一种等温环介导扩增方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种等温环介导扩增方法及其应用，该等温环介导扩增方法，通过设计特异性引物：FIP引物、BIP引物、F3P引物、B3P引物增加扩增靶点，从而使核酸等温扩增过程中产生多倍数的能自我配对继而引发循环扩增的特殊核苷酸结构，提高扩增效率，缩短反应时间，提高灵敏度。本发明专利技术提供的等温环介导扩增方法可以运用于多种病原微生物(例如甲流和新冠)的POCT快速检测，检测简单、快速，灵敏性高。

【技术实现步骤摘要】
一种等温环介导扩增方法及其应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种等温环介导扩增方法及其应用。
技术介绍
环介导等温扩增技术(1oop-mediatedisothermalamplification)是一种简单、快速、特异性强、耗费低的核酸扩增技术，可以在等温条件下一步完成，该方法于2000年由Notomi等建立，现已被广泛应用于病原微生物、胚胎性别鉴定、转基因相关检测等方面。环介导等温扩增(loop-mediatedisothermalamplification,LAMP)是2000年由Notomi开发的一种新颖的核酸扩增技术。该方法是在等温条件下(60-65℃)，分别利用一种链置换DNA聚合酶和识别靶基因6个区域的4条特异性引物，在几十分钟内快速、高效、特异地完成对靶DNA序列的扩增。2002年，Nagamine等在F1-F2和B1-B2之间引入二条环引物LoopF(简称LF)和LoopB(简称LB)，大大加速了整个链置换反应过程，提高了反应检测的敏感度，缩短了LAMP反应的时间，使得整个扩增反应在30分钟内即可完成。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种等温环介导扩增方法，包括步骤：针对靶基因的6个不同区域设计特异性引物，所述特异性引物可以在恒温条件下顺利与靶基因模板结合，发生链置换扩增反应；其特征在于：/n所述特异性引物包括4条混合式引物，所述4条混合式引物如下:/nFIP引物：由F1c区域和F2区域组成，F2区域与靶基因端的F2c区域互补，F1c区域与靶基因的F1c区域序列相同；/nBIP引物：由B1c区域和B2区域组成，B2区域与靶基因的B2c区域互补，B1c区域与靶基因的B1c区域序列相同；/nF3P引物：由F1c区域和F3区域组成，F3区域与靶基因的F3c区域互补，F1c区域与靶基因的Flc区域序列相同；/nB3P引物：由B...

【技术特征摘要】
1.一种等温环介导扩增方法，包括步骤：针对靶基因的6个不同区域设计特异性引物，所述特异性引物可以在恒温条件下顺利与靶基因模板结合，发生链置换扩增反应；其特征在于：
所述特异性引物包括4条混合式引物，所述4条混合式引物如下:
FIP引物：由F1c区域和F2区域组成，F2区域与靶基因端的F2c区域互补，F1c区域与靶基因的F1c区域序列相同；
BIP引物：由B1c区域和B2区域组成，B2区域与靶基因的B2c区域互补，B1c区域与靶基因的B1c区域序列相同；
F3P引物：由F1c区域和F3区域组成，F3区域与靶基因的F3c区域互补，F1c区域与靶基因的Flc区域序列相同；
B3P引物：由B3区域和B1C区域组成，B3区域与靶基因的B3c区域互补，B1C区域与靶基因的B1c区域序列相同。


2.如权利要求1所述的等温环介导扩增方法，其特征在于：所述特异性引物还包括2条非混合式引物，所述2条非混合式引物为环引物LF及环引物LB。


3.如权利要求1所述的等温环介导扩增方法，其特征在于：所述特异性引物组合时的摩尔比为：FIP:B3P:LF＝4:1:1。


4.一种如权利要求1或2或3所述的等温环介导扩增方法在非疾病诊断目的的病原微生物检测中的应用。


5.如权利要求4所述的应用，其特征在于：所述病原微生物为H1N1流感病毒，所述特异性引物的序列为：
H1N1-F3P：TCCTGCAAAGACACTTTCCAGTGGTCGAAACGTACGTTCTT；
H1N1-B3P：TGAGGCTCTCA...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡文凯，雷洋，曾晓昕，史江伟，白佳委，陈凯君，石岩，陈伟川，汪大明，
申请(专利权)人：厦门健康工程与创新研究院，
类型：发明
国别省市：福建;35