波浴，随后离心；
步骤五.用色谱进样针从离心管底部准确吸取，直接进样。


2.根据权利要求1所述的一种用于水产养殖水体中土臭味物质检测的前处理方法，其特征在于，所述步骤一中待测样品瓶为1L体积的广口玻璃瓶，取样时采用四角和中心均等取样混合的“五点法”取样原则。


3.根据权利要求1所述的一种用于水产养殖水体中土臭味物质检测的前处理方法，其特征在于，所述步骤二中待测水体和净化萃...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋超，邹剑敏，陈家长，桂源，孟顺龙，陈曦，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院淡水渔业研究中心，
类型：发明
国别省市：江苏;32