一种重组L-阿拉伯糖异构酶LPAI及其构建方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种重组L‑阿拉伯糖异构酶LPAI及其构建方法和应用。在本发明专利技术中，利用基因工程手段，构建了重组L‑阿拉伯糖异构酶LPAI；所述重组L‑阿拉伯糖异构酶LPAI能以D‑半乳糖为底物制备D‑塔格糖中的应用，有效解决D‑塔格糖生产过程中存在的转化效率低下、成本高昂等问题。

【技术实现步骤摘要】
一种重组L-阿拉伯糖异构酶LPAI及其构建方法和应用
本专利技术属于生物工程
，具体涉及一种重组L-阿拉伯糖异构酶LPAI及其构建方法和应用。
技术介绍
D-塔格糖，是一种低热量甜味剂，分子式为C6H12O6，其具有低热量、抗氧化性、抗龋齿性等一系列生理功效，被广泛应用在果汁、乳酸菌饮料、口香糖、减肥食品等食品领域的生产中。并且在医药领域，D-塔格糖还能够应用于生产咳嗽糖浆、口腔消毒剂等。然而D-塔格糖难以进行工业化大规模生产。目前，D-塔格糖的生产主要是化学法和生物法两种。化学法主要是将D-半乳糖在可溶性碱金属盐或碱土金属盐催化剂的作用下与金属氢氧化物发生异构反应，然后用酸或者CO2与氢氧化物结合后形成碳酸钙释放D-塔格糖，再进一步纯化结晶。该方法产生的副产物多、纯化复杂且污染大，难以进行工业化生产。生物法利用L-阿拉伯糖异构酶将D-半乳糖异构化为D-塔格糖，尽管制备成本较低，但需要将Co2+和Mn2+等重金属离子作为辅助因子，生产的D-塔格糖得不到食品安全性的保障，无法作为食品药品添加剂。专利
技术实现思路
针本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组L-阿拉伯糖异构酶LPAI，其氨基酸序列如SEQ ID No:2所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种重组L-阿拉伯糖异构酶LPAI，其氨基酸序列如SEQIDNo:2所示。


2.编码权利要求1所述重组L-阿拉伯糖异构酶的基因，其核苷酸序列如SEQIDNo:1所示。


3.权利要求1所述的一种重组L-阿拉伯糖异构酶LPAI的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）重组L-阿拉伯糖异构酶重组子的构建：
PCR扩增合成目的基因araA，然后将目的基因整合到表达载体pANY1的多克隆位点上，将产物转化大肠杆菌E.coliBL21感受态中，经孵育后涂布抗性平板进行过夜培养，筛选阳性克隆子、PCR扩增验证、提取质粒验证及测序验证成功获得重组L-阿拉伯糖异构酶重组子E.coliBL21/pANY1-araA；
（2）重组L-阿拉伯糖异构酶LPAI的表达和纯化：
将得到的E.coliBL21/pANY1-araA在LB培养基里培养，然后加入诱导剂IPTG，在低温低速下培养过夜，接着收集细胞经超声破碎释放重组蛋白，利用Ni2+-NTI柱纯化，获得纯化后的重组L-阿拉伯糖异构酶LPAI。


4.根据权利要求3所述的重组L-阿拉伯糖异...

【专利技术属性】
技术研发人员：齐向辉，袁娇，张国艳，员君华，张宇飞，王洋，
申请(专利权)人：江苏大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32