一种基于降落PCR法的实验动物绿脓杆菌快速检测方法及试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种基于降落PCR法的实验动物绿脓杆菌快速检测方法及试剂盒，属于生物医药技术领域。本发明专利技术将实验动物盲肠内容物或者粪便用TE缓冲液混匀煮沸10min快速制备DNA模板，采用Touch Down PCR检测实验动物体内绿脓杆菌。与现有技术相比，本发明专利技术省去繁琐的试剂盒提取DNA程序，大大减少工作量，同时提高检测特异性和灵敏度。TE煮沸联合Touch Down PCR灵敏度高，样本含有3.35×10

【技术实现步骤摘要】
一种基于降落PCR法的实验动物绿脓杆菌快速检测方法及试剂盒
本专利技术属于医药生物
，具体涉及一种基于降落(TouchDown)PCR法的实验动物绿脓杆菌快速检测方法及试剂盒。
技术介绍
实验动物是生命科学、医学创新研究的重要组成部分，对保障人类健康、食品安全、生物安全等具有重要意义，实验动物已被广泛应用于生命健康相关的各种科研实验中，如产品质量检定、环境检测等。当前随着科学技术的发展，对实验动物质量提出越来越高的要求，其质量已成为制约性要素，直接影响科研数据的准确性和结论的可靠性，同时也会影响实验人员的健康。实验动物质量控制主要包括：遗传学质量控制、微生物学和寄生虫学质量控制、营养学质量控制、环境生态学质量控制和病理学质量控制等。其中微生物学的质量控制在国内实验动物生产和使用中出现问题状况最为突出。定期对实验动物进行微生物学检测能最大程度掌握动物健康状况，为实验动物微生物学质量控制提供重要的决策依据。现有的常规细菌检测需要采样、培养、染色、生化反应等多个实验步骤，操作繁琐，检测周期较长且灵敏度低，检测试剂使用有效期短，对本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于Touch Down PCR法的实验动物绿脓杆菌快速检测方法，其特征包括：针对绿脓杆菌ETA基因设计合成特异性引物，将待测实验动物的粪便或盲肠内容物使用TE缓冲液混匀，然后煮沸，完成DNA样本制备；/n采用Touch Down PCR法对制得的DNA样本进行绿脓杆菌检测，其中：/nTouch Down PCR法中PCR退火温度从70℃开始每个循环降低0.5℃进行20个循环直至达到60℃的退火温度，然后以该退火温度再进行20个循环。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于TouchDownPCR法的实验动物绿脓杆菌快速检测方法，其特征包括：针对绿脓杆菌ETA基因设计合成特异性引物，将待测实验动物的粪便或盲肠内容物使用TE缓冲液混匀，然后煮沸，完成DNA样本制备；
采用TouchDownPCR法对制得的DNA样本进行绿脓杆菌检测，其中：
TouchDownPCR法中PCR退火温度从70℃开始每个循环降低0.5℃进行20个循环直至达到60℃的退火温度，然后以该退火温度再进行20个循环。


2.根据权利要求1所述的基于TouchDownPCR法的实验动物绿脓杆菌快速检测方法，其特征在于，以绿脓杆菌ETA基因设计合成的特异性引物，包括：
上游引物的核苷酸序列如SEQIDNO：1所示；
下游引物的核苷酸序列如SEQIDNO：2所示。


3.根据权利要求1所述的基于TouchDownPCR法的实验动物绿脓杆菌快速检测方法，其特征在于，DNA样本制备制备时间为10min。


4.根据权利要求1所述的基于TouchDownPCR法的实验动物绿脓杆菌快速检测方法，其特征在于，绿脓杆菌的检测下限为3.35×103个。
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【专利技术属性】
技术研发人员：师长宏，谭邓旭，吴朋朋，白冰，
申请(专利权)人：中国人民解放军空军军医大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61