蜂王浆新鲜度的生物标记物及其筛选方法技术

本发明专利技术提供一种蜂王浆新鲜度的生物标记物及其筛选方法。使用蛋白质组学分析平台，和超高效液相色谱串联飞行时间质谱，基于TQMS仪器分析，得到同时具备高易酶解性与高酶解后稳定性的候选MRJPs多肽。生物标记物包括：MRJP1的特异性标志多肽：YNGVPSSLNVISK，SEQ ID NO：1；MRJP2的特异性标志多肽：TLQMIAGMK，SEQ ID NO：2；MRJP 3的特异性标志多肽：LTVAGESFTVK，SEQ ID NO：3。本发明专利技术具有较高的准确度、精确度和灵敏度，并且稳定性强，适用于体现蜂王浆整体生物活性的新鲜度检测，尤其适用于蜂王浆原料和产品质量控制。该方法对规范蜂王浆质量评价，尤其是未来蜂王浆主蛋白产品市场的开拓，蜂王浆产业的健康发展具有重要现实意义。

Biomarker for freshness of royal jelly and its screening method

【技术实现步骤摘要】
蜂王浆新鲜度的生物标记物及其筛选方法
本专利技术涉及蜂王浆新鲜度的生物标记物及其筛选方法。
技术介绍
蜂王浆和蜂蜜是两种深受欢迎的蜂产品。蜂王浆，又称王浆和蜂乳，是由5~15日龄工蜂头部营养腺（包括脑后腺、咽下腺和上颚腺等）分泌的特殊白色乳状物质。蜂王浆是蜂王和3日龄内工蜂幼虫的专用食料，是决定蜜蜂雌性幼虫发育成为蜂王还是工蜂的关键食物因素。作为一种营养保健品，蜂王浆的活性和功能很多，显然其功能与其所含的生物活性成分有关，已知其主要成分包括蛋白质、碳水化合物、脂类和王浆酸等。近年来相关研究表明，蜂王浆中的主要生物活性在常温下会随储存时间下降，极易变质而失去营养功能。迄今为止十羟基葵烯酸（王浆酸，10-HDA）含量是目前我国和国际蜂王浆标准中衡量品质优劣的主要指标（GB9697-2008蜂王浆）。然而研究显示，在长期储存过程中，蜂王浆中的10-HDA含量非常稳定，并不适合作为代表蜂王浆新鲜度的指标[AntinelliJF，ZegganeS，RenéeDavico，etal.Evaluationof(E)-10-hydroxydec-2-enoic本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种蜂王浆新鲜度的生物标记物的筛选方法，其特征在于：/n1）预处理：将蜂王浆样品经DTT、IAA溶液预处理后，用重组牛胰蛋白酶酶解，得到王浆主蛋白（Major royal jelly proteins, MRJPs）的多肽溶液；/n2）数据分析：使用ProteinLynx Global Server（PLGS）蛋白质组学分析平台，将经超高效液相色谱串联飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF/MS）检测出的MRJPs多肽序列信息与从UniProt蛋白质数据库（www.uniprot.org）获取的MRJPs多肽序列理论信息比对分析，得到王浆粗蛋白酶解产物中MRJPs多肽的鉴别结果；将经UPLC-...

【技术特征摘要】
1.一种蜂王浆新鲜度的生物标记物的筛选方法，其特征在于：
1）预处理：将蜂王浆样品经DTT、IAA溶液预处理后，用重组牛胰蛋白酶酶解，得到王浆主蛋白（Majorroyaljellyproteins,MRJPs）的多肽溶液；
2）数据分析：使用ProteinLynxGlobalServer（PLGS）蛋白质组学分析平台，将经超高效液相色谱串联飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF/MS）检测出的MRJPs多肽序列信息与从UniProt蛋白质数据库（www.uniprot.org）获取的MRJPs多肽序列理论信息比对分析，得到王浆粗蛋白酶解产物中MRJPs多肽的鉴别结果；将经UPLC-Q-TOF/MS质谱分析得到MRJPs多肽参数导入超高效液相色谱串联三重四极杆质谱（UPLC-TQMS）仪器中，建立候选多肽的定量MRM分析方法，经检测得到69条候选多肽；
3）特征多肽筛选：基于TQMS仪器分析，对69条候选多肽作重复检测，初步剔除35条峰面积低于2000的低含量多肽；
建立MRJPs候选多肽的酶解时间与酶解程度的热力分析图，进一步筛选出同时具备高易酶解性与高酶解后稳定性的候选MRJPs多肽；高易酶解性多肽的标准是候选多肽的相对峰面积比值能在酶解2h内达到90％以上，高酶解后多肽稳定性的标准是候选多肽的相对峰面积比值在酶解24h后不小于70％；剔除候选多肽中的非特异性多肽，得到15条MRJPs候选多肽；
基于2小时最佳酶解时...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈立荣，江唯健，沈昊来，丁晨，
申请(专利权)人：杭州艾蜂健康科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33