一种氨基糖苷类抗生素抗性基因检测引物及试剂盒制造技术

本发明专利技术属于试剂盒技术领域，提供一种环境中氨基糖苷类抗生素抗性基因的高通量定量检测引物及试剂盒，包括引物、qPCR反应试剂、smartchip芯片以及wafergen耗材，所述引物由35对氨基糖苷类抗生素抗性基因和内参16SrRNA基因的特异性引物组成，所述wafergen耗材包括384深孔板、qPCR膜、芯片暂封膜、芯片滤膜和芯片qPCR膜，本试剂盒一次可检测144个环境样本。采用wafergen平台进行ARGs检测，很好的解决了目前qPCR方法通量低的缺点。自行编写的自动化脚本，实现快速绝对拷贝数的计算。将以上36对引物预喷在芯片上，然后组装成试剂盒，方便后续环境测检点的快速检测。

【技术实现步骤摘要】
一种氨基糖苷类抗生素抗性基因检测引物及试剂盒
本专利技术属于生物
，具体涉及一种环境中氨基糖苷类抗生素抗性基因的高通量定量检测引物及试剂盒。
技术介绍
抗生素自被发现以来在临床医学、畜牧养殖以及农业病虫害防治等领域的广泛应用已导致耐药病原菌和抗性基因的传播，其危害受到世界范围的重视。2014年世界卫生组织(WorldHealthOrganization，WHO)的报告提出抗生素抗性为21世纪面临的最严峻的人类健康挑战，需要加强全球抗药性的监管。早已有研究提出将抗性基因作为一种新的环境污染物。氨基糖苷类抗生素是光谱、高效抗生素，具有许多适用于临床治疗感染的特征，尤其适合用于治疗由革兰氏阴性菌引起的严重感染，再医疗、农业、养殖业等领域有广泛应用。中国40％的抗生素用于畜牧业上，2008年全国重点城市抗生素市场排序资料显示，氨基糖苷类位列第五，仍是临床上使用量最多的五大抗生素之一。中国是氨基糖苷类抗生素的主要生产国，至2010年，中国链霉素产能已超过2800t，其中出口占总产量的58％，庆大霉素产能突破2500t，其他卡那霉素、奈替米星本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种环境中氨基糖苷类抗生素抗性基因的高通量定量检测引物，其特征在于：包括35对引物对和内参16S rRNA基因序列，其中35对引物对如下：/n（1）扩增aac氨基糖苷类抗生素抗性基因的高通量定量检测引物对其核苷酸序列如SEQID NO:1~2所示；/n（2）扩增aac(6')I1氨基糖苷类抗生素抗性基因的高通量定量检测引物对其核苷酸序列如SEQ ID NO:3~4所示；/n（3）扩增aac(6')-Ib(akaaacA4)-01氨基糖苷类抗生素抗性基因的高通量定量检测引物对其核苷酸序列如SEQ ID NO:5~6所示；/n（4）扩增aac(6')-Ib(akaaacA4)-02氨基糖苷类抗...

