一种代谢组学和脂质组学研究用微量样本的前处理方法及其检测方法技术

本发明专利技术属于组学分析方法技术领域，涉及一种代谢组学和脂质组学研究用微量样本的前处理方法及其检测方法。具体而言，该前处理方法包括对微量样本进行单相提取而得到代谢组学样本，然后进行双相提取而得到脂质组学样本；该检测方法包括配制代谢组学和脂质组学内标混合溶液，与微量样本同时进行前处理，然后进行代谢组学和脂质组学分析。该方法先后引入代谢组学内标和脂质组学内标，通过鉴定得到的物质种类来遴选同性质或同类型的内标作为参比基础，利用内标物质的峰面积和浓度分别计算样本中目标物质的浓度，能够同时获取代谢物和脂质的定性结果。

【技术实现步骤摘要】
一种代谢组学和脂质组学研究用微量样本的前处理方法及其检测方法
本专利技术属于组学分析方法
，涉及一种代谢组学和脂质组学研究用微量样本的前处理方法，以及基于该前处理方法构建的微量样本的检测方法。
技术介绍
代谢组学(metabolomics)是系统生物学的重要组成部分之一，以极性代谢物(即亲水性物质，通常为极性小分子化合物)为主要研究对象，大致可分为氨基酸类、能量代谢类、核苷酸类、碳水化合物类、辅酶因子类等。脂质组学(lipidomics)则是从代谢物组学衍生出来的独立学科，关注于脂质(即亲脂性物质)的研究，一般包括脂肪酸类、甘油脂类、甘油磷脂类、鞘脂类、固醇类(或称甾体类)、多聚异戊二烯醇类、糖脂类和聚酮类等8大类[1,2]。由于极性代谢物和脂质的化学性质差异较大，因而在组学研究的样本前处理过程中，代谢组学和脂质组学对于样本的提取试剂和提取方法也有所不同。比如，极性代谢物的提取溶剂以甲醇(MeOH)、乙腈(ACN)和水(H2O)等极性溶剂为主，而脂质的提取溶剂以二氯甲烷(DCM)、氯仿(TCM)、甲基叔丁基醚(MTBE)等本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种代谢组学和脂质组学研究用微量样本的前处理方法，其包括下列步骤：/n1)向微量样本中加入单相提取溶剂，振荡并于室温进行单相提取，低温离心，取出部分上清液，即为代谢组学样本；/n2)向剩余的上清液和残渣中加入双相提取溶剂，振荡并于冰浴中进行双相提取，低温离心，取出有机相，真空浓缩干燥，向浓缩物中加入复溶溶剂，涡旋混匀，低温离心，取出上清液，即为脂质组学样本。/n

【技术特征摘要】
1.一种代谢组学和脂质组学研究用微量样本的前处理方法，其包括下列步骤：
1)向微量样本中加入单相提取溶剂，振荡并于室温进行单相提取，低温离心，取出部分上清液，即为代谢组学样本；
2)向剩余的上清液和残渣中加入双相提取溶剂，振荡并于冰浴中进行双相提取，低温离心，取出有机相，真空浓缩干燥，向浓缩物中加入复溶溶剂，涡旋混匀，低温离心，取出上清液，即为脂质组学样本。


2.根据权利要求1所述的前处理方法，其特征在于，在步骤1)中，
所述单相提取溶剂为C1-4脂肪醇或其水溶液，优选甲醇或其水溶液，更优选甲醇；
所述微量样本与所述单相提取溶剂的用量比为1mg:4μL～1mg:10μL，优选1mg:5μL～1mg:8μL，更优选1mg:6μL；
所述部分上清液与所述单相提取溶剂的体积比为1:1.5～1:10，优选1:2～1:5，更优选1:3。


3.根据权利要求1或2所述的前处理方法，其特征在于，在步骤2)中，
所述双相提取溶剂由C1-4脂肪醇、酸水溶液和C1-4卤代烃组成，优选由体积比为5:1:10的C1-4脂肪醇、酸水溶液和C1-4卤代烃组成；其中，所述酸水溶液为甲酸水溶液、乙酸水溶液或盐酸，优选0.1～1M盐酸，更优选0.5～1M盐酸，最优选1M盐酸；所述C1-4脂肪醇优选甲醇；所述C1-4卤代烃优选氯仿；
所述微量样本与所述双相提取溶剂的用量比为1mg:10μL～1mg:20μL，优选1mg:15μL～1mg:18μL，更优选1mg:16μL；
所述复溶溶剂为C1-4脂肪醇中的一种或多种，优选甲醇和/或异丙醇，更优选体积比为1:4的甲醇/异丙醇混合溶剂；
所述微量样本与所述复溶溶剂的用量比为1mg:1μL～1mg:5μL，优选1mg:1.5μL～1mg:3μL，更优选1mg:2μL。


4.根据权利要求1至3中任一项所述的前处理方法，其特征在于，
步骤2)还包括在取出有机相和真空浓缩干燥之间进行的补充双相提取，包括：向取出有机相后剩余的残渣中加入补充双相提取溶剂，涡旋混匀，于冰浴中提取，低温离心，取出有机相，与双相提取后取出的有机相合并；其中
所述补充双相提取溶剂由C1-4脂肪醇和C1-4卤代烃组成，优选由甲醇和氯仿组成，更优选由体积比为1:2的甲醇和氯仿组成；
所述微量样本与所述补充双相提取溶剂的用量比为1mg:5μL～1mg:15μL，优选1mg:8μL～1mg:12μL，更优选1mg:10μL。


5.一种微量样本的代谢组学和脂质组学检测方法，其包括下列步骤：
1)取适量的多种代谢组学内标，分别加入水或C1-4脂肪醇，配制成多种单一代谢组学内标母液，再分别取适量的各种单一代谢组学内标母液，混合并用水或C1-4脂肪醇稀释，配制成代谢组学内标混合溶液；取适量的多种脂质组学内标，分别加入C1-4脂肪醇，配制成多种单一脂质组学内标母液，再分别取适量的各种单一脂质组学内标母液，混合并用C1-4脂肪醇稀释，配制成脂质组学内标混合溶液；
2)向微量样本中加入代谢组学内标混合溶液和C1-4脂肪醇或其水溶液，振荡并于室温进行单相提取，低温离心，取出部分上清液，即为代谢组学样本，备用；向剩余的上清液和残渣中加入脂质组学内标混合溶液、酸水溶液、C1-4卤代烃和C1-4脂肪醇，振荡并于冰浴中进行双相提取，低温离心，取出有机相，真空浓缩干燥，向浓缩物中加入复溶溶...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐英，任建洪，张永霞，谷从顺，戴贞丽，顾梦南，
申请(专利权)人：苏州帕诺米克生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32