【技术特征摘要】
1.一种环境中氨基糖苷类抗生素抗性基因的高通量定量检测引物，其特征在于：包括35对引物对和内参16SrRNA基因序列，其中35对引物对如下：
（1）扩增aac氨基糖苷类抗生素抗性基因的高通量定量检测引物对其核苷酸序列如SEQIDNO:1~2所示；
（2）扩增aac(6')I1氨基糖苷类抗生素抗性基因的高通量定量检测引物对其核苷酸序列如SEQIDNO:3~4所示；
（3）扩增aac(6')-Ib(akaaacA4)-01氨基糖苷类抗生素抗性基因的高通量定量检测引物对其核苷酸序列如SEQIDNO:5~6所示；
（4）扩增aac(6')-Ib(akaaacA4)-02氨基糖苷类抗生素抗性基因的高通量定量检测引物对其核苷酸序列如SEQIDNO:7~8所示；
（5）扩增aac(6')-Ib(akaaacA4)-03氨基糖苷类抗生素抗性基因的高通量定量检测引物对其核苷酸序列如SEQIDNO:9~10所示；
（6）扩增aac(6')-II氨基糖苷类抗生素抗性基因的高通量定量检测引物对其核苷酸序列如SEQIDNO:11~12所示；
（7）扩增aac(6')-Iy氨基糖苷类抗生素抗性基因的高通量定量检测引物对其核苷酸序列如SEQIDNO:13~14所示；
（8）扩增aacA/aphD氨基糖苷类抗生素抗性基因的高通量定量检测引物对其核苷酸序列如SEQIDNO:15~16所示；
（9）扩增aacC氨基糖苷类抗生素抗性基因的高通量定量检测引物对其核苷酸序列如SEQIDNO:17~18所示；
（10）扩增aacC1氨基糖苷类抗生素抗性基因的高通量定量检测引物对其核苷酸序列如SEQIDNO:19~20所示；
（11）扩增aacC2氨基糖苷类抗生素抗性基因的高通量定量检测引物对其核苷酸序列如SEQIDNO:21~22所示；
（12）扩增aacC4氨基糖苷类抗生素抗性基因的高通量定量检测引物对其核苷酸序列如SEQIDNO:23~24所示；
（13）扩增aadA-01氨基糖苷类抗生素抗性基因的高通量定量检测引物对其核苷酸序列如SEQIDNO:25~26所示；
（14）扩增aadA-02氨基糖苷类抗生素抗性基因的高通量定量检测引物对其核苷酸序列如SEQIDNO:27~28所示；
（15）扩增aadA1氨基糖苷类抗生素抗性基因的高通量定量检测引物对其核苷酸序列如SEQIDNO:29~30所示；
（16）扩增aadA-1-01氨基糖苷类抗生素抗性基因的高通量定量检测引物对其核苷酸序列如SEQIDNO:31~32所示；
（17）扩增aadA-1-02氨基糖苷类抗生素抗性基因的高通量定量检测引物对其核苷酸序列如SEQIDNO:33~34所示；
（18）扩增aadA2-01氨基糖苷类抗生素抗性基因的高通量定量检测引物对其核苷酸序列如SEQIDNO:35~36所示；
（19）扩增aadA2-02氨基糖苷类抗生素抗性基因的高通量定量检测引物对其核苷酸序列如SEQIDNO:37~38所示；
（20）扩增aadA2-03氨基糖苷类抗生素抗性基因的高通量定量检测引物对其核苷酸序列如SEQIDNO:39~40所示；
（21）扩增aadA5-01氨基糖苷类抗生素抗性基因的高通量定量检测引物对其核苷酸序列如SEQIDNO:41~42所示；
（22）扩增aadA5-02氨基糖苷类抗生素抗性基因的高通量定量检测引物对其核苷酸序列如SEQIDNO:43~44所示；
（23）扩增aadA9-01氨基糖苷类抗生素抗性基因的高通量定量检测引物对其核苷酸序列如SEQIDNO:45~46所示；
（24）扩增aadA9-02氨基糖苷类抗生素抗性基因的高通量定量检测引物对其核苷酸序列如SEQIDNO:47~48所示；
（25）扩增aadD氨基糖苷类抗生素抗性基因的高通量定量检测引物对其核苷酸序列如SEQIDNO:49~50所示；
（26）扩增aadE氨基糖苷类抗生素抗性基因的高通量定量检测引物对其核苷酸序列如SEQIDNO:51~52所示；
（27）扩增aph氨基糖苷类抗生素抗性基因的高通量定量检测引物对其核苷酸序列如SEQIDNO:53~54所示；
（28）扩增aph(2')-Id-01氨基糖苷类抗生素抗性基因的高通量定量检测引物对其核苷酸序列如SEQIDNO:55~56所示；
（29）扩增aph(2')-Id-02氨基糖苷类抗生素抗性基因的高通量定量检测引物对其核苷酸序列如SEQIDNO:57~58所示；
（30）扩增aph6ia氨基糖苷类抗生素抗性基因的高通量定量检测引物对其核苷酸序列如SEQIDNO:59~60所示；
（31）扩增aphA1(akakanR)氨基糖苷类抗生素抗性基因的高通量定量检测引物对其核苷酸序列如SEQIDNO:61~62所示；
（32）扩增spcN氨基糖苷类抗生素抗性基因的高通量定量检测引物对其核苷酸序列如SEQIDNO:63~64所示；
（33）扩增str氨基糖苷类抗生素抗性基因的高通量定量检测引物对其核苷酸序列如SEQIDNO:65~66所示；
（34）扩增strA氨基糖苷类抗生素抗性基因的高通量定量检测引物对其核苷酸序列如SEQIDNO:67~68所示；
（35）扩增strB氨基糖苷类抗生素抗性基因的高通量...

【专利技术属性】
技术研发人员：高轩，张鸿，李西清，唐聪，王丽达，张慧，
申请(专利权)人：安徽师范大学，安徽微分基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34